检索结果-内蒙古大学图书馆

中华流行病学杂志 2012年第8期33卷 828-831页

作者：刘东瀛刘婧李金林陈文罗凡李晴杨占秋武汉大学医学病毒学研究所病毒学国家重点实验室430071 武汉大学医学病毒学研究所医学微生物学教研室430071 南通大学医学院厦门大学医学院基础医学部

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检... 详细信息

目的了解湖北省武汉地区啮齿动物自然感染汉坦病毒（HV）情况以及流行的基因型和亚型。方法2000--2003年、2009--2011年秋冬季在武汉地区新洲、江夏区野外及居民区采用夹夜法捕鼠。对捕获的动物进行分类鉴定并取肺脏用间接免疫荧光法检测病毒抗原。抗原阳性的样本，采用RT-PCR方法扩增部分S片段核苷酸序列，构建系统发生树并进行基因分型。结果2000--2003年捕获啮齿类动物437只，HV抗原阳性鼠肺标本24份，病毒携带率为5．49％。2009--2011年捕获啮齿类动物173只，HV抗原阳性鼠肺标本7份，病毒携带率为4．05％。褐家鼠为当地的优势鼠种。22份标本成功地用汉滩病毒（HTNV）、汉城病毒（SEOV）特异引物扩增部分S基因片段并测序。17只（13只褐家鼠，4只黑线姬鼠）鼠肺标本中扩增出SEOV部分S基因片段（nt588-1147），分别属于第3亚型和2个新的基因亚型。5只黑线姬鼠的鼠肺标本中扩增出HTNV部分S基因片段（nt615～1141），分别属于第7亚型和1个新的亚型。结论武汉地区流行的HV为SEOV和HTNV，并发现新的基因亚型，SEOV可能“溢出”感染黑线姬鼠。

关键词：汉坦病毒啮齿动物基因系统发生分析

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生物信息学教学中学生创新能力培养探讨

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基础医学教育 2012年第11期14卷 816-818页

作者：倪青山金晓琳胡福泉饶贤才邹凌云第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

生物信息学是一门新兴的交叉学科,其理论和方法不断更新,有助于培养学生的创新能力。结合生物信息学教学实践,从教学团队、教学内容、学生主体作用、实践教学、考核方式等方面,对学生创新能力的培养进行了探索。

关键词：生物信息学教学方法创新能力

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Tet-on和Cre/loxP系统双重调控表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠的建立

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生物技术通讯 2012年第3期23卷 342-346页

作者：兰海云孙梦宁马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰姚敏黄小军张建敏康健尹文第四军医大学基础医学部医学微生物学与病原生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础医学部中心实验室陕西西安710032

目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏... 详细信息

目的:建立Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法:选择适龄并经鉴定的在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与在Tet-on系统调控下肝脏特异性表达萤光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1等3个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经多西环素(Dox)诱导1周后,以在体生物发光成像系统(BLI)检测报告基因Luc的表达,免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果:NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示仅在小鼠肝脏部位有强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达;免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后的小鼠肝细胞中特异性表达。结论:建立了Tet-On调控系统和Cre/loxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制,以及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定了基础。

关键词：丙型肝炎病毒 NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠

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microPET分子显像-刚地弓形虫感染出生缺陷机制研究

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中国妇幼保健 2012年第31期27卷 5004-5008页

作者：许飞诸葛洪祥丁虹徐宇平王立振陈道桢周永华杨敏无锡市妇幼保健院苏州大学基础医学院病原微生物学教研室江苏苏州215123 江苏省原子医学研究所江苏省寄生虫病防治研究所

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内寄生原虫，可感染几乎所有恒温动物，全世界有超过10亿人感染刚地弓形虫。刚地弓形虫感染可引起流产、死胎、胎儿脑部、眼部等多器官畸形[1]，产前诊断主要局限在孕妇脐血或羊水检测刚... 详细信息

刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种专性细胞内寄生原虫，可感染几乎所有恒温动物，全世界有超过10亿人感染刚地弓形虫。刚地弓形虫感染可引起流产、死胎、胎儿脑部、眼部等多器官畸形[1]，产前诊断主要局限在孕妇脐血或羊水检测刚地弓形虫抗体（IgG和IgM），但其入侵机制、致病过程、引起胎儿出生缺陷的致病机理仍在探索中。

关键词：刚地弓形虫感染胎儿出生缺陷 microPET 分子显像细胞内寄生原虫多器官畸形弓形虫抗体恒温动物

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双重调控表达HCVNS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠的建立

