检索结果-内蒙古大学图书馆

第七届全国创伤学术会议暨2009海峡两岸创伤医学论坛

作者：赵志力杨蓉娅谷廷敏王驰雷永红张翠萍付小兵北京军区总医院全军皮肤病诊治中心美容整形中心解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨细胞外基质对表皮干细胞间通讯的调节作用机制,为深入理解皮肤创伤愈合机制提供新理论。方法体外分离和培养人表皮干细胞(n=10),流式细胞仪检测抗原表达。实验细胞模型是2×106表皮干细胞接种在胶原表面,实验组为表皮干细胞... 详细信息

目的探讨细胞外基质对表皮干细胞间通讯的调节作用机制,为深入理解皮肤创伤愈合机制提供新理论。方法体外分离和培养人表皮干细胞(n=10),流式细胞仪检测抗原表达。实验细胞模型是2×106表皮干细胞接种在胶原表面,实验组为表皮干细胞+Ⅳ型胶原基质(n=10),对照组为表皮干

关键词：细胞间通讯细胞缝隙连接细胞外基质

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再生医学中FGF的研究和应用

再生医学中FGF的研究和应用

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第六届中国美容与整形医师大会;第七届东方国际美容外科会议;第97届日本美容外科学会大会

作者：宗宪磊蔡景龙姜笃银付小兵山东大学第二医院美容整形烧伤外科解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的总结近年来FGF在再生医学中应用研究的文献,分析FGF应用存在的问题及改进方案。资料来源应用计算机检索Medline 2002-01/2007-10期间与FGF研究及应用有关的文章,检索词"FGF,heal,skin,scar,regenerate",并限定文章语言种... 详细信息

目的总结近年来FGF在再生医学中应用研究的文献,分析FGF应用存在的问题及改进方案。资料来源应用计算机检索Medline 2002-01/2007-10期间与FGF研究及应用有关的文章,检索词"FGF,heal,skin,scar,regenerate",并限定文章语言种类为"English"。检索CBM数据库2002-1/2007-10期间相关文章,检索词"FGF,创伤愈合,皮肤附件,瘢痕,组织工程"。资料选择对资料进行筛选,选取近年发表的针对性强的文献,同一领域的文章选择近期发表的或权威杂志的文章。资料提炼共收集到223篇相关文献,对其中密切相关的49篇文献进行分类整理用于综述。资料综合大面积烧伤患者及糖尿病等难愈性患者存在皮源短缺、愈合缓慢及愈合质量较差等问题,而组织工程皮肤替代物性能较差,难以达到正常皮肤的性能。FGF与皮肤附件发生、促进创面愈合、瘢痕增生关系密切,在创面愈合及组织工程皮肤替代物中有较多的研究和应用,但是目前FGF的促肿瘤生长和促瘢痕生长作用,及其不稳定性限制了FGF的广泛应用,FGF在组织工程皮肤替代物中的应用也尚不成熟。结论虽然FGF能够促进创面愈合速度,改善创面愈合质量,但是明显的副作用及其不稳定性限制了FGF的广泛应用。尚需改善FGF的性能,改进在创面直接应用及在组织工程皮肤替代物的应用方式。

关键词：再生医学创面愈合 FGF 应用

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蜕皮甾酮体外促进人表皮干细胞增殖的实验研究

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感染．炎症．修复 2009年第2期10卷 74-77,F0002页

作者：李国芳吴旭付小兵张翠萍南方医科大学附属南方医院胸心血管外科广东广州510515 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

目的:观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞增殖的影响。方法:中性蛋白水解酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮的表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(K19)、K14、K10抗原表达以鉴定表皮干细胞。分别用EDS终浓度为0(... 详细信息

目的:观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞增殖的影响。方法:中性蛋白水解酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮的表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(K19)、K14、K10抗原表达以鉴定表皮干细胞。分别用EDS终浓度为0(对照组)、10、20、40、80、160mg/L的Epilife培养基培养表皮干细胞,于培养1d、2d、3d、4d时用3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5二苯基溴化四唑(MTT)法于酶标仪上检测490nm处的吸光度值(A值),判定EDS对表皮干细胞体外增殖的影响。4d时采用流式细胞术检测各组细胞的周期改变,计算增殖指数(PI)。结果:免疫细胞化学法检测提示β1整合素、K19、K14抗原明显阳性,K10抗原阴性。培养1d、2d时,20、40、80mg/L组吸光度高于对照组(P<0.05),10、160mg/L组吸光度与对照组比较差异无显著性(P>0.05);培养3d、4d时,各实验组吸光度均高于对照组(P<0.05);各时间点所检测的吸光度值均以80mg/L时最高。流式细胞技术检测实验组PI值分别为40.00%、40.41%、40.96%、43.76%、40.87%,均高于对照组35.53%;实验组中以80mg/L时最高。结论:体外培养条件下EDS能促进人表皮干细胞的增殖,该促进作用在80mg/L时最为显著。

