检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2008年第21期30卷 2003-2007页

作者：孙晓艳付小兵伊海英刘惠玲孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6... 详细信息

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6、12、24、48、72h后,MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后,表皮细胞的表型及功能的改变。结果MTT检测结果显示浓度为100ng/ml,诱导时间为36～48h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。在bFGF的作用之下,老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测结果表明,实验组细胞中β1整合素、CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志,在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后,实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多(分别为74.77%和15.74%);CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后,被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降(分别为4.56%和98.56%)。此外,RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中,β1整合素、CK19、CK14mRNA转录水平明显上调,而CK10mRNA表达则明显下降。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞,但其涉及具体机制需要进一步研究。

关键词：表皮细胞去分化干细胞免疫细胞化学流式细胞检测 MTT RT—PCR

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脂肪干细胞促进人表皮角质形成细胞创面模型愈合的研究

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中华外科杂志 2008年第20期46卷 1575-1578页

作者：袁方雷永红付小兵盛志勇蔡飒孙同柱北京大学医学部心血管研究所 100038 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养... 详细信息

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养（间接组，n=8）和单纯HEKa培养组（单纯组，n=8）。刮擦生长融合成片的HEKa细胞制备创面。培养24、48、72h后，计数迁移到创面的HEKa细胞数量并计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性以判定HEKa细胞的增殖活性。结果实验组、间接组、单纯组在伤后24h分别有（9．2±0．2）、（5．0±0．3）、（4．2±0．3）个细胞／高倍视野；48h分别有（58．5±0．4）、（26．5±0．3）、（20．7±0．5）个细胞／高倍视野；72h分别有（125．8±0．4）、（43．0±0．5）、（35．6±0．5）个细胞／高倍视野越过创缘进入创面，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。三组创面愈合率在伤后72h分别为61．0％±3．0％、35．0％±2．5％、32．0％±2．1％，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。脱氧胸腺嘧啶核苷掺入培养基法表明三组HEKa细胞的放射性强度为（1440±210）、（1050±280）、（1130±390）cpm／10^5细胞，实验组与两对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论rADSCs通过直接接触促进HEKa细胞的分裂增殖和迁移。

关键词：脂肪干细胞细胞培养创面愈合

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碱性成纤维细胞生长因子的研究进展

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解放军医学杂志 2008年第6期33卷 776-778页

作者：伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 内蒙古医学院组织胚胎学教研室

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子蛋白(fibroblast growth factors,FGFs)家族中的一员。目前已发现至少22种FGF,其中N3F-1(aFGF)、FGF-2(bFGF)及FGF-7的研究较为深入。bFGF是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质,因其具有广泛的生理功能和重要的临床应用价值而被国内外学者高度重视。bFGF不仅能刺激新生血管形成,参与创伤愈合和组织再生,促进胚胎组织发育和分化等,此外还与肿瘤的发生发展密切相关。近年来,重组bFGF已被应用于临床治疗创伤、溃疡及神经系统等疾病。[第一段]

关键词：成纤维细胞生长因子2 受体成纤维细胞生长因子

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进一步强调医学科学研究中基础与临床的密切结合

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感染．炎症．修复 2008年第1期9卷 3-4页

作者：付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

科学研究的目的总的来讲是发现自然现象、阐明科学规律以及通过理论向应用的转化促进社会生产力的发展。医学科学作为自然科学的一个部分,既服从于自然科学研究的一般规律,也有其独特的地方,其特殊性在于它的研究对象和最终的应用目标... 详细信息

科学研究的目的总的来讲是发现自然现象、阐明科学规律以及通过理论向应用的转化促进社会生产力的发展。医学科学作为自然科学的一个部分,既服从于自然科学研究的一般规律,也有其独特的地方,其特殊性在于它的研究对象和最终的应用目标是人体。因此,强调医学研究中基础与临床的密切结合,在于从源头抓起,通过创新的研究,最终解决临床的难题和服务于病人。

