检索结果-内蒙古大学图书馆

生命的化学 2006年第1期26卷 25-27页

作者：刘可人金美芳吴士良苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室苏州大学生化工程研究所苏州215123

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催... 详细信息

O-糖链维持所连接蛋白质部分的空间构象。O-糖基化作为生物体内重要的生物过程,其起始步骤具有复杂的高度选择性,迄今为止还未发现固定的模式。人们通过比较已知O-糖基化部位周围的氨基酸序列,推测出O-糖基化位点的一些规律及其酶的催化特性。

关键词： O-糖基化黏蛋白脯氨酸串联重复 ppGaNTases

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新生大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化方法研究

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苏州大学学报（医学版） 2006年第5期26卷 738-740,769页

作者：徐明盛伟华谢宇锋杨吉成唐天驷苏州大学附属第一医院骨科江苏苏州215006 苏州大学医学院细胞和分子生物学教研室江苏苏州215007

目的探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的体外培养和纯化方法,为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法用原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs,比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法的纯化效果,根据GFA... 详细信息

目的探讨新生大鼠嗅球嗅鞘细胞(OECs)的体外培养和纯化方法,为研究脊髓损伤后神经再生获得丰富OECs来源奠定基础。方法用原代培养的方法分离、培养新生大鼠嗅球OECs,比较p75抗体吸附、阿糖胞苷抑制、差速贴壁三种方法的纯化效果,根据GFAP免疫细胞化学染色结果统计所得OECs的纯度,同时在相差显微镜下对不同培养时期的OECs的形态进行观察。结果体外培养的新生大鼠嗅球OECs主要为双极或三级细胞,其突起细长。未经纯化的OECs则成纤维细胞生长迅速而占优势,三种纯化方法均能使接种14 d后的OECs纯度均值大于75%。p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法的纯化率均值略高于差速贴壁法。结论新生大鼠嗅球OECS的原代培养中细胞纯化是必要的;在脊髓损伤再生研究中,较之p75抗体吸附法和阿糖胞苷抑制法,差速贴壁法是一种简单、经济、实用的OECs纯化方法。

关键词：新生大鼠嗅鞘细胞嗅球细胞培养纯化免疫细胞化学

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人α1,3-岩藻糖基转移酶VII荧光真核表达载体的构建及鉴定

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生殖与避孕 2006年第12期26卷 727-730,744页

作者：张媛媛王忠山刘帅燕秋大连医科大学生化与分子生物学教研室辽宁省糖生物学与糖生物工程重点实验室大连116027 吉林大学基础医学院细胞生物学教研室长春130021

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP-FUT7真核表达载体。方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶VII(FUT7)全长基因,克隆至pMD18-TSimple载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定。通过脂质体转染... 详细信息

目的:构建并鉴定绿色荧光蛋白为报告基因的pIRES2-EGFP-FUT7真核表达载体。方法:采用RT-PCR方法获得α1,3-岩藻糖基转移酶VII(FUT7)全长基因,克隆至pMD18-TSimple载体后,将FUT7亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体并进行鉴定。通过脂质体转染到子宫内膜RL95-2细胞中,荧光显微镜下观察并经RT-PCR检测FUT7的表达。结果:测序及酶切鉴定证明获得人全长FUT7基因,FUT7基因正确插入pIRES2-EGFP中,在荧光显微镜下观察到了绿色荧光蛋白在RL95-2细胞中的表达,半定量RT-PCR检测结果显示FUT7的表达明显增加。结论:成功构建了绿色荧光蛋白为报告基因的FUT7真核表达载体,并检测到在RL95-2细胞中的表达,为研究FUT7及其合成的糖抗原sLex在胚胎着床中的作用奠定了基础。

关键词： α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(FUT7) 绿色荧光蛋白基因克隆基因表达

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人前列腺特异性抗原基因重组表达载体pPICZαC-mPSA的构建和表达(英文)

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中国现代医学杂志 2006年第10期16卷 1441-1444页

作者：邹冬辉张家颖郭焱路英丽左文静王忠山吉林大学基础医学院细胞生物学教研室吉林长春130021 吉林大学基础医学院生物化学与分子生物学实验中心吉林长春130021

目的在毕赤酵母细胞中表达PSA,为临床的检测和治疗提供材料。方法经RT-PCR获得PSA全长cDNA并测序。将编码成熟PSA237氨基酸的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,该载体含有AOX1启动子和α-factor信号肽序列,构建表达载体体pPICZαC... 详细信息

目的在毕赤酵母细胞中表达PSA,为临床的检测和治疗提供材料。方法经RT-PCR获得PSA全长cDNA并测序。将编码成熟PSA237氨基酸的cDNA序列插入毕赤酵母表达载体pPICZα-C,该载体含有AOX1启动子和α-factor信号肽序列,构建表达载体体pPICZαC-mPSA。甲醇诱导X33细胞表达rPSA,ELASA试剂盒筛选高表达rPSA的细胞株。结果获得了人PSA全长序列,构建了表达载体pPICZα-mPSA。获得了高表达rPSA的酵母X33细胞株,表达产量为1.2mg/L。结论建立了重组人前列腺特异性抗原的毕赤酵母表达体系,规模化的生产有助于PSA的生物学特性的研究和临床检测和治疗的应用.

