检索结果-内蒙古大学图书馆

人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2基因反义RNA表达质粒的构建及其功能的初步研究

中国生物化学与分子生物学报 2006年第1期22卷 43-48页

作者：仇灏金美芳周迎会孙其昌刘可人沈宏杰吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州215007

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp... 详细信息

反义封闭人多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(pp-GalNAc-T2)的基因表达,对胃癌细胞SGC7901中转化生长因子-β1(TGF-β1)与基质金属蛋白酶2(MMP2)基因表达及细胞增殖有影响.在对几株肿瘤细胞的pp-GalNAc-T2基因表达水平进行分析后,以高表达pp-GalNAc-T2的人胃癌细胞株SGC7901的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增两段不同长度pp-GalNAc-T2基因片段,构建反义表达载体转染胃癌细胞SGC7901,通过G418筛选,建立一系列旨在封闭胃癌细胞SGC7901ppGalNAc-T2基因表达的亚细胞克隆.通过流式细胞术、荧光显微镜、RT-PCR及Western印迹检测反义封闭pp-GalNAc-T2基因RNA表达后胃癌细胞SGC7901增殖以及TGF-β1、MMP2表达水平的变化.反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达后,胃癌细胞SGC7901 pp-GalNAc-T2的表达水平明显降低,细胞分裂增殖减慢,表明反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达对胃癌细胞SGC7901的生长增殖有影响.结果还显示,反义封闭pp-GalNAc-T2基因表达可使TGF-β1、MMP2基因在mRNA与蛋白质表达水平均增加,提示pp-GalNAc-T2基因表达可能对胃癌细胞SGC7901浸润转移产生影响.以上结果表明,pp-GalNAc-T2基因在肿瘤细胞中广泛表达,并可能与肿瘤的增殖及浸润转移相关.

关键词：多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶基质金属蛋白酶转化生长因子-β1 SGC7901细胞

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ING4的原核表达及多克隆抗体的制备

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苏州大学学报（医学版） 2006年第6期26卷 930-932,935页

作者：王金志缪竞诚盛伟华谢宇锋杨吉成苏州大学医学院基础医学系细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结... 详细信息

目的在原核系统中表达并纯化ING4蛋白,制备多克隆抗体。方法构建表达载体pET-21a(+)-ING4,转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳检测。结果构建的表达载体pET-21a(+)-hGDNF经酶切、PCR鉴定均出现750 bp左右的条带,测序结果正确,用IPTG诱导转化菌有30KD大小的目的条带,表达的目的蛋白占菌体总蛋白10%以上,以包涵体形式存在,纯化后其纯度可达70%以上。用纯化的ING4蛋白免疫新西兰兔制备多克隆抗体。结论制备的多克隆抗体为下阶段的研究提供了重要的实验材料。

关键词：原核表达抗体 ING4

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一株新的鼠抗人2IgB7-H3功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定

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现代免疫学 2006年第4期26卷 278-282页

作者：饶爱华周迎会陈永井马震宇张学光苏州大学基础医学系生物化学教研室苏州大学医学院生物技术研究所苏州215007

研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体。以人2IgB7-H3基因转染细胞1．929／2IGB7-H3为免疫原，常规免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠；利用B淋巴杂交瘤技术，将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2／0融合，1．929／2IGB7-H3细胞为抗原筛选... 详细信息

研制功能性鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体。以人2IgB7-H3基因转染细胞1．929／2IGB7-H3为免疫原，常规免疫6～8周龄的雌性BALB／c小鼠；利用B淋巴杂交瘤技术，将免疫小鼠脾脏细胞和骨髓瘤细胞株SP2／0融合，1．929／2IGB7-H3细胞为抗原筛选阳性细胞；经间接免疫荧光标记法对杂交瘤细胞进行反复筛选和多次克隆化培养；采用快速定性试纸法鉴定单抗Ig亚类；利用竞争抑制性实验分析该单抗识别的抗原表位；采用MTT法分析该单抗在体外阻断DC对T细胞的促增殖效应。结果：获得了1株持续稳定分泌鼠抗人2IgB7-H3单克隆抗体的杂交瘤细胞株（命名为7D7），该单抗可特异识别1．929／2IGB7-H3分子和介导有效的共刺激信号。该单抗的成功获得和其生物学特性的初步鉴定，为进一步研究B7-H3两个异构体在DC细胞及肿瘤细胞上的作用机制奠定了物质基础。

关键词： 2IgB7-H3 单克隆抗体共刺激信号杂交瘤细胞株

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Huntingtin聚合与Huntington舞蹈病

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中国临床神经科学 2006年第1期14卷 106-109,112页

作者：王晔顾振纶秦正红苏州大学医学院基础医学系药理教研室 215123

许多神经退行性疾病是由蛋白质错误折叠导致的。Huntington舞蹈病(HD)是由蛋白质多聚谷氨酰胺延长引起的9种疾病之一,含延长多聚谷氨酰胺序列的蛋白质聚集在中枢神经系统的神经元中形成包涵体(inclusions)和聚集体(aggregates)。本文综... 详细信息