关键词：科学研究医学科学临床社会生产力自然现象自然科学医学研究

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高钙培养对表皮角质细胞形态和生长特点及角蛋白表达的影响

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感染．炎症．修复 2008年第2期9卷 87-89,F0002页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的：观察高钙培养后表皮角质细胞的形态、生长特点及角蛋白表达的变化，进一步探讨钙在促进表皮角质细胞分化过程中的重要作用。方法：表皮角质细胞分别在低钙（0.05mmol/L）和高钙（1.2mmol/L）环境条件下培养1-2d，光镜下观察细胞... 详细信息

目的：观察高钙培养后表皮角质细胞的形态、生长特点及角蛋白表达的变化，进一步探讨钙在促进表皮角质细胞分化过程中的重要作用。方法：表皮角质细胞分别在低钙（0.05mmol/L）和高钙（1.2mmol/L）环境条件下培养1-2d，光镜下观察细胞的形态和生长特点，并采用免疫组织化学方法检测表皮角质细胞中角蛋白10（K10）、K14和K19的表达水平。结果：低钙培养的表皮角质细胞散在生长，分布均匀，细胞间隙较大，胞膜圆滑，边界清楚。高钙培养后，细胞胞体变得扁平，细胞间隙消失，并且细胞出现明显的成簇生长趋势。在正常培养即低钙培养条件下，K10和K19阳性细胞比例较少，所培养的细胞几乎全为K14阳性细胞；在高钙培养条件下，K10和K19阳性细胞比例明显增加，而K14的表达没有明显变化。结论：高钙培养能改变表皮角质细胞的形态和生长特点并提高细胞内角蛋白的表达水平，从而促进表皮角质细胞的分化成熟。

关键词：表皮角质细胞钙分化

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从去分化途径来制造干细胞:新的机遇和挑战

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感染．炎症．修复 2008年第3期9卷 131-133页

作者：付小兵解放军总医院基础医学所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

干细胞的研究仍将是一项世界性的热门课题,一方面在于它许多深奥的基础科学问题有待深入研究,另一方面是它巨大的临床治疗性应用前景和商业价值有待进一步开发。就胚胎干细胞研究而言,目前的主要瓶颈问题概括起来主要有两方面,一是伦理... 详细信息

干细胞的研究仍将是一项世界性的热门课题,一方面在于它许多深奥的基础科学问题有待深入研究,另一方面是它巨大的临床治疗性应用前景和商业价值有待进一步开发。就胚胎干细胞研究而言,目前的主要瓶颈问题概括起来主要有两方面,一是伦理学障碍.二是技术困难.即怎么样才能方便地获取大量的胚胎干细胞用于研究。最近,有关从成体细胞通过去分化途径,即重编程过程获得“诱导性多能干细胞”(induced pluripotent stemcell,iPS)相关结果的发表,[第一段]

关键词：胚胎干细胞分化途径制造治疗性应用多能干细胞基础科学商业价值成体细胞

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二硝基苯修饰B16细胞对黑色素瘤小鼠疗效的实验研究

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感染．炎症．修复 2008年第3期9卷 157-161页

作者：杜楠李留树肖文华王希良孙同柱解放军总医院第一附属医院肿瘤科北京100037 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:探讨半抗原——二硝基苯(DNP)修饰的恶性黑色素瘤(恶黑)细胞激活树突状细胞(DC)后,对转移性黑色素瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法:采用DNP修饰恶黑细胞B16(H-2b),在体外激活C57BL/6小鼠(H-2b)外周血来源的DC,用于激发自体的T细胞,观察其... 详细信息

