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蚌埠医学院学报 2014年第10期39卷 1324-1326页

作者：王英薛玉芹王雪梅陈勇李江艳李倩唐洁夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的:从结核分枝杆菌H37Ra菌株克隆早期分泌性抗原靶6(ESAT6)基因并进行序列分析。方法:以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模版,用PCR方法扩增ESAT6基因,将扩增产物连接到克隆载体pTG19-T中,并用PCR、单双酶切和测序进行鉴定,以BLAST... 详细信息

目的:从结核分枝杆菌H37Ra菌株克隆早期分泌性抗原靶6(ESAT6)基因并进行序列分析。方法:以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模版,用PCR方法扩增ESAT6基因,将扩增产物连接到克隆载体pTG19-T中,并用PCR、单双酶切和测序进行鉴定,以BLAST软件进行序列比对分析。结果:从结核分枝杆菌H37Ra株成功克隆了ESAT6基因,测序表明该片段由288 bp组成,与GenBank所报告的H37Rv基因相比同源性为100%。结论:成功克隆了H37Ra株ESAT6编码基因,其序列与H37Rv标准株ESAT6编码基因完全一致。

关键词：结核分枝杆菌 H37Ra株早期分泌性抗原靶6基因克隆序列分析

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胃癌中幽门螺杆菌L型感染和淋巴管生成因子与淋巴结转移的关系

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华中科技大学学报（医学版） 2014年第1期43卷 32-38页

作者：蔡兆根于东红吴海波冯振中赵艳蚌埠医学院第一附属医院临床病理科蚌埠医学院病理学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233003 安徽医科大学附属省立医院临床病理科合肥230001

目的研究胃癌组织中血管内皮生长因子-C、-D、-A(VEGF-C、-D、-A)及成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)的表达和幽门螺杆菌L型(helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染与淋巴结转移的关系。方法应用革兰染色和免疫组化SP法检测112例胃癌组织... 详细信息

目的研究胃癌组织中血管内皮生长因子-C、-D、-A(VEGF-C、-D、-A)及成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)的表达和幽门螺杆菌L型(helicobacter pylori L-form,Hp-L型)感染与淋巴结转移的关系。方法应用革兰染色和免疫组化SP法检测112例胃癌组织和30例对照组中的Hp-L型感染情况,同时免疫组化SP法检测上述组织中VEGF-C、-D、-A及FGF-2的表达情况及D2-40标记的微淋巴管密度值(LVD值),分析Hp-L型和淋巴管生成因子表达的关系及与LVD值的关系。结果胃癌组织中革兰染色Hp-L型检出率为65%,免疫组化Hp-L型抗原表达率为62%。胃癌组的Hp-L型阳性率、淋巴管生成因子阳性率及LVD值均高于对照组(均P<0.01);胃癌组中Hp-L阳性组的LVD值和VEGF-C、-D的表达阳性率均高于Hp-L阴性组(均P<0.05);VEGF-C、-D阳性组的LVD值高于阴性组(均P<0.05)。多因素分析发现,TNM分期和LVD值与胃癌淋巴结转移密切相关(均P<0.05)。结论 Hp-L型感染和淋巴管生成因子与胃癌的发生、发展相关,VEGF-C、-D与胃癌淋巴管生成关系密切,Hp-L型感染在肿瘤淋巴管生成和淋巴结转移方面具有一定作用,两方面因素共同促进胃癌的侵袭和转移。

关键词：胃癌幽门螺杆菌L型微淋巴管密度淋巴管生成因子

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抗疟原虫单抗M26-32 IgM的单体化及其免疫学特性研究

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中国人兽共患病学报 2014年第6期30卷 551-555,567页

作者：陶志勇徐岁夏惠顾亚萍刘耀宝方强高琪蚌埠医学院病原生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030 江苏省寄生病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室无锡214064

