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第四军医大学学报 2008年第23期29卷 2115-2118页

作者：刘莉洁石丽娟郭静曹丽华石慧德伟东南大学基础医学院生理学教研室江苏南京210009 南京医科大学生物化学与分子生物学系江苏南京210029

目的:探讨甲胎蛋白(AFP)在大鼠胰腺发育不同阶段的表达情况.方法:采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测AFP在不同发育时期大鼠胰腺中的表达.结果:免疫印迹结果显示在不同发育时期大鼠胰腺组织总蛋白中共检测到Mr分别为72000,60000,48000... 详细信息

目的:探讨甲胎蛋白(AFP)在大鼠胰腺发育不同阶段的表达情况.方法:采用免疫印迹和免疫组织化学方法检测AFP在不同发育时期大鼠胰腺中的表达.结果:免疫印迹结果显示在不同发育时期大鼠胰腺组织总蛋白中共检测到Mr分别为72000,60000,48000和37000的4种AFP亚型,Mr72000亚型是胚胎15.5d(E15.5)至新生(P0)各时期表达丰度最高者,其次是Mr60000亚型.在E15.5胰腺出现有3种大分子AFP亚型,E18.5胰腺4种亚型的丰度各自达到最高,出生后各有降低或消失,成年胰腺中只有Mr60000亚型的痕量表达.免疫组织化学检测结果显示可分泌蛋白AFP于E18.5至P0特异定位于胰腺间充质细胞.结论:AFP显著高表达于胰腺结构与功能趋于完善的关键发育时期,并特异表达于对胰腺发育具有重要调控作用的胰腺间充质细胞,提示AFP表达与胰腺发育可能具有内在联系.

关键词：甲胎蛋白蛋白亚型间充质胰腺

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胰岛素葡萄糖钾盐与胰岛素体外抗炎效果比较研究

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肠外与肠内营养 2008年第4期15卷 193-196页

作者：王占科何凤田许霖水汪仕良雷万生唐小平熊晓平解放军第九四医院创伤研究室江西南昌330002 第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学解放军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的:观察葡萄糖钾盐是否具有协同增强胰岛素对外周血单个核细胞群(PBMCs)分泌促炎细胞因子和抗炎细胞因子的作用。方法:用Ficoll-Hypaque液分离10例健康人PBMC,随机分为胰岛素葡萄糖钾盐(GIK)组、胰岛素(INS)组、葡萄糖钾盐(GK)组和基... 详细信息

目的:观察葡萄糖钾盐是否具有协同增强胰岛素对外周血单个核细胞群(PBMCs)分泌促炎细胞因子和抗炎细胞因子的作用。方法:用Ficoll-Hypaque液分离10例健康人PBMC,随机分为胰岛素葡萄糖钾盐(GIK)组、胰岛素(INS)组、葡萄糖钾盐(GK)组和基础对照(C)组。四组PBMC培养24 h后,加脂多糖继续培养48 h后,离心收集培养上清液。用ELISA法检测TNF-α,IL-6和IL-4,IL-10含量。结果:GIK组和INS组TNF-α,IL-6含量均明显低于C组(P<0.01),IL-4和IL-10含量却均明显高于C组(P<0.01);GIK组IL-4和IL-10含量明显高于INS组(P<0.01),但GIK组TNF-α和IL-6含量降低,与INS组比较无统计学意义(P>0.05)。结论:胰岛素葡萄糖钾盐和胰岛素均能直接抑制内毒素刺激的PBMCs分泌促炎细胞因子,同时提高内毒素刺激的PBMC分泌抗炎细胞因子水平。葡萄糖钾盐对胰岛素促进PBMCs分泌抗炎细胞因子有协同增强作用。

关键词：胰岛素葡萄糖钾盐外周血单个核细胞群细胞因子

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日本看麦娘对高效氟吡甲禾灵的抗性与交互抗性多抗性及其抗性治理的研究

日本看麦娘对高效氟吡甲禾灵的抗性与交互抗性多抗性及其抗性治理...

