检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 1999年第5期20卷 280-282页

作者：张晓琴曹广文侯建国戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长海医院泌尿外科

目的：研究人肾细胞癌（ＲＣＣ）原代细胞生物学特性及其癌基因的表达情况。方法：应用改良的原代肿瘤细胞分离法分离培养７例人ＲＣＣ原代细胞。应用染色体核型分析和免疫组化方法，分析原代细胞核型以及癌基因与抑癌基因的表达。结果... 详细信息

目的：研究人肾细胞癌（ＲＣＣ）原代细胞生物学特性及其癌基因的表达情况。方法：应用改良的原代肿瘤细胞分离法分离培养７例人ＲＣＣ原代细胞。应用染色体核型分析和免疫组化方法，分析原代细胞核型以及癌基因与抑癌基因的表达。结果：用本法培养的原代细胞比其他常规方法所得细胞既多且纯。所培养的人ＲＣＣ原代细胞的癌基因表达分析发现ｂｃｌ－２，ｃ－ｅｒｂＢ－２，ｃ－ｍｅｔ，表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）有轻度至中度表达，而ｐ５３没有表达。结论：人ＲＣＣ原代培养及其癌基因表达检测，为应用原代ＲＣＣ所开展ｅｘｖｉｖｏ的ＲＣＣ基因治疗打下了初步的基础。

关键词：肾肿瘤原代培养癌基因肾细胞癌

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献血员中TT病毒感染的检测及序列分析

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第二军医大学学报 1999年第9期20卷 605-607,F003页

作者：任浩钱宝华朱分禄倪武戚中田第二军医大学基础医学部微生物学教研室上海200433 第二军医大学长海医院血库第二军医大学长征医院感染科

目的：研究ＡＬＴ正常的献血员中ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）的感染情况，探讨ＴＴＶ感染的传播途径和致病性。方法：设计ＴＴＶ保守区域的特异性引物，聚合酶链反应（Ｐ ... 详细信息

目的：研究ＡＬＴ正常的献血员中ＴＴＶ（ｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｄｖｉｒｕｓ）的感染情况，探讨ＴＴＶ感染的传播途径和致病性。方法：设计ＴＴＶ保守区域的特异性引物，聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测１２０例ＡＬＴ正常的献血员，对１例ＴＴＶＤＮＡ阳性标本（ＴＴＶＤ０２６）进行ＰＣＲ产物测序，并与已知ＴＴＶ核苷酸序列比较同源性。结果：１２０例ＡＬＴ正常献血员中有２０例为ＴＴＶＤＮＡ阳性，感染率为１６．７％。同源性分析表明ＴＴＶＤ０２６与ＴＡ２７８，ＧＨ１，ＴＴＶＣＨＮ１和ＴＴＶＣＨＮ２的核苷酸同源性分别为９９％，９９％，９９％和８９％。结论：ＡＬＴ正常的献血员中存在ＴＴＶ的感染；ＴＴＶＤ０２６与ＴＴＶＴＡ２７８，ＧＨ１，ＴＴＶＣＨＮ１和ＴＴＶＣＨＮ２可能属于同一个基因型；输血可能是ＴＴＶ传播的主要途径。

关键词：肝炎病毒 TT病毒序列分析献血员 DNA病毒

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TGFβ_1基因对肝癌细胞癌基因表达的体外观察

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 292-294,F003页

作者：封岩曹广文张晓琴高峰孔宪涛第二军医大学长征医院临床免疫中心第二军医大学基础医学部微生物学教研室

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）转入对人肝癌细胞系癌基因表达的影响。方法：ｐＬ（ＴＧＦβ１）ＳＮ和相应重组病毒上清用脂质体转染包装细胞及肝癌细胞，经Ｇ４１８筛选后，进行免疫组化染色，观察癌基因蛋白表达的改变。... 详细信息