目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨... 详细信息

目的改造IgM类抗疟原虫单抗M26-32为单体IgM亚单位,胶体金标记天然和改造后两种M26-32用于检测疟原虫抗原。方法复苏培养M26-32杂交瘤细胞,接种BALB/c小鼠,收集含有单抗的腹水,用商品HiTrap IgM HP柱纯化腹水中的IgM抗体,并用L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗成单体IgM亚单位。经间接免疫荧光检定两种抗体的效价,并用胶体金标记,分别检测恶性疟原虫和间日疟原虫可溶性抗原。结果接种20只小鼠,共采集约80mL单抗腹水,经HiTrap IgM HP柱纯化,获得了纯度较高的M26-32单抗。经L-半胱氨酸裂解后,Native电泳显示天然IgM被裂解为单体亚单位,IFA结果显示,亚单位M26-32与天然五聚体IgM滴度无差别。经胶体金标记后,两种金标抗体均分别能检测1∶100稀释的恶性疟原虫和1∶10稀释的间日疟原虫可溶性抗原。结论建立了L-半胱氨酸裂解IgM类M26-32单抗为单体IgM亚单位及其胶体金标记的方法,为利用M26-32进一步制备相应快速诊断工具奠定基础。

关键词：疟疾单克隆抗体 M26—32 IgM 胶体金

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COX-2选择性抑制剂塞来昔布联合PPAR-γ配体罗格列酮治疗子宫内膜癌的实验研究

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华中科技大学学报（医学版） 2014年第6期43卷 619-625页

作者：冯振中武世伍李楠蔡兆根吕秀红陈嘉薇蚌埠医学院第一附属医院病理科蚌埠医学院病理学教研室安徽省感染与免疫重点实验室上海交通大学附属上海市第一人民医院病理科蚌埠233004

目的研究环氧合酶-2(COX-2)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)蛋白在子宫内膜癌中的表达和临床意义,探讨COX-2选择性抑制剂塞来昔布联合PPAR-γ配体罗格列酮共同应用对于肿瘤细胞的干预效果。方法采用免疫组化方法,结合组织芯... 详细信息

目的研究环氧合酶-2(COX-2)和过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)蛋白在子宫内膜癌中的表达和临床意义,探讨COX-2选择性抑制剂塞来昔布联合PPAR-γ配体罗格列酮共同应用对于肿瘤细胞的干预效果。方法采用免疫组化方法,结合组织芯片技术,检测124例子宫内膜样腺癌、35例正常子宫内膜中COX-2和PPAR-γ蛋白的表达水平,结合临床病理因素进行分析。联合应用塞来昔布和罗格列酮处理RL95-2子宫内膜癌细胞,观察其对于肿瘤细胞生物学行为的影响和协同抑瘤作用。结果在子宫内膜样腺癌中,COX-2蛋白表达明显升高,PPAR-γ蛋白表达相对降低,两者具有负性相关关系。塞来昔布和罗格列酮可以有效抑制RL95-2子宫内膜癌细胞的增殖、侵袭、转移能力,联合应用抑制肿瘤的效果明显高于单独药物组。结论 COX-2的高表达和PPAR-γ的低表达与子宫内膜癌的发生、发展有密切关系,以COX-2和PPAR-γ为共同靶点,有望成为临床子宫内膜癌预防和治疗的重要手段和有效途径。

关键词：子宫内膜癌环氧合酶-2 过氧化物酶体增殖物激活受体-γ 塞来昔布罗格列酮

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自然杀伤T细胞抗感染作用的研究进展

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微生物与感染 2014年第1期9卷 61-64页

作者：林娜刘勇蚌埠医学院微生物学教研室安徽省感染与免疫重点实验室蚌埠233030

自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类与自然杀伤细胞具有共同表面标记的T细胞,可识别由CD1d呈递的糖脂类抗原。活化后的NKT细胞通过分泌多种细胞因子和趋化因子,增强树突细胞(DC)、T细胞、B细胞等多种免疫细胞的功能,在非特异与特异性免疫之... 详细信息