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作者：董爱斌南京农业大学

学位级别：硕士

本文采集安徽、上海、浙江、江苏等我国油菜田主产区有代表性的日本看麦娘种群,进行对高效氟吡甲禾灵的室内毒力测定,根据相对抗性倍数明确各采集点日本看麦娘对高效氟吡甲禾灵的抗性情况；并以江苏句容油菜田抗高效氟吡甲禾灵的日本看... 详细信息

本文采集安徽、上海、浙江、江苏等我国油菜田主产区有代表性的日本看麦娘种群,进行对高效氟吡甲禾灵的室内毒力测定,根据相对抗性倍数明确各采集点日本看麦娘对高效氟吡甲禾灵的抗性情况；并以江苏句容油菜田抗高效氟吡甲禾灵的日本看麦娘(Alopecurus japonicus)生物型为研究对象,采用培养皿种子生测法,比较了抗性日本看麦娘生物型不同年份及亲子代间对高效氟吡甲禾灵的抗药性水平差异；运用整株测定法与种子生测法测定了抗性日本看麦娘对乙酰辅酶A羧化酶(Acetyl coenzyme A carboxylase,简称ACCase)抑制剂类除草剂芳氧苯氧丙酸类(aryloxyphenoxy propanoate, AOPP)另外几种除草剂和环己烯酮类(cyclohexanedione, CHD)除草剂的抗药性水平,以及对其他不同作用机理除草剂的抗药性情况；采用培养皿生测法,进行各种化学药剂对抗性日本看麦娘的室内毒力测定,筛选出防除效果、经济实用的药剂进行复配剂配方配比筛选试验,以达到提高防除能力、扩大杀草谱的效果,进而延长除草剂的使用寿命并延缓杂草抗性的产生。运用种子生测法对各采集点日本看麦娘种群进行室内毒力测定研究,实验结果表明：江苏金坛市薛坪上阳休闲田日本看麦娘种群ED50。值最小,为6.00μg.m-2,江苏句容油菜田日本看麦娘种群的ED50值最大,为1927.64μg·m-2,相对抗性倍数高达321.27,故本实验将薛坪上阳休闲田日本看麦娘种群确定为敏感生物型,句容油菜田日本看麦娘种群确定为抗性生物型。抗高效氟吡甲禾灵日本看麦娘不同年份及其亲子代间的抗性比较研究表明：采自同一油菜田块的2007、2008、2009年不同年份的抗性日本看麦娘种群对高效氟吡甲禾灵的相对抗性倍数均在320倍以上,达到高抗水平,且呈现逐年升高的趋势。2007年、2008年不用药子代的抗性水平与其各自的亲本相近；经致死中量处理后的日本看麦娘种群2007F1T的抗性水平明显高于其亲代以及亲代未用药处理的子代2007F1C,而与2008年田间亲代的抗性水平相近,经高效氟吡甲禾灵致死中量处理后的日本看麦娘种群2008F1T的抗性水平高于其亲代以及亲代未用药处理的子代2008F1C,而与2009年田间亲代的抗性水平相近。经高效氟吡甲禾灵处理的子代抗性水平明显高于亲本及未处理子代。结果说明该日本看麦娘生物型对高效氟吡甲禾灵的抗性是稳定的,而且在其子代中也能够稳定表现。运用整株测定法与种子生测法,对高效氟吡甲禾灵已产生抗药性的日本看麦娘生物型及敏感生物型进行室内毒力测定,测定该抗性生物型对其他除草剂的抗药性水平。抗性监测结果显示：抗性日本看麦娘对AOPP类其他除草剂已产生了不同程度的抗药性,抗性水平依次为精吡氟禾草灵>精喹禾灵>精恶唑禾草灵>炔草酸>氰氟草酯；对具有相同作用靶标的CHD类除草剂的抗性水平相对较低,与本实验室前期研究结果一致。抗性日本看麦娘对其他不同作用机理除草剂仍旧敏感,未出现抗药性。为了筛选出有效药剂,对以抗高效氟吡甲禾灵日本看麦娘生物型为优势种的油菜田杂草进行防除,本研究首先选用10种不同作用机理的除草剂单剂对抗性日本看麦娘进行室内生物活性测定,抗性日本看麦娘对10种单剂的敏感性大小(根据ED50值)顺序为：乙草胺>氰氟草酯>氟唑黄隆>烯草酮>烯禾定>精恶唑禾草灵>氟乐灵>炔草酸>绿麦隆>异丙隆。综合考虑药剂效果和防除成本,以抗性日本看麦娘和猪殃殃为试验对象,利用等效线法和Gowing法进行复配剂的室内筛选,结果为：烯草酮：炔草酸的配比为1：3,烯草酮：草除灵的配比为1：5。