关键词：蜕皮甾酮表皮干细胞增殖创面愈合

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ERK与NF-κB信号通路在汗腺发育过程中作用的研究进展

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感染．炎症．修复 2009年第3期10卷 190-192页

作者：艾丽李秀霞张翠萍内蒙古医学院病理教研室内蒙古呼和浩特010059 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048

大面积深度烧伤形成的瘢痕组织往往导致患者汗腺等皮肤附属器受损或丧失，从而影响患者的生存质量。因此，汗腺重建研究具有重大的临床意义。汗腺细胞的分化、增殖和结构的形成受多种细胞外基质成分、调控因子、作用蛋白和信号通路的调... 详细信息

大面积深度烧伤形成的瘢痕组织往往导致患者汗腺等皮肤附属器受损或丧失，从而影响患者的生存质量。因此，汗腺重建研究具有重大的临床意义。汗腺细胞的分化、增殖和结构的形成受多种细胞外基质成分、调控因子、作用蛋白和信号通路的调控，迄今为止人们仍未能在体外建立功能完全的汗腺组织。因此，如何从汗腺发生的角度来实现汗腺的重建成为当前创伤修复研究的重要课题。研究证实胞外信号调节激酶（ERK）信号通路与核转录因子-κB（NF-κB）信号通路在汗腺发生和发育过程中具有重要作用，现就以上两条通路的研究进展综述如下。

关键词：信号通路汗腺细胞发育过程 NF-κB ERK 胞外信号调节激酶大面积深度烧伤细胞外基质成分

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蜕皮甾酮对人表皮干细胞体外增殖的影响

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新乡医学院学报 2009年第3期26卷 246-248,F0004页

作者：李国芳吴旭付小兵张翠萍周云峰吴昌昊南方医科大学附属南方医院胸心血管外科广东广州510515 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所创伤修复重点实验室北京100037

目的观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞(hESCs)体外增殖的影响。方法采用中性蛋白酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(CK19)、角蛋白14(CK14)及角蛋白10(CK10)的表达以鉴定hESC... 详细信息

目的观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞(hESCs)体外增殖的影响。方法采用中性蛋白酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(CK19)、角蛋白14(CK14)及角蛋白10(CK10)的表达以鉴定hESCs。分别用含0 mg.L-1(对照组)、10 mg.L-1(10 mg.L-1组)、20 mg.L-1(20 mg.L-1组)、40 mg.L-1(40 mg.L-1组)、80 mg.L-1(80 mg.L-1组)及160 mg.L-1(160 mg.L-1组)EDS的Ep ilife培养基作用第3代hESCs 3 d,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测酶标仪490 nm下的吸光度值,评价EDS对hESCs体外增殖的影响。结果免疫细胞化学法检测提示第3代表皮干细胞β1整合素、CK 19、CK 14的表达阳性,CK 10表达阴性。EDS作用3 d后,10 mg.L-1组、20 mg.L-1组、40 mg.L-1组、80 mg.L-1组及160 mg.L-1组吸光度均高于对照组(P<0.05);40 mg.L-1组、80 mg.L-1组和160 mg.L-1组吸光度均高于10 mg.L-1组和20 mg.L-1组(P<0.05);80 mg.L-1组吸光度高于40 mg.L-1组和160 mg.L-1组(P<0.05);其余各组间两两比较无统计学差异(P>0.05)。结论体外培养条件下EDS能促进hESCs增殖,该作用在EDS浓度为80 mg.L-1时最为显著。

关键词：蜕皮甾酮表皮干细胞增殖体外

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去分化表皮干细胞的来源鉴定和分析

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感染．炎症．修复 2009年第4期10卷 205-207,F0002页

作者：张翠萍付小兵陈鹏包晓霞孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射医学研究所电磁学和激光生物学实验室北京100850

目的:利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法:包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移... 详细信息