自然杀伤T细胞(NKT细胞)是一类与自然杀伤细胞具有共同表面标记的T细胞,可识别由CD1d呈递的糖脂类抗原。活化后的NKT细胞通过分泌多种细胞因子和趋化因子,增强树突细胞(DC)、T细胞、B细胞等多种免疫细胞的功能,在非特异与特异性免疫之间起桥梁作用。近年来研究发现,NKT细胞不仅在抗细菌感染中发挥重要作用,在抗病毒及抗寄生虫感染中也发挥一定作用。

关键词：自然杀伤T细胞 CD1d 抗感染免疫

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基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫特异性抗原肽

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中国血吸虫病防治杂志 2014年第3期26卷 292-295,310页

作者：陶志勇徐岁王媛媛方强夏惠高琪蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠233030 安徽省感染与免疫重点实验室江苏省血吸虫病防治研究所卫生部寄生虫病预防与控制技术重点实验室江苏省寄生虫分子生物学重点实验室

目的建立一种基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫(Plasmodium vivax,***)特异性抗原肽的方法。方法以PlasmoDB数据为基础,建立间日疟原虫蛋白序列数据库。编写重复序列查找软件,逐一检索16 aa多肽在全部蛋白序列中的重... 详细信息

目的建立一种基于蛋白重复序列及线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫(Plasmodium vivax,***)特异性抗原肽的方法。方法以PlasmoDB数据为基础,建立间日疟原虫蛋白序列数据库。编写重复序列查找软件,逐一检索16 aa多肽在全部蛋白序列中的重复次数,统计出重复较高者进行连续B细胞表位预测,优选具有间日疟原虫特异性的肽进行合成,偶联钥孔戚血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)后免疫小鼠,并检测抗体滴度。结果通过软件分析间日疟原虫全部5 432个蛋白序列中的16肽的重复次数,利用BcePred网站预测其中重复较高的1 000个序列,获得22个候选肽,经聚类分析和相似性比较,优选到5个潜在特异性肽,人工合成并偶联KLH后免疫小鼠诱生的抗体滴度均超过1:9 000。结论建立了一种基于蛋白重复序列联合线性B细胞表位预测筛选间日疟原虫特异性抗原肽的方法,得到的5个肽均能诱导小鼠产生高滴度抗体。

关键词：间日疟原虫疟疾重复蛋白序列抗原表位

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旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

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第九届全国免疫学学术大会

作者：朱伟李江艳李倩王小莉夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

研究背景:类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种常见的慢性自身免疫性疾病,具有高发病率和高致残率。目前认为RA是由于Th1/Th2和Th17/Treg免疫失衡导致自身免疫系统紊乱所致,纠正免疫失衡可以治疗或预防RA。近年发现旋毛虫感... 详细信息