关键词：日本看麦娘高效氟吡甲禾灵抗药性化学防除

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药物副作用与自由基

药物副作用与自由基

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2008陕西省环境与健康论坛

作者：冯安吉廖鼐第四军医大学毒理学教研室

研究表明,很多药物的毒副作用和过敏反应是通过自由基途径产生的。一、抗生素的副作用与自由基抗生素是抑制和杀灭微生物的一类临床常用药物。不同的抗生素其化学结构亦不相同。最近研究表明,很多抗生素参与产生氧自由基反应。四环素可... 详细信息

研究表明,很多药物的毒副作用和过敏反应是通过自由基途径产生的。一、抗生素的副作用与自由基抗生素是抑制和杀灭微生物的一类临床常用药物。不同的抗生素其化学结构亦不相同。最近研究表明,很多抗生素参与产生氧自由基反应。四环素可以同铁或铜离子结合形成复合

关键词：红细胞氧合血红蛋白毒副作用疟原虫

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腺病毒介导存活素RNA干涉对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

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第四军医大学学报 2008年第19期29卷 1792-1795页

作者：谢富华王润秀李莉萍覃燕梅梁念慈赣南医学院生物化学与分子生物学教研室江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院肾内科江西赣州341000 广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

目的:研究腺病毒介导的RNA干涉(RNA interfer-ence,RNAi)沉默存活素(Survivin)表达后,对MCF-7细胞裸鼠人乳腺癌移植瘤的抑制作用.方法:构建携带survivinshR-NA表达质粒的腺病毒Ad-survivin,并检测其滴度;建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型;将... 详细信息

目的:研究腺病毒介导的RNA干涉(RNA interfer-ence,RNAi)沉默存活素(Survivin)表达后,对MCF-7细胞裸鼠人乳腺癌移植瘤的抑制作用.方法:构建携带survivinshR-NA表达质粒的腺病毒Ad-survivin,并检测其滴度;建立人乳腺癌裸鼠移植瘤模型;将重组腺病毒悬液行瘤周和瘤体注射,观察肿瘤生长情况;剥离瘤体称重并计算药物的抑瘤率;免疫组织化学检测Survivin蛋白表达情况.结果:成功建立人乳腺癌肿瘤模型,移植瘤成功率为90%(18/20);给药后实验组移植瘤的生长速度慢于对照组;病理学检查为浸润性导管癌;剥离肿瘤组织称重发现实验组抑瘤率为28.89%(P<0.05);免疫组化发现实验组Survivin蛋白表达区的吸光度值为(15.63±1.54),明显低于阴性对照组(30.45±6.72)和空白对照组(30.25±6.58),差异均有统计学意义(P<0.05).结论:以腺病毒为载体,以survivin基因为靶点RNAi介导的基因治疗方法有望成为乳腺癌一种新的治疗策略.

