检索结果-内蒙古大学图书馆

人白细胞介素2、β干扰素基因逆转录病毒载体的构建和在人肾细胞癌及其TIL中的表达

第二军医大学学报 1995年第3期16卷 206-211页

作者：曹广文侯建国李光辉杜平杨文国戚中田吴宗娣仇小芳廖国强夏广彬钱松溪郑家富马永江孔宪涛第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院泌尿外科第二军医大学长征医院实验诊断科

从ｐｃＤ－５．１质粒和ｐＳＰＧＮＨＩＦＮＢ１０质粒分别切下人白细胞介素２（ＨｕＩＬ－２）ｃＤＮＡ和人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ，分别克隆到ｐＮＭＳＭ逆转录病毒载体多克隆位点，经酶切鉴定确定正确插入方向。经ＰＡ... 详细信息

从ｐｃＤ－５．１质粒和ｐＳＰＧＮＨＩＦＮＢ１０质粒分别切下人白细胞介素２（ＨｕＩＬ－２）ｃＤＮＡ和人β干扰素（ＨｕＩＦＮ－β）ｃＤＮＡ，分别克隆到ｐＮＭＳＭ逆转录病毒载体多克隆位点，经酶切鉴定确定正确插入方向。经ＰＡ３１７包装细胞包装成重组病毒，测转染效率。用ＮＩＨ／３Ｔ３细胞测重组病毒感染效率。在８μｇ／ｍｌ鱼精蛋白存在的条件下分别感染人新鲜肾透明细胞癌体外建株细胞以及人肾细胞癌肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ）。经Ｇ４１８选择阳性克隆后测上清表达ＨｕＩＬ－２及ＨｕＩＦＮ－β活性。结果ＨｕＩＬ－２和ＨｕＩＦＮ分别在转ＨｕＩＬ－２基因和ＨｕＩＦＮ－β基因肾细胞癌细胞的表达量达２５０Ｕ／１０６细胞·ｄ－１和６４００Ｕ／１０６细胞·ｄ－１，在经目的基因转染ＴＩＬ细胞中的表达量分别比未经目的基因转染的ＴＩＬ高２～３倍和４～８倍。ＴＩＬ生长状况未有明显改变，抗肿瘤活性未见明显增强。

关键词：白细胞介素 β干扰素转基因肾肿瘤基因表达

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携带HuIL-3基因的人肝癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1997年第1期18卷 9-12页

作者：高军曹广文戚中田杜平仇晓芳杨文国崔龙孙如美第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院普通外科

目的:构建携带人白细胞介素3（HuIL－3）cDNA的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：将HuIL－3cDNA克隆到逆转录病毒载体pMNSM的PL位点，构建SV40早期启动子驱动的载体pMNS－IL－3；从质粒pGEM．7Zf－AFPe中游离人甲胎蛋白（AFP）... 详细信息

目的:构建携带人白细胞介素3（HuIL－3）cDNA的人肝癌特异性逆转录病毒载体。方法和结果：将HuIL－3cDNA克隆到逆转录病毒载体pMNSM的PL位点，构建SV40早期启动子驱动的载体pMNS－IL－3；从质粒pGEM．7Zf－AFPe中游离人甲胎蛋白（AFP）增强子核心序列，先克隆到pMNSM的PL位点上，再将HuIL－3cDNA片段克隆到PL位点上，构建出SV40早期启动子和AFP增强子驱动的人肝癌特异性表达载体PMNSA－IL－3。结论：该载体为肝癌特异性转基因治疗提供了一条途径。

关键词：肝肿瘤逆转录病毒载体 HuIL-3 基因治疗

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减毒沙门菌介导联合基因对腺样囊性癌血管生成的抑制作用

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第二军医大学学报 2005年第6期26卷 609-612页

作者：江中明吕春堂周中华赵平高军第二军医大学长海医院口腔科上海200433 第二军医大学长海医院基础医学部微生物学教研室上海200433

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒沙门菌对腺样囊性癌荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的抑制作用。方法:4周龄BALB/cnunu雄鼠25只,随机分成5组,对照组(PBS组)、单纯减毒沙门菌组(SL7207组)、携带人IFN-γ基... 详细信息

目的:观察构建含有Tip30与人IFN-γ基因的真核表达及共表达质粒的重组减毒沙门菌对腺样囊性癌荷瘤裸鼠肿瘤血管生成的抑制作用。方法:4周龄BALB/cnunu雄鼠25只,随机分成5组,对照组(PBS组)、单纯减毒沙门菌组(SL7207组)、携带人IFN-γ基因减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCIIFN组)、携带Tip30基因减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCITip30组)、携带Tip30与人IFNγ基因的真核共表达质粒的重组减毒沙门菌治疗组(SL7207/pCITip30/IFN组),均于颌下接种腺样囊性癌(ACC2)细胞。10d后对照组裸鼠口服PBS,其余各治疗组口服相应的减毒沙门菌,隔周1次,共3次。然后检测肿瘤生长体积、带瘤存活期、裸鼠体内肿瘤的微血管密度(MVD)。结果:各治疗组比较对照组、携带基因治疗组比较SL7207组、联合基因治疗组比较单基因治疗组肿瘤生长慢、体积小,带瘤存活期长(P<0.05);携带Tip30基因治疗组MVD较其他3组低,联合基因组较携带Tip30单基因组MVD低(P<0.05)。结论:减毒沙门菌载体分别介导Tip30、IFN-γ基因有抑制肿瘤生长作用,联合基因较单基因治疗效果好,有协同作用。