目的:利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法:包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移植到雌性BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,5d后用免疫组化法检测皮片内角蛋白10(CK10)、CK19和β1整合素的表达,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内去分化来源的表皮干细胞,并采用PCR的方法检测去分化细胞内的Y染色体。结果:未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性,CK19和β1整合素染色阳性;Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5 d,在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。Ⅳ型胶原粘贴分离去分化来源的表皮干细胞,结果表明,移植皮片组在10min内约有4.56%的贴壁细胞出现,而未移植皮片组3h内无贴壁细胞出现。PCR分析结果显示在上述贴壁细胞内能检测到Y染色体的特异序列,而宿主来源的组织检测不到。结论:去分化表皮干细胞来源于移植皮片内成熟表皮细胞的去分化,而非宿主体内的干细胞。

关键词：表皮细胞去分化染色体

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坐标定位划痕法在研究“细胞创面”愈合率中的应用

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感染．炎症．修复 2009年第2期10卷 93-94页

作者：李富刘文忠雷永红张翠萍蔡飒孙同柱陈小波包晓霞内蒙古医学院基础医学院人体解剖学教研室内蒙古呼和浩特010059 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:改良传统"细胞创面"模型的制备方法,提高对"细胞创面"愈合率的统计的精确性。方法:在6孔板每一孔外底面用刀尖划上横纵坐标轴,用绿色记号笔在横轴的上、下方平行于横轴各画5条等距离的绿带。接种目的细胞,待... 详细信息

目的:改良传统"细胞创面"模型的制备方法,提高对"细胞创面"愈合率的统计的精确性。方法:在6孔板每一孔外底面用刀尖划上横纵坐标轴,用绿色记号笔在横轴的上、下方平行于横轴各画5条等距离的绿带。接种目的细胞,待其长满内表面时用1000μl微量移液器的吸头在纵轴的左、右平行于纵轴各划2条等距离的细胞缺损带。在观察时间点观察绿带与细胞缺损带重叠形成的"矩形区域"的宽度或面积,计算愈合率。结果:可以特定追踪观察每个"矩形区域"内"细胞创面"愈合率情况,且"矩形区域"的例数可以符合统计学要求。结论:坐标划痕法是一种较精确统计"细胞创面"愈合率可行的方法。

关键词：坐标定位划痕法 “细胞创面”愈合率矩形区域

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在体诱导表皮细胞去分化的初步实验研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 1998-2002页

作者：蔡飒付小兵雷永红韩冰郭永峰孙同柱王君李海红解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7d取出移植皮片,采用... 详细信息

目的在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7d取出移植皮片,采用免疫组织化学染色、流式细胞仪检测、Western blot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERK MAPK通路各信号分子表达的变化情况。结果去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性;移植后5d,存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布。流式细胞仪检测结果显示,表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞由移植前的0.00%分别增加到7.54%和5.24%,而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%。Western blot和PCR检测也证实CK19和β1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强。ERK及上下游信号分子(p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-myc)表达增强。t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异(P>0.05)。结论处于终末分化阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转,这个过程可能与ERK MAPK信号通路有关。

关键词：去分化异种移植表皮细胞表皮干细胞胞外信号调节激酶

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干细胞与烧伤创面修复

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中华烧伤杂志 2008年第5期24卷 365-366页

作者：付小兵盛志勇解放军总医院基础医学所第一附属医院全军刨伤修复重点实验室北京100853

干细胞治疗作为生物治疗的重要方法之一，近10余年来在烧伤领域的应用已显示出诱人的前景。国内将干细胞治疗作为进一步提高烧伤创面修复质量的重要方法，已经在加快创面愈合速度和减少瘢痕发生率、促进汗腺与毛囊再生及组织工程皮肤构... 详细信息

干细胞治疗作为生物治疗的重要方法之一，近10余年来在烧伤领域的应用已显示出诱人的前景。国内将干细胞治疗作为进一步提高烧伤创面修复质量的重要方法，已经在加快创面愈合速度和减少瘢痕发生率、促进汗腺与毛囊再生及组织工程皮肤构建等领域取得了重要进展。

关键词：烧伤干细胞创面修复

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低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果

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中华实验外科杂志 2008年第12期25卷 1587-1588页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室全军烧伤研究所北京100037

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行... 详细信息

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增，待扩增的细胞及上清量达300ml时进行病毒纯化及滴度测定。最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞，流式测定其感染效果。结果Ad／HIF-1质粒酶切鉴定正确；转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白（GFP）表达；获得的腺病毒滴度为1．8×10^11PFU／ml。病毒以MOI=50感染表皮细胞，2d后GFP阳性细胞的比例为97．46％。结论成功制备了HIF-1腺病毒载体，且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率，从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础。

关键词：低氧诱导因子-1 腺病毒表皮角质细胞

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