关键词： RNA干扰存活素(survivin) 重组腺病毒裸鼠基因治疗

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人67 LR噬菌体结合肽的筛选与功能分析

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医学分子生物学杂志 2008年第6期5卷 476-479页

作者：连继勤戴旭芳卢忠燕王喆甘立霞何凤田第三军医大学生物化学与分子生物学教研室重庆市400038 重庆师范大学特殊教育学院重庆市400047

目的为了获得能够与人67ku层黏连蛋白受体(67 ku laminin receptor,67LR)特异性结合的噬菌体呈现肽。方法以重组人67LR蛋白为诱饵,分别对噬菌体12肽库和环7肽库进行亲和凝胶筛选,ELISA测定所筛选噬菌体克隆与靶蛋白的亲和力,经测序分析... 详细信息

目的为了获得能够与人67ku层黏连蛋白受体(67 ku laminin receptor,67LR)特异性结合的噬菌体呈现肽。方法以重组人67LR蛋白为诱饵,分别对噬菌体12肽库和环7肽库进行亲和凝胶筛选,ELISA测定所筛选噬菌体克隆与靶蛋白的亲和力,经测序分析得到67LR特异性结合噬菌体克隆,并通过293细胞侵袭转移实验测定阳性噬菌体呈现肽对67LR促细胞侵袭作用的抑制效果。结果经4轮筛选共筛到2类新的67LR结合肽,分别具有DXCETCT(X可变)和YRPMXEY(X可变)一致序列。其中DX-CETCT噬菌体呈现肽可显著抑制67LR所诱导的细胞侵袭,且这种抑制作用与YIGSR5肽具有一定互补性。结论成功筛选到2类新的67LR结合肽,其中DXCETCT噬菌体呈现肽可针对性抑制67LR所诱导的细胞侵袭作用。

关键词：噬菌体呈现肽层黏连蛋白受体

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氨基酸描述子VHSEH用于多肽定量序效建模研究

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高等学校化学学报 2008年第11期29卷 2213-2217页

作者：杨善彬夏之宁舒茂梅虎吕凤林张梅吴玉乾李志良重庆大学生物工程学院重庆400044 重庆大学化学化工学院重庆400044 宜宾学院化学与化工系宜宾644000 第三军医大学野战外科研究所重庆400038 重庆大新药业有限公司质检部重庆400700

从20种天然氨基酸的171个物化性质出发,按照疏水、立体和电性特征及氢键贡献将其分类后,分别进行主成分分析,得到一个新描述子VHSEH(Principal component score vector of hydrophobic,steric,electronic properties and,hydrogen bonds contributions).对后叶催产素的结构进行了表征,并以偏最小二乘法及D-优化划分样本建立了PLS定量序效关系模型,得到复相关系数R2分别为0.958和0.957,Q2分别为0.903和0.845,约高于VHSE描述子模型值;对抗菌肽进行了结构表征,建立了PLS和OSC-PLS模型,其R2分别为0.84和0.995,Q2分别为0.546和0.926,较SZOTT描述子结果好;对58个血管紧张素转化酶抑制剂进行QSAM研究,得到R2,Q2及RMS分别为0.877,0.838和0.361.研究结果表明,VHSEH描述子信息量大,物化意义明确,结果更易解释.

关键词：氨基酸描述子(VHSEH) 肽定量序效建模(QSAM) 偏最小二乘法

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Survivin shRNA真核表达载体的构建及其生物学作用

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第四军医大学学报 2008年第12期29卷 1104-1107页

作者：谢富华吴小云王润秀熊亮梁念慈赣南医学院生物化学与分子生物学教研室江西赣州341000 赣南医学院第一附属医院肾病/风湿科江西赣州341000 赣南医学院预防医学教研室江西赣州341000 广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023

目的:构建存活素(survivin)基因短发夹RNA(shR-NA)的表达质粒,为乳腺癌RNAi介导的基因治疗打下基础.方法:设计并合成有小发夹结构的8条survivinshRNA对应模板序列,退火并与pShuttle 1.0-CMV载体重组质粒;将重组质粒转染人乳腺癌细胞MCF-... 详细信息