目的：观察转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）转入对人肝癌细胞系癌基因表达的影响。方法：ｐＬ（ＴＧＦβ１）ＳＮ和相应重组病毒上清用脂质体转染包装细胞及肝癌细胞，经Ｇ４１８筛选后，进行免疫组化染色，观察癌基因蛋白表达的改变。结果：提取的ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ连接物经酶切鉴定，证明有正向插入及反向插入两类。病毒上清ＴＧＦβ１含量在１６～４１ｎｇ／ｍｌ，套式ＰＣＲ后均出现２９０ｂｐ条带。转基因后肝癌细胞癌基因蛋白免疫组化染色结果：ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｍｅｔ及ｒａｓ癌基因表达，反向ＴＧＦβ１转入者为（＋）～（），而正向转入均为（－）。免疫组化检测其ＴＧＦβ１表达蛋白，空白对照染色（±），正向则为（）。结论：正向插入的ＴＧＦβ１ｃＤＮＡ可使癌基因ｃ－ｍｙｃ，ｃ－ｍｅｔ及ｒａｓ表达减少，提示它在体外对肝癌细胞具有负调控作用。

关键词：肝肿瘤癌基因转化生长因子 TGFβ1

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Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病基因诊断与基因突变情况的调查

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第二军医大学学报 1999年第3期20卷 137-141页

作者：王立明闵志廉朱有华齐隽缪为民陈建鹤焦炳华第二军医大学长征医院泌尿外科第二军医大学基础医学部微生物学教研室

（１）建立Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤⅠ）的基因诊断方法；（２）寻找具有普遍意义的突变方式，以优化基因诊断。方法：（１）采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ方法，调查ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端单拷贝区突变情况；（... 详细信息

（１）建立Ⅰ型常染色体显性遗传多囊肾病（ＡＤＰＫＤⅠ）的基因诊断方法；（２）寻找具有普遍意义的突变方式，以优化基因诊断。方法：（１）采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交和ＰＣＲ方法，调查ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端单拷贝区突变情况；（２）ＰＣＲ扩增分析微卫星ＳＭ７。结果：将ＡＨ４与１６例患者的基因组ＤＮＡ进行Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交后，均显示有正常的１５ｋｂ的杂交片段。对２７例患者ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端ＡＨ４和ＪＨ１４两探针间的５．７２ｋｂ基因组ＤＮＡ行ＰＣＲ扩增后，未发现５．５ｋｂ基因组ＤＮＡ缺失。１０９名正常人ＳＭ７ＰＣＲ扩增显示，其多态信息含量（ＰＩＣ）值为０．７６，３个家系的ＳＭ７等位片段与疾病基因连锁关系明确。结论：在汉族中：（１）ＡＤＰＫＤⅠ基因３′端单拷贝区无常见性大片段基因组ＤＮＡ缺失类突变；（２）ＳＭ７所含ＰＩＣ较高，用其可在７０％～８０％的ＡＤＰＫＤⅠ家系中作出基因诊断。

关键词：常染色体显性囊性肾基因诊断基因突变

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血透患者血清庚型肝炎病毒RNA及抗体检测

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第二军医大学学报 1999年第5期20卷 286-288页

作者：许臻缪晓辉戚中田崔晓红潘卫朱诗应第二军医大学基础医学部微生物学教研室第二军医大学长征医院肾内科第二军医大学长征医院感染科

目的：了解血透患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法：收集５７份血透患者血清标本，根据ＨＧＶＲＮＡ保守片段５′非编码区序列，设计了两对引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ，以及ＥＩ... 详细信息

目的：了解血透患者庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染率及与其他肝炎病毒重叠感染的情况。方法：收集５７份血透患者血清标本，根据ＨＧＶＲＮＡ保守片段５′非编码区序列，设计了两对引物，采用逆转录巢式ＰＣＲ扩增ＨＧＶＲＮＡ，以及ＥＩＡ法检测ＨＧＶＩｇＧ抗体。同时还检测了ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＩｇＧ抗体。结果：５７份标本中，４份ＨＧＶＲＮＡ阳性（７．０％），２份ＨＧＶＩｇＧ抗体阳性（３．５％）。ＨＧＶＲＮＡ与ＨＧＶＩｇＧ抗体呈“分离”现象。４份ＨＧＶＲＮＡ阳性标本中２份为ＨＢＶＤＮＡ阳性，２份为ＨＣＶＩｇＧ抗体阳性；其中１份标本ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＩｇＧ抗体均为阳性。结论：血透患者ＨＧＶ感染率高于健康献血员和正常人群，ＨＧＶ可与ＨＢＶ和ＨＣＶ重叠感染。