目的:探讨半抗原——二硝基苯(DNP)修饰的恶性黑色素瘤(恶黑)细胞激活树突状细胞(DC)后,对转移性黑色素瘤小鼠的抗肿瘤效应。方法:采用DNP修饰恶黑细胞B16(H-2b),在体外激活C57BL/6小鼠(H-2b)外周血来源的DC,用于激发自体的T细胞,观察其对T细胞的增殖和特异性T细胞杀伤功能。在由B16细胞接种产生的荷瘤C57BL/6小鼠实验中,将小鼠随机分为5组,于左背部注射及于左耳背面涂抹DNP修饰B16瘤苗联合DC(DNP-B16-DC组)、B16激活DC(B16-DC组)、单纯DC(DC组)、单纯DNP(DNP组)和生理盐水(生理盐水组,每组6只),观察各组抑瘤率和迟发型超敏反应。结果:经DNP修饰的B16细胞激活的DC,诱发的T细胞增殖能力和对B16细胞的特异性杀伤效应均明显高于未其修饰的B16细胞组和DC组。荷瘤小鼠实验显示,DNP-B16-DC组和单纯DNP组小鼠耳肿胀明显增加,其迟发型超敏反应明显强于其他各组。实验中DNP组有1只小鼠用药后20d死亡,其余小鼠DNP-B16-DC组抑瘤率(96.16%)明显高于B16-DC组(50.11%)、DC组(22.12%)和DNP组(57.79%,P<0.01),显示DNP-B16-DC具有更强的抑瘤作用。结论:DNP修饰B16所激活的DC可以诱导更强的特异性抗肿瘤作用。

关键词：二硝基苯树突状细胞黑色素瘤迟发型超敏反应抑瘤率

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采用基因芯片筛选与汗腺发育相关基因的初步研究

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感染．炎症．修复 2008年第3期9卷 146-149,F0002页

作者：周岗付小兵谢晓华孙同柱解放军总医院南楼外一科北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:探讨人胚胎皮肤汗腺在不同发育胎龄时的基因表达变化特征及其可能的生物学意义。方法:收集12周(H1)、16周(H2)、24周(H3)等3组不同胎龄胎儿皮肤,组织常规切片,显微镜下观察胚胎皮肤不同发育阶段的汗腺结构特征,提取不同胎龄的胚胎... 详细信息

目的:探讨人胚胎皮肤汗腺在不同发育胎龄时的基因表达变化特征及其可能的生物学意义。方法:收集12周(H1)、16周(H2)、24周(H3)等3组不同胎龄胎儿皮肤,组织常规切片,显微镜下观察胚胎皮肤不同发育阶段的汗腺结构特征,提取不同胎龄的胚胎表皮组织总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法和基因芯片技术检测胚胎皮肤汗腺在不同发育阶段的基因表达变化规律。结果:光镜下可见不同发育阶段的胎儿皮肤具有典型的组织学结构,胎龄24周时汗腺结构初步形成,数量稳定。在95%的可信区间内,H2与H1样本相比较(H2/H1),差异表达基因有113个,其中下调的基因有45个,上调的基因有68个;H3与H2样本相比较(H3/H2),差异表达基因有91个,其中下调的基因有66个,上调的基因有25个;差异表达的基因包括生长因子、细胞外基质分子和外胚层发育因子等,与汗腺发育进程密切相关。结论:将基因芯片运用于汗腺发生机制的研究,可以较全面地反映汗腺发育及成熟过程中基因表达变化规律,寻找特异性调控基因。通过对汗腺不同发育阶段的基因表达及功能研究,可以筛选关键步骤调控基因,指导实现分子基因水平调控皮肤创面修复和汗腺组织再生。

关键词：胎儿基因芯片汗腺发育

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骨髓间充质干细胞促进“创面”愈合的实验研究

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感染．炎症．修复 2008年第2期9卷 72-76,F0002页

作者：雷永红付小兵袁方蔡飒孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 北京大学医学部

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）促进创面愈合的作用和用于创面修复的可行性。方法：密度梯度离心法分离培养正常人骨髓间充质干细胞（hMSCs），流式细胞仪检测培养第二代细胞CD14、CD29、CD34、CD44、CD45和CD106抗原表达以鉴定MSC... 详细信息

