检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2015年第8期31卷 1077-1080页

作者：于江天卜歆赵虎李霞苏金第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的研究泛素分子中哪些位点的赖氨酸(Lys)残基参与了具有促炎效应的膜受体盘状结构域受体2(DDR2)的多聚泛素化修饰。方法将DDR2、Cbl-b及泛素分子不同位点Lys的突变体共转染HEK293T细胞,以胶原蛋白刺激细胞诱导DDR2发生活化。利用免疫... 详细信息

目的研究泛素分子中哪些位点的赖氨酸(Lys)残基参与了具有促炎效应的膜受体盘状结构域受体2(DDR2)的多聚泛素化修饰。方法将DDR2、Cbl-b及泛素分子不同位点Lys的突变体共转染HEK293T细胞,以胶原蛋白刺激细胞诱导DDR2发生活化。利用免疫沉淀方法分离细胞中的DDR2,Western blot法检测DDR2与不同泛素分子的偶联情况。结果仅保留27位Lys的泛素分子偶联到DDR2分子上的能力与野生型泛素分子相接近,保留33位Lys的泛素分子有较微弱与DDR2偶联的能力。27位Lys突变可使泛素分子彻底丧失与DDR2相偶联的能力,而33位Lys突变使得泛素分子偶联DDR2的能力部分丧失。结论 Cbl-b介导的DDR2的多泛素化修饰主要是通过泛素分子的Lys27偶联的,Lys33可能也部分参与了DDR2的泛素化修饰。

关键词：盘状结构域受体2 泛素化泛素泛素连接酶 Cbl-b

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人CXCR1基因Tet-on可调控载体的构建及其在NIH3T3中的表达

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细胞与分子免疫学杂志 2006年第3期22卷 280-282页

作者：史曼药立波王立峰李福洋苏金张健李霞刘新平第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的构建CXCR1-pTREhyg可调控性真核表达载体,检测其在NIH3T3细胞内的表达情况。方法通过RT-PCR的方法从原代培养的类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞中克隆得到CXCR1的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTREhyg载体中。用脂质体将pTet-o... 详细信息

目的构建CXCR1-pTREhyg可调控性真核表达载体,检测其在NIH3T3细胞内的表达情况。方法通过RT-PCR的方法从原代培养的类风湿性关节炎患者滑膜成纤维细胞中克隆得到CXCR1的全长基因,测序正确后将其亚克隆入pTREhyg载体中。用脂质体将pTet-on质粒和CXCR1-pTRE-hyg共转染入NIH3T3细胞,以不同浓度的强力霉素诱导,用Westernblot检测CXCR1蛋白表达水平。结果Westernblot显示,我们所构建的可调控性表达载体能在NIH3T3细胞内表达,不同浓度药物诱导的CXCR1表达水平明显不同;同时还观察到IL-8刺激后,NIH3T3细胞中Erk-1/2磷酸化水平升高。结论成功构建了CXCR1-pTREhyg真核表达载体,并可在NIH3T3细胞内表达。经IL-8刺激的转染NIH3T3细胞中Erk-1/2活性发生变化。为进一步观察CXCR1与类风湿性关节炎损伤之间的关系奠定了基础。

关键词： CXCR1 可调控表达载体类风湿性关节炎

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血管紧张素原和血管紧张素转化酶基因在大鼠心血管组织中的表达

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航天医学与医学工程 2002年第1期15卷 47-50页

作者：孟庆军张乐宁李剑马进张立藩第四军医大学:航空航天生理学教研室陕西西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的阐明心血管组织是否存在局部肾素 -血管紧张素系统 (localrenin angiotensinsystem ,L RAS)主要成份的表达。方法提取大鼠左室心肌、基底动脉、颈总动脉、腹主动脉和股动脉组织总RNA ,以G3PDH基因表达作为内参照 ,用逆转录酶 -多聚... 详细信息

目的阐明心血管组织是否存在局部肾素 -血管紧张素系统 (localrenin angiotensinsystem ,L RAS)主要成份的表达。方法提取大鼠左室心肌、基底动脉、颈总动脉、腹主动脉和股动脉组织总RNA ,以G3PDH基因表达作为内参照 ,用逆转录酶 -多聚酶链式反应 (reversetranscriptase polymerasechainreaction ,RT PCR)方法 ,半定量检测上述组织血管紧张素原 (angiotensinogen ,AGT)和血管紧张素转化酶 (angiotensin convertingenzyme ,ACE)基因表达水平。结果大鼠左室心肌、基底动脉、颈总动脉、腹主动脉和股动脉组织均有AGT和ACEmRNA表达。ACEmRNA在基底动脉和腹主动脉组织的表达水平显著高于颈总动脉和股动脉 ,而不同血管间AGTmRNA的表达水平则无显著差别。结论生理条件下大鼠心肌和不同部位大、中动脉血管组织均存在局部RAS主要成份AGT和ACE基因的表达 ,支持心血管组织存在L