双重调控表达HCVNS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠的建立

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中国微生物学会2012感染与免疫学术研讨会

作者：兰海云孙梦宁马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰尹文第四军医大学基础医学部医学微生物学教研室陕西西安710032 第四军医大学基础医学部中心实验室陕西西安710032

目的建立Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法选择适龄并经鉴定的由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达荧... 详细信息

目的建立Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶三转基因小鼠。方法选择适龄并经鉴定的由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达Cre重组酶的双转基因小鼠Lap/LC-1与由Tet-on系统调控下肝脏特异性表达荧光素酶(Luc)的双转基因小鼠Lap/NS3/4A交配,子代小鼠经PCR法检测、筛选基因组中NS3/4A、Lap、LC-1三个转基因片段均阳性的小鼠。三阳性的NS3/4A/Lap/LC-I小鼠经盐酸强力霉素(Doxycycline,Dox)诱导一周后,以在体生物发光成像系统(In vivo bioluminescent imaging,BLI)检测报告基因荧光素酶的的表达。免疫组化检测小鼠体内Cre重组酶、NS3/4A丝氨酸蛋白酶的表达状况。结果 NS3/4A/Lap/LC-1小鼠经Dox诱导后,BLI结果显示,仅在小鼠肝脏部位检测到强烈的发光信号,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。免疫组化结果证实Cre重组酶、NS3/4A蛋白酶仅在经诱导后后的小鼠肝细胞特异性表达。结论建立了Tet-On调控系统和Cre/LoxP基因剔除系统双重调控下表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的三转基因小鼠模型,为进一步研究HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶在HCV感染后与宿主相互作用的机制及抗NS3/4A丝氨酸蛋白酶特异性抑制剂的筛选奠定基础。

关键词： HCV NS3/4A蛋白酶三转基因小鼠

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Ⅱ型登革病毒感染对细胞波形蛋白表达及磷酸化水平调控的实验研究

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第三军医大学学报 2011年第21期33卷 2265-2267页

作者：雷舜陈炜宋富强王嘉丽饶贤才黎庶胡晓梅第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室

目的研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点(Ser71)磷酸化水平的变化。方法使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的... 详细信息

目的研究Ⅱ型登革病毒(dengue virus serotype 2,DV2)感染ECV304细胞后,波形蛋白(vimentin)的表达及丝氨酸第71位点(Ser71)磷酸化水平的变化。方法使用DV2感染ECV304细胞,以Western blot检测病毒进入和复制期不同时相点细胞波形蛋白的表达和Ser71磷酸化水平。结果 DV2感染的ECV304细胞中波形蛋白表达较对照组没有显著差异(P>0.05),而波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平较对照组有显著差异:DV2在进入ECV304细胞第30分钟时波形蛋白Ser71磷酸化水平显著增高,达到对照组的176.3%(P<0.01);而在感染后第8小时,Ser71位点磷酸化水平再次显著增高,达到对照组的333.2%(P<0.01),感染后第12小时降低至对照组的203.5%(P<0.05)。结论波形蛋白Ser71位点的磷酸化水平变化与DV2在ECV304细胞中的感染与复制周期密切相关。

关键词：登革病毒 ECV304细胞波形蛋白磷酸化

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2-型猪链球菌分泌性保护性抗原RfeA的确认

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免疫学杂志 2011年第8期27卷 692-694页

作者：刘丽娜朱军民丛延广胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 贵阳医学院基础医学院医学生物技术教研室 550004

目的确认RTX家族胞外蛋白A(RTX family exoprotein A,RfeA)为2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的分泌蛋白。方法通过生物信息学软件分析RfeA的氨基酸序列,预测RfeA在SS2中的分布;以纯化的RfeA重组蛋白为免疫原免疫小鼠... 详细信息

目的确认RTX家族胞外蛋白A(RTX family exoprotein A,RfeA)为2-型猪链球菌(Streptococcus suis serotype 2,SS2)的分泌蛋白。方法通过生物信息学软件分析RfeA的氨基酸序列,预测RfeA在SS2中的分布;以纯化的RfeA重组蛋白为免疫原免疫小鼠,制备RfeA鼠多抗血清,间接ELISA检测抗血清效价;以制备的RfeA抗血清为一抗,利用ELISA方法分析RfeA在05ZYH33株培养上清中的分布,通过实验证实生物信息学预测的结果。结果生物信息学软件分析RfeA氨基酸序列,预测RfeA为SS2分泌性蛋白;ELISA方法分析发现RfeA存在于05ZYH33株培养上清中,是SS2分泌性蛋白。结论实验研究结果与生物信息学预测一致,RfeA为SS2分泌性蛋白的确定为进一步研究RfeA的功能以及在SS2致病过程中扮演的角色奠定了基础。