关键词：血液透析庚型肝炎病毒重叠感染 RNA

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HBV基因定量分析技术的原理和方法

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肝脏 1999年第1期4卷 46-48页

作者：缪晓辉戚中田第二军医大学长征医院感染科 200003 微生物学教研室

一种理想的基因定量技术，除了在技术方法上力求完善外，还应能够检测各种形式的ＨＢＶＤＮＡ，包括各种亚型及ＨＢＶＤＮＡ突变株。事实上，现有任何技术手段均无法完全满足上述要求。目前比较成熟的基因定量分析技术可分为两大类，即... 详细信息

一种理想的基因定量技术，除了在技术方法上力求完善外，还应能够检测各种形式的ＨＢＶＤＮＡ，包括各种亚型及ＨＢＶＤＮＡ突变株。事实上，现有任何技术手段均无法完全满足上述要求。目前比较成熟的基因定量分析技术可分为两大类，即分子杂交法和ＰＣＲ法。总体看来，两类技术各有所长，又各有不足，可互相弥补，配合使用。以下选择两类分析技术中具有代表性者，以及目前被公认比较合理和完善者，介绍其基本原理和操作方法。一、分子杂交定量分析技术（一）分支链ＤＮＡ信号放大技术（ｂＤＮＡ）该技术最初由美国Ｃｈｉｒｏｎ公司Ｕｒｄｅａ等人建立。最早的论文发表于１９８７年ＧＥＮＥ杂志［１］。当时并无“分支ＤＮＡ”的提法，只是强调了该技术有别于印迹杂交技术和无放射性核素掺入。１９８９年又发表一了题为“钗子、梳子和ＤＮＡ”（ＦｏｒｋｓａｎｄＣｏｍｄｓａｎｄＤＮＡ）的论文［２］，公开了他们合成分支寡核苷酸的技术方法。至此，分支链ＤＮＡ信号放大技术，即ｂＤＮＡ逐渐为人们熟知。１９９５年该公司Ｈｅｎｄｒｉｃｋ等总结性地报告了ｂＤＮＡ技术用于ＨＢＶ感染者血ＨＢＶＤＮＡ定量分析的结果［３］，同时，商品化诊断试剂盒问世，标志着ｂＤＮＡ技术的成熟。ｂＤＮＡ系统的组成...

关键词： HBV 基因定量分析原理方法 PCR 分子杂交

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维持性血液透析患者的丙型病毒性肝炎感染率

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上海医科大学学报 1999年第5期26卷 313-317页

作者：汪年松竺艳娟潘卫方芳廖履坦上海市第六人民医院肾内科上海200233 上海医科大学中山医院肾内科上海200032 第二军医大学微生物学教研室上海200433

目的　评价血液透析(血透)患者丙型肝炎病毒(HCV)感染状况、HCV阳转率及危险因素。方法　采用第2代酶链免疫吸附试验(ELISA2,和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测62例血透患者血清抗HCV和HCVRNA,采用ELISA2随访1995年6月～1996年12月间199... 详细信息

目的　评价血液透析(血透)患者丙型肝炎病毒(HCV)感染状况、HCV阳转率及危险因素。方法　采用第2代酶链免疫吸附试验(ELISA2,和逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测62例血透患者血清抗HCV和HCVRNA,采用ELISA2随访1995年6月～1996年12月间199例血透患者HCV阳转情况。结果　62例患者中,抗HCVIgM阳性27例(43.6%),抗HCVIgG阳性29例(46.8%),HCVRNA阳性34例(54.8%),3项至少1项阳性37例(59.7%)。HCV阳性组与阴性组相比,两组在性别、年龄、肾功能、HBV标志、EPO应用、CAPD史无明显差异,而在平均透时间、输血史、ALT异常、肾移植史方面有显著性差异。1995年6月抗HCV阳性率为58.7%,每隔半年的阳性率分别为53.7%、54.8%和50.0%。在18个月随访期间,31例阳转;156例随访1～6月,阳转14例(8.9%),67例随访7～12月,15例(22.4%)阳转,6例随访13～18月,2例(33.3%)阳转;2例阳转并转为肝硬化。结论　血透患者中HCV感染严重,输血为血透患者感染HCV的主要途径,但也存在医源性传播的可能。