关键词： Tip30 干扰素γ 减毒沙门菌基因疗法腺样囊性癌

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小鼠Alb　e／p序列与肝癌细胞核蛋白之间的相互作用

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海军军医大学学报 1996年第4期17卷 354-357页

作者：杨文国曹广文高军吴宗娣谢苏庆崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院普通外科第二军医大学长海医院消化内科

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合... 详细信息

目的：研究肝癌组织特异性基因治疗的机理。方法：从小鼠肝细胞、肝癌细胞和黑色素瘤细胞中分别提取核蛋白组分和胞浆蛋白，分别与小鼠白蛋白增强子／启动子（Ａｌｂｅ／ｐ）、白蛋白增强子（Ａｌｂｅ）和白蛋白启动子（Ａｌｂｐ）结合。结果：Ｂａｎｄ－Ｓｈｉｆｔ试验和竞争试验发现某些肝癌细胞核蛋白组分能与Ａｌｂｅ／ｐ特异结合，其中与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ特异结合的核蛋白在不同的组分中，而肝癌细胞胞浆蛋白和黑色素瘤细胞核蛋白不能与Ａｌｂｅ／ｐ结合。结论：提示肝癌细胞核中能与Ａｌｂｅ和Ａｌｂｐ作用的核蛋白是应用Ａｌｂｅ／ｐ调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的基础。

关键词：肝肿瘤核蛋白白蛋白增强子启动子

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含CD基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建

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第二军医大学学报 1996年第3期17卷 289-291页

作者：崔龙曹广文王元和屠岳孟荣贵高军仇小芳吴宗娣谢苏庆第二军医大学长海医院普外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院普外科

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠... 详细信息

含ＣＤ基因的人大肠癌特异性逆转录病毒载体的构建崔龙，曹广文，王元和，屠岳，孟荣贵，高军，仇小芳，吴宗娣，谢苏庆关键词大肠癌；胞嘧啶脱氨酶基因；逆转录病毒载体；癌胚抗原；转录调控序列胞嘧啶脱氨酶（ＣＤ）是真菌及某些大肠杆菌等ＤＮＡ嘧啶补救合成途径中的关...

关键词：大肠肿瘤 CD基因逆转录病毒载体病毒载体

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肝癌细胞核蛋白对白蛋白增强子／启动子序列的体外转录调控作用

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第二军医大学学报 1996年第4期17卷 350-353页

作者：曹广文高军谢苏庆杨文国崔龙潘欣杜平戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院消化内科第二军医大学长海医院普通外科

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细... 详细信息

目的：研究肝癌细胞核蛋白调控白蛋白＂持家基因＂转录调控序列对目的基因转录的作用。方法：分别从小鼠肝癌细胞、肝细胞和黑色素瘤细胞中提取核蛋白组分，用于体外启动白蛋白增强子／启动子的转录作用。结果：发现某些肝癌细胞和肝细胞核蛋白组分具有明显的转录作用，而细胞浆蛋白和其他肿瘤核蛋白组分没有转录作用，将同一肝癌细胞某些核蛋白组分合并可使转录活性增强。结论：本研究在基因转录调控水平部分解释了应用白蛋白增强子／启动子调控目的基因于肝癌细胞中特异表达的机理。

关键词：肝肿瘤核蛋白转录分析白蛋白增强子启动子

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TGFβ_1基因对肝癌细胞癌基因表达的体外观察

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 292-294,F003页

作者：封岩曹广文张晓琴高峰孔宪涛第二军医大学长征医院临床免疫中心第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）转入对人肝癌细胞系癌基因表达的影响。方法：ｐＬ（ＴＧＦβ１）ＳＮ和相应重组病毒上清用脂质体转染包装细胞及肝癌细胞，经Ｇ４１８筛选后，进行免疫组化染色，观察癌基因蛋白表达的改变。... 详细信息

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）转入对人肝癌细胞系癌基因表达的影响。方法：ｐＬ（ＴＧＦβ１）ＳＮ和相应重组病毒上清用脂质体转染包装细胞及肝癌细胞，经Ｇ４１８筛选后，进行免疫组化染色，观察癌基因蛋白表达的改变。结果：提取的ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ连接物经酶切鉴定，证明有正向插入及反向插入两类。病毒上清ＴＧＦβ１含量在１６～４１ｎｇ／ｍｌ，套式ＰＣＲ后均出现２９０ｂｐ条带。转基因后肝癌细胞癌基因蛋白免疫组化染色结果：ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｍｅｔ及ｒａｓ癌基因表达，反向ＴＧＦβ１转入者为（＋）～（），而正向转入均为（－）。免疫组化检测其ＴＧＦβ１表达蛋白，空白对照染色（±），正向则为（）。结论：正向插入的ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ可使癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｍｅｔ及ｒａｓ表达减少，提示它在体外对肝癌细胞具有负调控作用。