关键词： 2-型猪链球菌 RTX家族胞外蛋白A 分泌蛋白

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登革病毒包膜E蛋白III区

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生命的化学 2011年第3期31卷 366-371页

作者：杨杰饶贤才第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室重庆400038

登革病毒包膜E蛋白III区(DENV ED3)是登革病毒与敏感细胞受体结合的功能区域,对其结构和功能的研究,将有助于理解登革病毒与其敏感细胞间的相互作用和致病机理,为登革病毒受体研究和研发特异性阻断剂控制DENV感染奠定基础。现就DENV ED... 详细信息

登革病毒包膜E蛋白III区(DENV ED3)是登革病毒与敏感细胞受体结合的功能区域,对其结构和功能的研究,将有助于理解登革病毒与其敏感细胞间的相互作用和致病机理,为登革病毒受体研究和研发特异性阻断剂控制DENV感染奠定基础。现就DENV ED3的研究进展作一综述。

关键词： DENVED3 病毒受体膜融合病毒毒力

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重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)高密度发酵工艺研究

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第三军医大学学报 2011年第9期33卷 896-899页

作者：何莉鲜尽红刘高科杨永涛汪正清第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 沈阳军区总医院检验科沈阳100016 重庆医药高等专科学校微生物学教研室重庆400030

目的建立重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、培养温度、pH值、活化时间、诱导时间及分批补加营养物质等条件... 详细信息

目的建立重组工程菌pET32a-CR1-SCR15-18/BL21(DE3)的高密度发酵工艺。方法以摇瓶发酵结果为基础,扩大至发酵罐发酵,对影响工程菌生长及目的蛋白表达的因素如发酵培养基、培养温度、pH值、活化时间、诱导时间及分批补加营养物质等条件进行优化。结果采用改良M9-CA培养基、37℃活化4 h后以0.2 mmol/L IPTG诱导表达4 h,以甘油为碳源,在生长期和诱导期分别以40 ml/h和70 ml/h的速率连续流加补料,全程滴加氨水保持培养基pH值保持在7.5,调节转速控制溶解氧在40%左右。最终菌体产量提高至40 g/L以上,CR1-SCR15-18蛋白表达率达28%以上。结论高密度发酵工艺显著提高了工程菌的产量和CR1-SCR15-18蛋白的表达水平。

关键词：补体1型受体SCR15-18 高密度发酵大肠杆菌

来源：评论

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2型猪链球菌溶血素及其抗血清的免疫保护活性研究

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解放军医学杂志 2011年第11期36卷 1194-1196页

作者：刘丽娜朱军民丛延广王长军贵阳医学院基础医学院医学生物技术教研室贵阳550004 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038 南京军区军事医学研究所南京210002

目的探讨2型猪链球菌(SS2)溶血素(SLY)及其抗血清的免疫保护活性。方法以纯化的SLY重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定抗血清的效价及其中的IgG亚型,用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价SLY的免疫保护活性。制备SLY抗血清并以... 详细信息

目的探讨2型猪链球菌(SS2)溶血素(SLY)及其抗血清的免疫保护活性。方法以纯化的SLY重组蛋白作为免疫原免疫小鼠,收集抗血清,测定抗血清的效价及其中的IgG亚型,用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价SLY的免疫保护活性。制备SLY抗血清并以其被动免疫小鼠,4h后用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠,评价抗血清的保护作用。结果用重组蛋白SLY免疫小鼠后收集抗血清,效价为1∶25 600,含IgG1和IgG2a两种亚型抗体,但IgG1与IgG2a的含量差异不显著。用致死剂量的SS2强毒株攻击小鼠14d后,SLY主动免疫组小鼠的存活率(60%)明显高于对照组(10%,P<0.05);SLY抗血清被动免疫组小鼠在SS2强毒株攻击7d后的存活率(90%)明显高于对照组(20%,P<0.05),攻击后14d,抗血清被动免疫组存活率(40%)与对照组(20%)差异不显著(P>0.05)。结论 SLY及其抗血清具有免疫保护活性。

关键词：链球菌猪链球菌溶血素类免疫血清

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