关键词：前列腺特异性抗原毕赤酵母

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rhIL-24基因抑制胃癌生长及作用机制的实验研究

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苏州大学学报（医学版） 2006年第3期26卷 370-374页

作者：严苏韩梅谢宇锋盛伟华陈卫昌杨吉成苏州大学附属第一医院消化科江苏苏州215006 苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215123

目的探讨rhIL-24蛋白体外对胃癌生长的影响及作用机制。方法用已构建成功的真核表达载体pcDNA3.0-IL24质粒转染中国仓鼠卵巢细胞CHO细胞,使其上清稳定表达rhIL-24,同时用已构建成功的原核表达载体PET21a(+)IL-24-BL-21,抽提BL-21菌中表... 详细信息

目的探讨rhIL-24蛋白体外对胃癌生长的影响及作用机制。方法用已构建成功的真核表达载体pcDNA3.0-IL24质粒转染中国仓鼠卵巢细胞CHO细胞,使其上清稳定表达rhIL-24,同时用已构建成功的原核表达载体PET21a(+)IL-24-BL-21,抽提BL-21菌中表达的rhIL-24,行SDS-PAGE电泳和Western-Blotting鉴定rhIL-24的表达,MTT法检测rhIL-24对SGC7901胃癌细胞生长的影响;Hoechst染色、流式细胞术检测CHO细胞和BL-21菌表达的rhIL-24诱导胃癌细胞凋亡;鸡胚绒毛尿囊膜试验观察rhIL-24对血管形成的影响。结果rhIL-24对胃癌细胞的生长有明显的抑制作用;rhIL-24可诱导SGC7901胃癌细胞凋亡;rhIL-24具有抑制血管形成的作用。结论rhIL-24蛋白有多重抗肿瘤能力,其可能的作用机制是明显抑制胃癌细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制血管生成。

关键词： rhIL-24 SGC7901细胞凋亡

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hOSM在COS-7细胞中表达及对人A375黑色素瘤细胞的生长抑制作用

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临床肿瘤学杂志 2006年第2期11卷 128-132页

作者：叶建新盛伟华马丽丽谢宇峰缪竞诚杨吉成苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室

目的:克隆人抑瘤素(hOSM)基因并构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的基因重组蛋白。方法:用PMA刺激U937细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得cDNA,与pUCmT载体连接,经PCR获得全长hOSM基因,再与pcDNA3·1/my... 详细信息

目的:克隆人抑瘤素(hOSM)基因并构建真核表达载体,在COS-7细胞中表达具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的基因重组蛋白。方法:用PMA刺激U937细胞,抽提总RNA,经RT-PCR获得cDNA,与pUCmT载体连接,经PCR获得全长hOSM基因,再与pcDNA3·1/myc-his(-)A真核表达载体连接,构建真核表达重组质粒pcDNA3·1A-hOSM,经PCR和限制性酶切及DNA测序鉴定后,在COS-7细胞中进行瞬时表达,采用RT-PCR鉴定hOSM基因的转录,MTT法检测表达产物抑制A375细胞生长的活性。结果:重组入载体中的基因片段不仅方向正确,而且所克隆的hOSM基因,与GeneBank报告序列完全一致,并成功地在COS-7细胞中瞬时表达了具有抑制A375细胞生长的rhOSM蛋白。结论:本研究成功地克隆出hOSM基因并在COS-7细胞中获得瞬时表达,证明了表达的基因重组蛋白具有抑制人A375黑色素瘤细胞生长的活性,为在真核细胞中进行稳定表达,深入研究rhOSM的生物学功能创造了条件。

关键词： hOSM基因 COS-7细胞表达抑瘤作用

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辐射损伤对HRAD17基因转染不同类型细胞的影响

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中华放射医学与防护杂志 2006年第1期26卷 3-5页

作者：钱鑫韩云孙艳杨业鹏朱应葆北京大学第三医院中心实验室细胞与分子生物学室 100083 北京大学第三医院基础医学院放射医学教研室

目的探讨HRAD17在DNA辐射损伤修复及辐射诱导的凋亡中的作用。方法利用基因转染技术,对小鼠成纤维细胞NIH3T3和人宫颈癌HeLa细胞均分别转染pDOR-neo载体,pDOR-HRAD17s(正义)和pDOR-HRAD17a(反义)质粒,G418筛选获得阳性克隆。转染后各组... 详细信息