关键词：血液透析丙型肝炎病毒输血医源性传播

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重组TGFβ_1基因转染后细胞上清的检测

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海军医学杂志 1999年第1期17卷 36-39页

作者：封岩曹广文张晓琴程振球王发锁汤琰孔宪涛海军医学研究所上海市200433 第二军医大学微生物学教研室长征医院全军临床免疫中心

目的 :观察TGFβ1基因转入能否成功。方法 :用pL(TGFβ1)SN经脂质体转染包装细胞 ,G418筛选 ,对阳性病毒上清检测TGFβ1表达蛋白及Neo基因 ,转染后的SMMC 772 1细胞进行免疫组化染色。结果 :阳性上清ELISA检测 ,TGFβ1含量为 16～ 41ng/... 详细信息

目的 :观察TGFβ1基因转入能否成功。方法 :用pL(TGFβ1)SN经脂质体转染包装细胞 ,G418筛选 ,对阳性病毒上清检测TGFβ1表达蛋白及Neo基因 ,转染后的SMMC 772 1细胞进行免疫组化染色。结果 :阳性上清ELISA检测 ,TGFβ1含量为 16～ 41ng/ml;套式RT -PCR检测Neo基因 ,第 2轮后全部出现 2 90bp条带 ;TGFβ1免疫组化染色显示 :空白对照± ,正义转染 ++。结论 :TGFβ1基因转染效果确实可靠。

关键词：转化生长因子β1 基因逆转录病毒载体检测

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人附睾组织形态定量测定

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泰山医学院学报 1999年第3期20卷 214-218页

作者：徐涛魏然闵志廉朱有华中国人民解放军第88医院泌尿外科 271000 泰山医学院微生物学教研室上海第二军医大学附属长征医院泌尿外科

目的　为研究正常青年男性附睾的组织形态特征。方法　对１５名有生育能力意外死亡的青年男性捐献者的１５枚新鲜右侧附睾做石腊切片、ＨＥ染色，利用体视学原理，通过显微镜测量的方法，在附睾５个不同区段进行了组织形态定量测定... 详细信息

目的　为研究正常青年男性附睾的组织形态特征。方法　对１５名有生育能力意外死亡的青年男性捐献者的１５枚新鲜右侧附睾做石腊切片、ＨＥ染色，利用体视学原理，通过显微镜测量的方法，在附睾５个不同区段进行了组织形态定量测定。结果　得出了附睾管道系统的管腔直径、上皮高度、纤毛长度，以及上皮、管腔和管间的间质组织的体密度（ＶＤ）等参数。结论　人附睾组织形态定量测定结果。

关键词：形态定量附睾人组织形态

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TT病毒基因组DNA是线性的吗?

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肝脏 1999年第2期 126-126页

作者：缪晓辉戚中田第二军医大学微生物学教研室 200003上海第二军医大学长征医院感染科

1997年,日本学者Nishzama和Okamoto等报告用差异显示分析技术(RDA)首次从1例输血后肝炎患者血清中分离别一种新的DNA病毒,不久又报告,该病毒DNA为单链、线性、无包膜、长约3739bp的细小病毒科(Parvoviridaefamily)成员,并命名为TT病毒... 详细信息

1997年,日本学者Nishzama和Okamoto等报告用差异显示分析技术(RDA)首次从1例输血后肝炎患者血清中分离别一种新的DNA病毒,不久又报告,该病毒DNA为单链、线性、无包膜、长约3739bp的细小病毒科(Parvoviridaefamily)成员,并命名为TT病毒。自此,TT病毒受到广泛关注。随着有关该病毒分子生物学和流行病学特征以及致病性等问题的研究不断深入,各种争论以及不同的研究结果也随之产生。最近,有人用很有说服力的研究资料说明TT病毒的基因组结构呈环状而非线性;基因组全长为3852bp,比Okamoto等报告的多117bp;在亲缘关系上与环状病毒(Circoviridae)更近,但也可能是一个完全独立的新种。如果TT病毒基因组的确为环状,那么,它的某些分子生物学性状必定与线性病毒有较大差异,如二级结构的复杂性、滚环状复制、可重叠利用的读码框架(如同我们熟知的乙型肝炎病毒基因)等。

关键词： DNA 环状基因组染色体组 TT

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