目的：探讨骨髓间充质干细胞（MSCs）促进创面愈合的作用和用于创面修复的可行性。方法：密度梯度离心法分离培养正常人骨髓间充质干细胞（hMSCs），流式细胞仪检测培养第二代细胞CD14、CD29、CD34、CD44、CD45和CD106抗原表达以鉴定MSCs。实验分3组：直接共培养组（n=8）为hMSCs（1×10^5/ml）与人表皮角质形成细胞（HEKa）直接接触共培养；间接共培养组（n=7）为在transwell透明聚碳酸酯膜上层加入hMSCs细胞悬液[（2-3）×10^5个细胞）]，下层接种HEKa，间接共培养；单纯HEKa培养组（n=7）单纯培养HEKa。在倒置显微镜下刮擦生长融合成片的HEKa细胞以制备宽度为100μm的“表皮创面”模型。模型制备后24、48、72h，倒置相差显微镜下计数每高倍视野越过创缘迁移到创面的HEKa数，并用SigmaScan Pro5软件计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性，判定HEKa细胞的分裂增殖活性。结果：流式细胞仪检测第二代hMSCs CD29、CD44和CD106抗原阳性（分别为94.81%、95.38%、97.40%），CD14、CD34、CD45抗原阴性（分别为1.23%、3.05%、2.64%）；直接培养组、间接培养组和单纯HEKa培养组越过创缘进入创面的细胞伤后24h分别有（10.00±0.25）、（5.50±0.20）和（5.20±0.35）个/高倍视野；48h分别有（55.30±0.22）、（27.00±0.34）和（26.50±0.25）个/高倍视野；72h分别有（110.50±0.45）、（42.50±0.50）、（40.20±0.38）个/高倍视野。3组伤后72h创面愈合率分别为（60.00±0.04）%，（35.00±0.01）%、（33.00±0.05）%。脱氧胸腺嘧啶苷掺入培养基法表明hMSCs对体外共培养HEKa细胞的增殖作用分别为（1650±270）cpm/10^5 cell、（1240±210）cpm/10^5 cell、（1180±220）cpm/10^5 cell。上述各指标直接共培养组与单纯HEKa培养组比较，差异有显著性（P〈0.01），而间接培养组与单纯HEKa培养组间差异无显著性（P〉0.05）。提示共培养体系中的hMSCs导致HEKa分裂增殖速度增加，迁移到创面细胞数量增加，创面愈合速率增加。结论：hMSCs通过与表皮细胞接触可以促进其分裂增殖和迁移而加快创面愈合，hMSCs可参与皮肤损伤的修复。

关键词：骨髓间充质干细胞细胞培养创面愈合

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成纤维细胞生长因子在皮肤创面组织修复中的应用

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中国医药生物技术 2008年第1期3卷 54-57页

作者：宗宪磊蔡景龙姜笃银付小兵山东大学第二医院美容整形烧伤外科济南250033 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

皮肤是机体的重要屏障，烧伤后引起的局部或全身损害均与皮肤屏障的丧失有关，尽早修复缺损皮肤，封闭创面，重建皮肤屏障，有利于创面愈合和促进组织修复，最大限度地恢复皮肤的防御功能与外观。而目前大面积深度烧伤患者常存在严重的... 详细信息

皮肤是机体的重要屏障，烧伤后引起的局部或全身损害均与皮肤屏障的丧失有关，尽早修复缺损皮肤，封闭创面，重建皮肤屏障，有利于创面愈合和促进组织修复，最大限度地恢复皮肤的防御功能与外观。而目前大面积深度烧伤患者常存在严重的皮源不足，皮肤替代物的性能又较差，因此如何提高植皮成活率，改善皮肤替代物的性能就成为重要的因素。

关键词：成纤维细胞生长因子皮肤创面组织修复皮肤替代物皮肤屏障植皮成活率修复缺损创面愈合

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