许多神经退行性疾病是由蛋白质错误折叠导致的。Huntington舞蹈病(HD)是由蛋白质多聚谷氨酰胺延长引起的9种疾病之一,含延长多聚谷氨酰胺序列的蛋白质聚集在中枢神经系统的神经元中形成包涵体(inclusions)和聚集体(aggregates)。本文综述了Huntingtin蛋白错误折叠和聚集的机制以及疾病治疗的有关研究进展。

关键词：蛋白质构型异常蛋白酶系统 Huntington舞蹈病聚集体

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O-糖基化位点预测及糖基化酶催化特点

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生命的化学 2006年第1期26卷 25-27页

作者：刘可人金美芳吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州215123

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催... 详细信息

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催化特性。

关键词： O-糖基化黏蛋白脯氨酸串联重复 ppGaNTases

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蓝斑H_2受体参与应激对大鼠颈动脉窦反射的重调定

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实验动物与比较医学 2006年第4期26卷 235-238页

作者：李金华宋军王淋辉邹容王国卿苏州大学医学院基础医学系生理学教研室苏州215123

目的探讨蓝斑H_2受体是否影响应激对颈动脉窦反射(CSR)的重调定。方法应激1周的SD大鼠,麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic曲线拟合,求得ISP-MAP关系曲线及其特征参数,观察蓝斑注射选... 详细信息

目的探讨蓝斑H_2受体是否影响应激对颈动脉窦反射(CSR)的重调定。方法应激1周的SD大鼠,麻醉后孤离双侧颈动脉窦区,将不同窦内压(ISP)与其对应的平均动脉压(MAP)值进行Logistic曲线拟合,求得ISP-MAP关系曲线及其特征参数,观察蓝斑注射选择性H_2受体拮抗剂西咪替丁(CIM)对CSR的影响。结果蓝斑内注射CIM(1．5μg/μ1)导致应激大鼠ISP-MAP关系曲线后半程明显下移(P＜0．05),反射参数中阈压、饱和压和最大增益时的窦内压值均减少(P＜0．05)；蓝斑注射相同剂量的CIM对非应激大鼠的CSR无明显影响(P＞0．05)蓝斑内注射CIM不能使应激的CSR水平恢复到非应激给药后水平。结论蓝斑H_2受体参与应激对CSR的重调定；除此之外,应激作用中尚有其他因素的参与。

关键词：颈动脉窦反射重调定应激蓝斑H2受体平均动脉压大鼠

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日本血吸虫病免疫诊断研究进展

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中国血吸虫病防治杂志 2006年第4期18卷 318-320页

作者：陆正贤夏超明苏州大学医学院基础医学系病原生物学教研室苏州215006

血吸虫病免疫诊断技术经过不断改进和发展,具有较高的敏感性、特异性及可行性。检测循环抗体(CAb)成本低、操作简单、受宿主免疫状态影响小、可行性强,但治疗后抗体可多年维持较高水平,疗效考核价值不高。因此,目前的研究方向主要是寻... 详细信息

血吸虫病免疫诊断技术经过不断改进和发展,具有较高的敏感性、特异性及可行性。检测循环抗体(CAb)成本低、操作简单、受宿主免疫状态影响小、可行性强,但治疗后抗体可多年维持较高水平,疗效考核价值不高。因此,目前的研究方向主要是寻找治疗后消失较快的抗体,即短程抗体,以提高检测CAb的疗效考核价值。宿主体液中的循环抗原(CAg)则仅与活虫有关,感染一旦终止,宿主体液中的CAg也很快消失,因此检测CAg无论在诊断上,还是在考核疗效方面都具有重要意义。自1950年代起,国内外学者就开始进行了免疫诊断的研究,经过50多年的努力取得了显著的进展。现将近年来国内外血吸虫病免疫诊断的主要研究进展综述如下。[第一段]

关键词：免疫诊断技术日本血吸虫病诊断研究疗效考核价值循环抗体免疫状态短程抗体循环抗原进展综述治疗后

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糖基化与N-乙酰氨基葡萄糖转移酶家族

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江苏大学学报（医学版） 2006年第3期16卷 272-276页

作者：吴艳吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学教研室江苏苏州215123

随着对基因组学和蛋白质组学研究的深人,人们已经逐渐认识到糖类是重要的生物信息分子,并且是基因信息的延续。糖生物学已经继基因组学和蛋白质组学之后发展成为一专门的学科——糖组学(Glycomics),涉及糖类结构与功能方面的研究。“DNA... 详细信息

随着对基因组学和蛋白质组学研究的深人,人们已经逐渐认识到糖类是重要的生物信息分子,并且是基因信息的延续。糖生物学已经继基因组学和蛋白质组学之后发展成为一专门的学科——糖组学(Glycomics),涉及糖类结构与功能方面的研究。“DNA→RNA→蛋白质”是传统的基因信息传递的中心法则,但是生物体内的信息流并不止于蛋白质,作为蛋白质的酶还可以催化合成许多各种类型的、具有生物活性的分子,糖类就是其中最重要的一类。聚糖糖链大多在细胞表面和细胞分泌的蛋白上,它们不仅可通过糖基化影响蛋白质功能,还与细胞通讯、信号传递密切相关。而糖链的生物合成必须有糖基转移酶的参与,它催化转移活化的糖基供体上的糖基到糖类或非糖类受体上,形成特殊的糖苷键,因此有关糖基转移酶的研究备受人们的重视。[第一段]

