目的构建靶向新生隐球菌MIS1基因的siRNA重组表达载体质粒,并进行鉴定。方法根据GenBank的MIS1基因序列,按照载体要求设计单链引物,克隆到空载体psilencer4.1-CMV neo中,经过LiAc化学法将重组质粒转染到新生隐球菌细胞中并用G418筛选,利用real time PCR鉴定阳性细胞的MIS1基因水平。结果重组表达质粒Psilencer4.1-CMV-si-MIS1经PCR、双酶切及测序鉴定,结果证明重组表达载体构建成功,其能在mRNA水平显著抑制MIS1的表达。结论已成功构建新生隐球菌MIS1基因的siRNA表达载体,为深入研究MIs1在隐球菌相关疾病的发生及发展中的作用提供了技术手段。
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