研究背景:类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种常见的慢性自身免疫性疾病,具有高发病率和高致残率。目前认为RA是由于Th1/Th2和Th17/Treg免疫失衡导致自身免疫系统紊乱所致,纠正免疫失衡可以治疗或预防RA。近年发现旋毛虫感染能激发宿主强烈的Th2优势应答,从而降低部分自身免疫性疾病的发生、发展。我们拟探讨旋毛虫感染是否可能通过免疫调节对RA发挥影响。目的:观察旋毛虫感染对CIA模型小鼠的疾病发生、病情的影响并探讨旋毛虫感染对CIA模型小鼠可能的免疫调控机制。方法:建立小鼠胶原性关节炎（CIA）模型,以旋毛虫肌幼虫分别于CIA造模前2W、造模同时、造模后2W感染小鼠。观察小鼠关节炎的发病情况,判断旋毛虫不同时期感染对CIA小鼠的影响。首次CⅡ免疫6W后处死小鼠,取小鼠足爪和膝关节部位进行病理切片,观察其不同组间病理变化。ELISA法检测小鼠血清CⅡ胶原特异IgG及其亚类抗体IgG1、IgG2a水平。H-TdR掺人法检测脾淋巴细胞增殖反应。流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中Th1、Th2、Th17、Terg细胞亚群比例。结果:与CIA模型对照组相比较,CIA造模前2W感染旋毛虫组,能显著减轻CIA小鼠关节炎的病情,减轻病理损伤;血清中CⅡ胶原特异性tgG、IgG2a水平显著降低,IgG1水平升高。脾淋巴细胞对ConA多克隆刺激及CⅡ抗原特异性刺激诱发的增值反应明显降低。CIA造模同时感染旋毛虫组对病情和发病率,脾淋巴细胞增殖以及血清CⅡ胶原IgG及其亚类未有明显影响。CIA造模后2W感染旋毛虫组则加重了关节炎病情及病理损伤,但对脾淋巴细胞增殖和血清CⅡ胶原IgG及其亚类未有明显影响。与CIA模型对照组相比,CIA造模前2W感染旋毛虫组IFN-γCD4T和IL-17CD4T细胞亚群比例显著降低,IL-4CD4T和Treg细胞亚群比例显著升高。CIA造模同时感染旋毛虫组及CIA造模后2W感染旋毛虫组的IFN-γCD4T、IL-17CD4T、IL-4CD4T和Treg细胞亚群比例较CIA模型对照组无显著性差异。结论:预先感染旋毛虫能够减轻CIA小鼠的临床症状及病理损伤,这有赖于造模前预先感染旋毛虫启动Th2、Treg优势应答来抑制异种Ⅱ型胶原诱发的致病性Th1和Th17应答。

关键词：旋毛虫免疫调节 Th细胞胶原性关节炎

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旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

旋毛虫感染诱导的Th免疫偏移对小鼠胶原性关节炎的影响

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：朱伟李江艳李倩王小莉夏惠方强蚌埠医学院病原生物学教研室感染与免疫安徽省重点实验室

研究背景:类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病,具有高发病率和高致残率.目前认为RA是由于Th1/Th2和Th17/Treg免疫失衡导致自身免疫系统紊乱所致,纠正免疫失衡可以治疗或预防RA.近年发现旋毛虫感染能... 详细信息

研究背景:类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种常见的慢性自身免疫性疾病,具有高发病率和高致残率.目前认为RA是由于Th1/Th2和Th17/Treg免疫失衡导致自身免疫系统紊乱所致,纠正免疫失衡可以治疗或预防RA.近年发现旋毛虫感染能激发宿主强烈的Th2优势应答,从而降低部分自身免疫性疾病的发生、发展.我们拟探讨旋毛虫感染是否可能通过免疫调节对RA发挥影响.目的:观察旋毛虫感染对CIA模型小鼠的疾病发生、病情的影响并探讨旋毛虫感染对CIA模型小鼠可能的免疫调控机制.

关键词：旋毛虫免疫调节 Th细胞胶原性关节炎

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活动性肺结核病人外周血中分泌IL-22和IL-17的γ δ T细胞亚群变化的探讨

活动性肺结核病人外周血中分泌IL-22和IL-17的γ δ T细胞亚群变...

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第一次全国中西医结合检验医学学术会议暨中国中西医结合学会检验医学专业委员会成立大会

作者：梁华杨军平李柏青江西中医药大学附属医院检验科蚌埠医学院免疫学教研室安徽省感染与免疫重点实验室

目的:检测结核病患者和健康人外周血中分泌IL-22和IL-17的γδT细胞亚群比例的变化,以探讨分泌不同细胞因子的γδT细胞亚群在抗结核感染免疫反应中的作用;方法:取肝素抗凝全血,加RPMI1640培养液等体积混匀,依次加入佛波醇酯和离子霉素... 详细信息