关键词：肾素-血管紧张素系统血管紧张素原血管紧张素转化酶基因表达心血管组织

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OPG/RANKL/RANK系统与骨破坏性疾病

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生物工程学报 2003年第6期19卷 655-660页

作者：刘继中纪宗玲陈苏民第四军医大学西京医院全军骨科研究所西安710032 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安710032

近年来发现的OPG RANKL RANK系统在破骨细胞生成中起着至关重要的作用 ,是骨骼生理研究领域的重大进展。成骨细胞、骨髓基质细胞、激活的T淋巴细胞表达RANKL ,与破骨细胞前体细胞或成熟破骨细胞表面上的RANK结合后 ,促进破骨细胞的分化... 详细信息

近年来发现的OPG RANKL RANK系统在破骨细胞生成中起着至关重要的作用 ,是骨骼生理研究领域的重大进展。成骨细胞、骨髓基质细胞、激活的T淋巴细胞表达RANKL ,与破骨细胞前体细胞或成熟破骨细胞表面上的RANK结合后 ,促进破骨细胞的分化及骨吸收活性。成骨细胞及骨髓基质细胞分泌表达OPG可与RANKL竞争性结合 ,从而阻断RANKL与RANK之间的相互作用。体内多种激素或因子通过影响骨髓微环境内的OPG RANKL比率来调节骨代谢。此外 ,乳腺上皮细胞表达有RANK ,孕期在性激素的诱导下可表达RANKL ,OPG RANKL RANK系统在孕期乳腺发育以及母体向胎儿的钙转运过程中发挥重要作用。阻断RANKL RANK通路有望给骨质疏松、类风湿关节炎及癌症骨转移等骨破坏性疾病的治疗开辟新的途径。进一步研究应了解OPG RANKL RANK系统与其它信号传导途径的关系 ,重视骨骼、免疫及内分泌系统之间的相互作用。目前 ,开发与OPG功能相似或促进其表达的合成药物有可能成为具有良好经济效益和社会效益的产业。

关键词：骨保护素破骨细胞生成 T细胞骨吸收骨破坏性疾病

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重组人Era蛋白的可溶性表达、纯化及生物学活性测定

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细胞与分子免疫学杂志 2008年第6期24卷 560-563页

作者：吴元明张晓楠邢小红张俊杰陈南春陈苏民第四军医大学DNA分型中心第四军医大学基础部生物化学教研室陕西西安710032

目的:为了得到可溶性表达的人Era(hEra)蛋白,并检测其生物学活性。方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMAL-p2x中。pMAL-hEra转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:pMAL-hEra载体表达的融... 详细信息

目的:为了得到可溶性表达的人Era(hEra)蛋白,并检测其生物学活性。方法:把人era的cDNA基因从pUC19质粒亚克隆入表达质粒pMAL-p2x中。pMAL-hEra转化大肠杆菌TB1,用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达。结果:pMAL-hEra载体表达的融合蛋白是以可溶状态存在,表达量占菌体总蛋白的23.9%。再利用直链淀粉亲和色谱柱对表达的融合蛋白进行纯化,接着用因子X将融合部分切除,但切除后的hEra蛋白不稳定,随着时间的延长而被降解。活性测定结果表明人Era蛋白能与GTP结合,并具有GTP酶的活性。结论:可溶性表达了人Era蛋白,并用体外实验证实人Era蛋白是一种G蛋白,这对人era基因的功能研究具有重要意义。

关键词：人Era 可溶性表达生物活性测定

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转染IL－2cDNA在膀胱肿瘤细胞表达及其生物学行为的实验研究

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中华外科杂志 1996年第2期34卷 110-112页

作者：靳风烁于茂生惠宏襄李鸣金明辛建国第三军医大学大坪医院泌尿外科第四军医大学西京医院泌尿外科第四军医大学生物化学教研室

作者报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表达及对其生物学行为的影响。用磷酸钙沉淀法把ＩＬ－２ｃＤＮＡ转入Ｔ２４细胞，经原位杂交、免疫细胞化学和生物学活性测定，证明... 详细信息

作者报道逆转录病毒载体介导的人白细胞介素－２（ＩＬ－２）ｃＤＮＡ在人源性膀胱肿瘤细胞Ｔ２４中的表达及对其生物学行为的影响。用磷酸钙沉淀法把ＩＬ－２ｃＤＮＡ转入Ｔ２４细胞，经原位杂交、免疫细胞化学和生物学活性测定，证明转染成功并表达有生物活性的ＩＬ－２，观察４０天，其分泌ＩＬ－２的量为８～３２ｕ／ｍｌ／１×１０５细胞／２４小时。转染并表达ＩＬ－２ｃＤＮＡ，对Ｔ２４的生长曲线无明显影响。但在软琼脂中细胞体积减小。

关键词：膀胱肿瘤白细胞介素基因转录

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用消减杂交技术克隆人成骨样细胞机械牵张力敏感基因的研究

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华西口腔医学杂志 2004年第4期22卷 278-280页

作者：冯雪丁寅段银钟林珠欧阳为明蒲勤第四军医大学秦都口腔医院正畸科第四军医大学免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学生物化学教研室陕西西安710032