关键词：糖基化 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶 GnT

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中药诱导肿瘤细胞凋亡的基因调控机制研究进展

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中国野生植物资源 2006年第4期25卷 8-10页

作者：韦翠萍梁中琴顾振纶苏州大学医学院基础医学系药理教研室苏州中药研究所江苏苏州215002

近年来,细胞凋亡已作为评估抗肿瘤药物疗效的一个重要指标,中药单体和中药复方制剂对恶性肿瘤细胞凋亡的研究是目前中药抗肿瘤作用的研究热点之一。通过对中药单体和中药复方制剂对恶性肿瘤细胞凋亡的基因调控机制研究进展的综述,探索... 详细信息

近年来,细胞凋亡已作为评估抗肿瘤药物疗效的一个重要指标,中药单体和中药复方制剂对恶性肿瘤细胞凋亡的研究是目前中药抗肿瘤作用的研究热点之一。通过对中药单体和中药复方制剂对恶性肿瘤细胞凋亡的基因调控机制研究进展的综述,探索凋亡诱导基因p53基因与凋亡抑制基因bcl-2,c-myc等在细胞凋亡中的表达规律,为中药防治恶性肿瘤的研究提供思路。

关键词：中药单体中药复方肿瘤细胞凋亡基因

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人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2):RNA干扰载体的构建及其功能的初步研究

人多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶2(ppGalNAc-T2):RNA干扰载体的构...

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华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会

作者：朱燕仇灏刘可人吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室

目的:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应,将 UDP-GalNAc中的GalNAc基转移至蛋白多肽链上特定序列中的Set或Thr,从而合成GalNAcα-O- Ser／Thr,初步研究提示该酶可能与肿瘤的生长和转移有关。ppGalN... 详细信息

目的:人类多肽:N-乙酰氨基半乳糖转移酶(ppGalNAcT)催化O-聚糖合成的第一步反应,将 UDP-GalNAc中的GalNAc基转移至蛋白多肽链上特定序列中的Set或Thr,从而合成GalNAcα-O- Ser／Thr,初步研究提示该酶可能与肿瘤的生长和转移有关。ppGalNAc-T2是该家族中组织分布及底物谱较广的成员,作为O-糖链合成的起始酶,很有可能是O-糖链合成的限速酶,有着重要的生物学意义。本文旨在探讨ppGalNAc-T2在肿瘤浸润转移及增殖中的作用。方法:RNA干扰技术是2001年首次应用于哺乳动物细胞的新的分子生物学技术,是研究转录后调控的有效工具,可用于功能基因组研究以及基因治疗等临床应用。遵循RNA干扰目标序列的选取原则,利用互联网资源,对ppGalNAc-T2基因 mRNA序列设计五条可能的小干扰RNA(siRNA),并且由PCR方法扩增得到带有RNA pol Ⅱ启动子的siRNA内源表达系统,脂质体介导转染至人胃癌细胞株SOC7901,运用RT-PCR方法检测转染后各细胞株ppGalNAc-T2 mRNA水平的表达变化,筛选出对ppGalNAc-T2 mRNA水平表达抑制效率最高的siRNA;化学合成带荧光标记的该段RNA Oligo,转染细胞并用荧光显微镜观察转染情况,RTPCR 方法检测转染后细胞ppGalNAc-T2的表达,进一步鉴定该siRNA对ppGalNAc-T2的抑制作用;将这段siRNA插入到RNA干扰真核表达载体pSilenCircle中,脂质体介导转染人胃癌细胞株 SGC7901,经G418筛选后,利用RT-PCR和Western blot方法检测MMP2、MMP14、TGF-β1等肿瘤浸润转移相关基因的表达变化,通过MTT法检测对细胞增殖的影响。结果:筛选得到能高效引起ppGalNAc -T2基因表达沉默的siRNA,成功构建了ppGalNAc-T2的RNA干扰真核表达载体并转染入细胞,得到稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株。转染了重组载体后的细胞,随着ppGalNAc-T2表达的下调,MMP2、MMP14、TGF-β1等基因在mRNA和蛋白质水平的表达不同程度地增高了,细胞增殖水平则较原细胞株有所降低。结论:稳定的ppGalNAc-T2基因敲减细胞株为今后进一步深入研究PPGalNAc -T2的生物学功能开辟了新道路。同时由于TGF-β1、MMP2、MMP14都是与肿瘤的浸润转移、增殖相关的指标,因此推测ppGalNAc-T2与肿瘤的浸润转移、增殖密切相关。

关键词： RNA 肿瘤浸润转移半乳糖转移酶 ppGalNAc-T2 乙酰氨基干扰载体初步研究

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