关键词：肝肿瘤癌基因转化生长因子 TGFβ1

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灵杆菌细胞壁成分CWF－Ⅰ的提取、纯化以及体外抗肿瘤作用

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第二军医大学学报 1995年第5期16卷 429-433页

作者：焦炳华赵虎周凯余伟明周丙荣许伟群王梁华第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院实验诊断科福建医学院微生物学教研室

应用有机溶剂（氯仿－甲醇－石油醚，４∶１∶１，２０ｇ／１５０ｍｌ）萃取法从干燥的灵杆菌（粘质沙雷菌Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）或其粗制内毒素中提取得到了一种在体外具有显著抗肿瘤作用的非内毒素成分（Ｃｅｌｌｗ... 详细信息

应用有机溶剂（氯仿－甲醇－石油醚，４∶１∶１，２０ｇ／１５０ｍｌ）萃取法从干燥的灵杆菌（粘质沙雷菌Ｓｅｒｒａｔｉａｍａｒｃｅｓｃｅｎｓ）或其粗制内毒素中提取得到了一种在体外具有显著抗肿瘤作用的非内毒素成分（Ｃｅｌｌｗａｌｌｆｒａｃｔｉｏｎ－Ⅰ，ＣＷＦ－Ⅰ），该成分进一步经制备性硅胶Ｇ薄层层析分离可得到层析纯的单一ＣＷＦ－Ⅰ成分。应用该成分对肿瘤细胞的杀伤作用进行了光镜，以及扫描和透射电镜等形态学研究。

关键词：粘质沙雷菌细胞壁成分分离提纯抗肿瘤药

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Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病基因诊断与基因突变情况的调查

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第二军医大学学报 1999年第3期20卷 137-141页

作者：王立明闵志廉朱有华齐隽缪为民陈建鹤焦炳华第二军医大学长征医院泌尿外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

（１）建立Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤⅠ）的基因诊断方法；（２）寻找具有普遍意义的突变方式，以优化基因诊断。方法：（１）采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ方法，调查ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端单拷贝区突变情况；（... 详细信息

（１）建立Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤⅠ）的基因诊断方法；（２）寻找具有普遍意义的突变方式，以优化基因诊断。方法：（１）采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ方法，调查ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端单拷贝区突变情况；（２）ＰＣＲ扩增分析微卫星ＳＭ７。结果：将ＡＨ４与１６例患者的基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交后，均显示有正常的１５ｋｂ的杂交片段。对２７例患者ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端ＡＨ４和ＪＨ１４两探针间的５．７２ｋｂ基因组ＤＮＡ行ＰＣＲ扩增后，未发现５．５ｋｂ基因组ＤＮＡ缺失。１０９名正常人ＳＭ７ＰＣＲ扩增显示，其多态信息含量（ＰＩＣ）值为０．７６，３个家系的ＳＭ７等位片段与疾病基因连锁关系明确。结论：在汉族中：（１）ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端单拷贝区无常见性大片段基因组ＤＮＡ缺失类突变；（２）ＳＭ７所含ＰＩＣ较高，用其可在７０％～８０％的ＡＤＰＫＤⅠ家系中作出基因诊断。

关键词：常染色体显性囊性肾基因诊断基因突变

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胞嘧啶脱氨酶基因的体外前药转换胃癌细胞的杀伤作用研究

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中华消化杂志 1998年第2期18卷 72-75页

作者：程慧玉张忠兵李石张兴荣朱玉平第二军医大学长征医院消化内科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的建立胃癌组织细胞自杀基因体外前药转换基因治疗方法。方法和结果首先将含ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体ｐＣＤ２在ＰＡ３１７细胞中包装、筛选、收获病毒上清及进行病毒滴度测定后，体外转导Ｍ８５胃癌细胞，以ＰＣＲ方法证明ＣＤ... 详细信息

目的建立胃癌组织细胞自杀基因体外前药转换基因治疗方法。方法和结果首先将含ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体ｐＣＤ２在ＰＡ３１７细胞中包装、筛选、收获病毒上清及进行病毒滴度测定后，体外转导Ｍ８５胃癌细胞，以ＰＣＲ方法证明ＣＤ基因稳定整合到宿主细胞基因组中，Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析了ＣＤ基因的表达；转基因胃癌细胞在前药５－ＦＣ作用下呈现明显的选择性生长抑制效应。且观察到强效的“旁观者效应”。结论为胃癌组织基因治疗提供了极有意义的资料。

关键词：胃肿瘤基因疗法胞嘧啶脱氨酶

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