目的　对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法　对人成骨样细胞Saos_2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周期分钟 ,加载 12h后分别提取牵张力作用后Saos_2细胞及未作处理的正常Saos_2对照细胞的mRN... 详细信息

目的　对人成骨样细胞机械牵张力敏感基因进行克隆研究。方法　对人成骨样细胞Saos_2进行二维方向上的加载 ,变形幅度为 12 % ,牵拉频率为 6周期分钟 ,加载 12h后分别提取牵张力作用后Saos_2细胞及未作处理的正常Saos_2对照细胞的mRNA ,反转录制备cDNA ,将cDNA进行消减杂交 ,构建加载细胞与未加载细胞的差异表达基因的扣除cDNA文库 ,克隆后进行序列测定。结果　克隆到的基因片段中 ,功能已知基因片段 15个 ,功能未知基因片段 2个 ,其中牵张力敏感基因 1(SSG1)位于 9号染色体上 ,功能未知 ;牵张力敏感基因 2 (SSG2 )位于 18号染色体上 ,与转录因子 2 ,4高度同源。结论　用消减杂交技术可以对人成骨细胞样机械牵张力敏感基因进行有效的克隆研究。

关键词：消减杂交基因克隆成骨细胞机械牵张力敏感基因

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抗人CD3单抗重、轻链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

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生物化学杂志 1994年第2期10卷 213-217页

作者：杨安钢许辉吉昌华韩骅杨立宏金伯泉苏成芝第四军医大学生物化学教研室

根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５’端序列和Ｊ区序列，化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，反转录生成ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ为模板，分别加入合成的重、轻... 详细信息

根据免疫球蛋白重链和轻链可变区基因５’端序列和Ｊ区序列，化学合成适合于体外扩增抗体重、轻链可变区基因的二对引物。从体外培养的ＯＫＴ３杂交瘤细胞中提取总ＲＮＡ，反转录生成ｃＤＮＡ，以ｃＤＮＡ为模板，分别加入合成的重、轻链可变区引物进行ＰＣＲ，扩增出抗体重、轻链可变区基因片段。将扩增产物分别插入ｐＵＣ１９质粒，筛选出阳性克隆，用链终止法进行ＤＮＡ序列测定。所测重链可变区基因全长３５７ｂｐ，编码１１９个氨基酸，轻链可变区基因全长３２１ｂｐ，编码１０７个氨基酸。

关键词：免疫球蛋白可变区基因序列分析

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核酶对bcl－2mRNA的体外切割

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生物化学杂志 1996年第1期12卷 1-5页

作者：赵永同惠宏襄刘爱平王刚王成济第四军医大学生物化学教研室

通过微机对ｂｃｌ－２ＲＮＡ二级结构的分析，设计针对ｂｃｌ－２片段５＇ＣＧＣＧＡＣＣＣＧＧＵＣＧＣＣＡＧＧＡＣＣＵＣＧ３＇的“锤头状”（Ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＲＤ）基因，平端连接于ｐＧＥＭ－３Ｚ... 详细信息

通过微机对ｂｃｌ－２ＲＮＡ二级结构的分析，设计针对ｂｃｌ－２片段５＇ＣＧＣＧＡＣＣＣＧＧＵＣＧＣＣＡＧＧＡＣＣＵＣＧ３＇的“锤头状”（Ｈａｍｍｅｒｈｅａｄ）核酶（Ｒｉｂｏｚｙｍｅ，ＲＤ）基因，平端连接于ｐＧＥＭ－３Ｚｆ（－）ＨｉｎｃⅡ位点，克隆后经测序表明序列正确，ｂｃｌ－２和Ｒｉｂｏｚｙｍｅ基因经体外转录，５０℃作用２ｈ，从１６５６－１６５７（Ｃ－Ｇ）位之间切断ｂｃｌ－２ＲＮＡ片段．

关键词：核酶 mRNA bcl-2 切割活性 mRNA

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艾滋病毒核酸探针的制备

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生物化学杂志 1990年第3期6卷 235-237,234页

作者：项秉懿苏成芝第四军医大学生物化学教研室

采用PXY104(含化学合成的HIV-env26肽基因4重串联体结构)为材料。温和裂解法提取质粒DNA,制备电泳纯化,Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶解,低融点琼脂糖凝胶电泳回收HIV-DNA片段作为核酸探针;用[α-^(32)P]dATP通过缺口移位法标记,比放射性为4.05—6... 详细信息

采用PXY104(含化学合成的HIV-env26肽基因4重串联体结构)为材料。温和裂解法提取质粒DNA,制备电泳纯化,Hind Ⅲ和EcoR Ⅰ酶解,低融点琼脂糖凝胶电泳回收HIV-DNA片段作为核酸探针;用[α-^(32)P]dATP通过缺口移位法标记,比放射性为4.05—6.69×10~7cpm/μgDNA通过分子杂交能测出lPg的靶DNA,初步试验结果表明,在本文试验条件下,可用该探针检测与之互补的核酸分子。

关键词： HIV 核酸探针分子杂交

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