目的:检测结核病患者和健康人外周血中分泌IL-22和IL-17的γδT细胞亚群比例的变化,以探讨分泌不同细胞因子的γδT细胞亚群在抗结核感染免疫反应中的作用;方法:取肝素抗凝全血,加RPMI1640培养液等体积混匀,依次加入佛波醇酯和离子霉素,37℃,5%C02培养2h,再加入蛋白转运抑制剂莫能菌素继续培养4h,收集细胞后先加抗人CD3-APC,和TCR-γδ-TC荧光抗体进行表染,4℃避光反应20分钟,经溶血、洗涤、固定后,0.1%皂素透膜10分钟,最后加入抗人IL-22-PE和IL-17-FITC荧光抗体进行胞染,4℃30分钟,洗涤后2%PFA重悬细胞,应用流式细胞仪和CellQuest软件检测和分析结果,同时设置同型对照;结果:健康对照组(n=δ)分泌IL-22和IL-17的γδT细胞在所有γδT细胞中的比例分别为(1.50±0.56)%和(0.25±0.19)%,结核病患者组(n=15)分泌IL-22和IL-17的γδT细胞在所有γδT细胞中的比例分别为(3.09±1.74)%和(0.72±0.51)%,后者均明显高于前者(p<0.05);.而共分泌IL-22和IL-17的γδT细胞比例在健康对照组为(0.31±0.20)%,在结核病患者组为(0.44±0.33)%,二者比较差异无统计学意义(p>0.05);结论:γδT细胞中存在单独分泌IL-22、IL-17和共分泌IL-22和IL-17的不同细胞亚群,活动性肺结核病患者外周血中分泌IL-22的γδT细胞比例增高,其增高并非与分泌IL-17的γδT细胞比例增高引起有关。

关键词： γ δ T细胞 IL-22 IL-17 肺结核流式细胞术

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结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6的构建、鉴定及免疫效应评价

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南方医科大学学报 2013年第7期33卷 945-950页

作者：王雪梅王英薛玉芹陈勇陶志勇夏惠唐洁方强蚌埠医学院病原生物学教研室蚌埠医学院安徽省感染与免疫重点实验室安徽蚌埠233030 蚌埠医学院蚌埠医学院免疫学教研室安徽蚌埠233030

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-... 详细信息

目的构建结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6并探讨其诱导的免疫效应。方法将扩增自结核杆菌基因组的ESAT-6基因装入pVAX1载体构建pVAX1/ESAT-6重组质粒;经酶切、测序鉴定后,利用阳离子聚合物介导将重组质粒pVAX1/ESAT-6转染Hela细胞,分别以RT-PCR法检测ESAT-6 mRNA的表达、间接免疫荧光法检测ESAT-6蛋白表达。重组质粒经体内电转染免疫小鼠后,采用ELISA法测定小鼠血清中IFN-γ及抗ESAT-6特异性抗体IgG的水平;流式细胞术检测小鼠淋巴细胞增殖水平;ELISPOT检测产生IFN-γ的淋巴细胞频数。结果构建的重组质粒pVAX1/ESAT-6经双酶切于3000 bp和300 bp处各见1条带,测序结果显示插入序列与ESAT-6基因序列无差异。重组质粒转染Hela细胞后,RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳于约300 bp处见目的条带,间接免疫荧光检测显示特异性绿色荧光。重组质粒免疫小鼠后,血清中抗ESAT-6特异性抗体IgG水平较对照组(空质粒组和生理盐水对照组)明显升高;血清中IFN-γ水平、小鼠脾淋巴细胞增殖水平及产生IFN-γ的淋巴细胞数明显均高于对照组(空质粒组和生理盐水对照组)。结论成功构建了结核病DNA疫苗pVAX1/ESAT-6,该疫苗可有效诱导小鼠产生特异性细胞免疫和体液免疫效应。

关键词：结核分枝杆菌 ESAT-6 DNA疫苗细胞免疫体液免疫

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