目的探讨HRAD17在DNA辐射损伤修复及辐射诱导的凋亡中的作用。方法利用基因转染技术,对小鼠成纤维细胞NIH3T3和人宫颈癌HeLa细胞均分别转染pDOR-neo载体,pDOR-HRAD17s(正义)和pDOR-HRAD17a(反义)质粒,G418筛选获得阳性克隆。转染后各组细胞去血清培养48 h同步化后给予60Coγ射线10 Gy照射,吸收剂量率为2.54 Gy/min,加入完全培养基继续培养,并于0、61、2、14、36和48 h收集固定细胞,碘化丙啶(PI)避光染色后,流式细胞仪检测细胞DNA量。结果在辐射损伤后,转染正义HRAD17的成纤维细胞主要发生G1/S期阻滞,转染正义HRAD17的肿瘤细胞主要发生G2/M期阻滞;转染正义HRAD17的细胞凋亡比例降低,转染反义HRAD17的细胞凋亡比例升高。结论HRAD17同时参与细胞周期G1/S和G2/M期阻滞,并抑制辐射损伤诱导的细胞凋亡。

关键词： HRAD17 辐射损伤细胞周期凋亡基因转染类型

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细胞因子在急性辐射损伤治疗中的作用

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国际放射医学核医学杂志 2006年第3期30卷 173-176页

作者：苗莉缪竞诚苏州大学医学院细胞分子生物学教研室 215123

急性辐射损伤以及肿瘤患者在放疗或化疗后,均可发生程度不等的骨髓功能抑制。一些细胞因子通过刺激不同分化时期、不同类型的靶细胞影响其增殖和分化,从而对骨髓造血细胞起辐射防护和促进骨髓造血恢复的作用。随着基因工程的发展,人们... 详细信息

急性辐射损伤以及肿瘤患者在放疗或化疗后,均可发生程度不等的骨髓功能抑制。一些细胞因子通过刺激不同分化时期、不同类型的靶细胞影响其增殖和分化,从而对骨髓造血细胞起辐射防护和促进骨髓造血恢复的作用。随着基因工程的发展,人们可以获得越来越多的高纯度重组造血因子,这些因子在急性辐射损伤的实验研究和临床救治中发挥了极其重要的作用。同时,细胞因子治疗也存在一些问题,有待进一步研究和解决。

关键词：造血细胞生长因子辐射损伤造血干细胞动员

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牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖的抑制作用

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中国新药与临床杂志 2006年第5期25卷 331-334页

作者：孙凌杨吉成吕海涛袁志昌严文华盛伟华丁云芳王红英苏州大学附属儿童医院心内科江苏苏州215003 苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215007 苏州大学附属儿童医院检验科江苏苏州215003

目的：研究牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制及对转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达的下调作用,以探讨其对抗AngⅡ诱导的心肌纤维化的作用。方法：在AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖前后加... 详细信息

目的：研究牛磺酸对血管紧张肽Ⅱ(AngⅡ)诱导的新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的抑制及对转化生长因子β_1(TGF-β_1)蛋白表达的下调作用,以探讨其对抗AngⅡ诱导的心肌纤维化的作用。方法：在AngⅡ诱导心肌成纤维细胞增殖前后加不同浓度的牛磺酸,并采用羟脯氨酸法、MTT比色法分别测定胶原量和细胞增殖情况、SDS-PAGE电泳测胶原Ⅰ/Ⅲ型比值、ELISA法测定TGF-β_1蛋白的含量。结果：(1) AngⅡ有促进心肌成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,其浓度在1×10^(-7)mmol·L^(-1)时达最大效应；(2)牛磺酸能抑制由AngⅡ诱导的Ⅰ/Ⅲ型胶原比值增高和TGF-β_1蛋白含量的增加,其中100,200 mmol·L^(-1)的牛磺酸可抑制AngⅡ诱导的细胞增殖和胶原合成。结论：牛磺酸可用于抑制由AngⅡ导致的心肌纤维化。

关键词：牛磺酸胶原转化生长因子β

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基因治疗中非病毒载体的基因导入方法

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临床肿瘤学杂志 2006年第4期11卷 308-311,317页

作者：章春花杨吉成缪竞诚苏州大学医学院细胞与分子生物学教研室江苏苏州215007

随着基因治疗研究的深入,人们发现,基因治疗的关键是选择恰当的载体及导入方法,使目的基因获得靶向性导入,稳定有效的表达,可控性增强.目前用于基因治疗的载体有两种:病毒载体和非病毒载体.虽然基因治疗的临床实验研究多采用病毒载体,... 详细信息

随着基因治疗研究的深入,人们发现,基因治疗的关键是选择恰当的载体及导入方法,使目的基因获得靶向性导入,稳定有效的表达,可控性增强.目前用于基因治疗的载体有两种:病毒载体和非病毒载体.虽然基因治疗的临床实验研究多采用病毒载体,但是不同的病毒载体由于各自存在许多不足,如潜在致癌性、自身免疫原性以及目的基因容量小、靶向特异性差等,限制了它的应用.而非病毒载体,具有低毒、低免疫反应、不发生外源基因随机整合等优点,越来越受到重视.非病毒载体的基因导入方法主要可分为物理方法和化学方法两种.本文对非病毒载体的基因导入方法方面的研究进展作扼要综述。[第一段]

关键词：基因治疗基因转移非病毒载体

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