目的:构建存活素(survivin)基因短发夹RNA(shR-NA)的表达质粒,为乳腺癌RNAi介导的基因治疗打下基础.方法:设计并合成有小发夹结构的8条survivinshRNA对应模板序列,退火并与pShuttle 1.0-CMV载体重组质粒;将重组质粒转染人乳腺癌细胞MCF-7;MTT实验筛选出最有效质粒及其有效浓度,流式细胞术检测细胞周期的变化,经Hoechst染色观察凋亡情况,RT-PCR和Western Blot检测survivin基因的表达情况.结果:成功构建重组质粒并筛选出最有效质粒及其有效浓度;细胞受阻于G2/M期,并通过荧光染色发现有凋亡细胞;survivin基因表达受到抑制.结论:构建的重组质粒能抑制survivin基因的表达,这为研究乳腺癌RNAi介导的基因治疗打下基础.

关键词： survivin RNA干扰 shRNA

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增殖抑制基因HSG与乳腺癌浸润和转移的相关性

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第四军医大学学报 2008年第12期29卷 1128-1131页

作者：付玉环姜广建夏庆安华北煤炭医学院生物科学系生物化学与分子生物学教研室唐山市工人医院病理科河北唐山063000

目的:研究增殖抑制基因(HSG)在乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌发生、发展、浸润和转移的关系.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)方法检测46例乳腺癌组织、27例乳腺增生组织、30例乳腺纤维腺瘤组织和18... 详细信息

目的:研究增殖抑制基因(HSG)在乳腺癌组织中的表达,探讨其与乳腺癌发生、发展、浸润和转移的关系.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白印迹(Western Blot)方法检测46例乳腺癌组织、27例乳腺增生组织、30例乳腺纤维腺瘤组织和18例癌旁正常乳腺组织中HSG mRNA及其蛋白的表达情况.结果:46例乳腺癌组织中HSG mRNA及其蛋白的相对表达水平和表达率分别为(0.87±0.14)和43.48%,(0.67±0.11)和45.65%,其表达率显著低于癌旁正常乳腺组织的(1.28±0.09)和83.33%,(1.17±0.36)和88.89%;乳腺纤维腺瘤的(1.36±0.19)和86.67%,(1.23±0.28)和90.00%;乳腺增生组织的(1.19±0.12)和70.37%,(0.93±0.24)和74.07%(P<0.05).相关性分析表明,HSG的表达与肿瘤的组织学分级、淋巴结转移和ER有关(P<0.05),而与患者的年龄、肿瘤大小和TNM分期等无相关性(P>0.05).结论:乳腺癌患者HSG的低表达,更易发生淋巴结转移,提示HSG不仅与乳腺癌的发生发展有关,而且与乳腺癌的浸润和转移密切相关,可作为预测乳腺癌转移的重要生物学指标.

关键词：基因,抑制乳腺肿瘤逆转录聚合酶链反应印迹法,蛋白质

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高效缺氧诱导表达载体的构建与鉴定

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生物技术通讯 2008年第2期19卷 191-193页

作者：张翔杨洁丁蓉陈锐杜德伟李占亭赵晶杨安钢孙脊峰第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 解放军第四五一医院特诊科陕西西安710054 第四军医大学唐都医院肾脏内科陕西西安710038

目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载... 详细信息

目的:构建缺氧诱导表达载体,以介导报告基因在缺氧环境下的特异、高效表达。方法:通过分子生物学方法,将鼠磷酸甘油酸激酶基因的缺氧应答元件(HRE)和最小CMV(mCMV)启动子重组,构建增强型绿色荧光蛋白(EGFP)或萤光素酶报告基因的可诱导载体;通过酶切鉴定和测序分析,证实载体获得正确的构建;将重组载体转染HeLa细胞,观察EGFP荧光强度并检测萤光素酶活性。结果:HRE/mCMV启动子调控的报告基因载体具有特异和高效的诱导活性。结论:构建了可以进行特异和高效缺氧诱导的报告基因载体,为其进一步的开发和应用奠定了实验基础。

关键词：缺氧应答元件最小CMV启动子报告基因缺氧诱导表达

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