检索结果-内蒙古大学图书馆

感染．炎症．修复 2009年第4期10卷 205-207,F0002页

作者：张翠萍付小兵陈鹏包晓霞孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射医学研究所电磁学和激光生物学实验室北京100850

目的:利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法:包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移... 详细信息

目的:利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法:包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移植到雌性BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,5d后用免疫组化法检测皮片内角蛋白10(CK10)、CK19和β1整合素的表达,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内去分化来源的表皮干细胞,并采用PCR的方法检测去分化细胞内的Y染色体。结果:未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性,CK19和β1整合素染色阳性;Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5 d,在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。Ⅳ型胶原粘贴分离去分化来源的表皮干细胞,结果表明,移植皮片组在10min内约有4.56%的贴壁细胞出现,而未移植皮片组3h内无贴壁细胞出现。PCR分析结果显示在上述贴壁细胞内能检测到Y染色体的特异序列,而宿主来源的组织检测不到。结论:去分化表皮干细胞来源于移植皮片内成熟表皮细胞的去分化,而非宿主体内的干细胞。

关键词：表皮细胞去分化染色体

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低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果

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中华实验外科杂志 2008年第12期25卷 1587-1588页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室全军烧伤研究所北京100037

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行... 详细信息

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增，待扩增的细胞及上清量达300ml时进行病毒纯化及滴度测定。最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞，流式测定其感染效果。结果Ad／HIF-1质粒酶切鉴定正确；转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白（GFP）表达；获得的腺病毒滴度为1．8×10^11PFU／ml。病毒以MOI=50感染表皮细胞，2d后GFP阳性细胞的比例为97．46％。结论成功制备了HIF-1腺病毒载体，且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率，从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础。

关键词：低氧诱导因子-1 腺病毒表皮角质细胞

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脂肪干细胞促进人表皮角质形成细胞创面模型愈合的研究

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中华外科杂志 2008年第20期46卷 1575-1578页

作者：袁方雷永红付小兵盛志勇蔡飒孙同柱北京大学医学部心血管研究所 100038 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养... 详细信息

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养（间接组，n=8）和单纯HEKa培养组（单纯组，n=8）。刮擦生长融合成片的HEKa细胞制备创面。培养24、48、72h后，计数迁移到创面的HEKa细胞数量并计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性以判定HEKa细胞的增殖活性。结果实验组、间接组、单纯组在伤后24h分别有（9．2±0．2）、（5．0±0．3）、（4．2±0．3）个细胞／高倍视野；48h分别有（58．5±0．4）、（26．5±0．3）、（20．7±0．5）个细胞／高倍视野；72h分别有（125．8±0．4）、（43．0±0．5）、（35．6±0．5）个细胞／高倍视野越过创缘进入创面，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。三组创面愈合率在伤后72h分别为61．0％±3．0％、35．0％±2．5％、32．0％±2．1％，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。脱氧胸腺嘧啶核苷掺入培养基法表明三组HEKa细胞的放射性强度为（1440±210）、（1050±280）、（1130±390）cpm／10^5细胞，实验组与两对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论rADSCs通过直接接触促进HEKa细胞的分裂增殖和迁移。

关键词：脂肪干细胞细胞培养创面愈合

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胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 883-887页

作者：孙晓艳付小兵盛志勇张翠萍孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚... 详细信息

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响。结果:原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nes-tin、PCNA为阳性,而K10不表达。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异。此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α6+CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α6+CD71+、α6-CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68.34%及4.51%。RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱。结论:Ⅳ型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调。

关键词：表皮干细胞抗体单克隆胚胎组织提取液

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碱性成纤维细胞生长因子诱导表皮细胞去分化的初步研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 2003-2007页

作者：孙晓艳付小兵伊海英刘惠玲孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6... 详细信息

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6、12、24、48、72h后,MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后,表皮细胞的表型及功能的改变。结果MTT检测结果显示浓度为100ng/ml,诱导时间为36～48h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。在bFGF的作用之下,老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测结果表明,实验组细胞中β1整合素、CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志,在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后,实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多(分别为74.77%和15.74%);CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后,被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降(分别为4.56%和98.56%)。此外,RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中,β1整合素、CK19、CK14mRNA转录水平明显上调,而CK10mRNA表达则明显下降。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞,但其涉及具体机制需要进一步研究。

关键词：表皮细胞去分化干细胞免疫细胞化学流式细胞检测 MTT RT—PCR

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中国烧伤医学50年进展

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中华烧伤杂志 2008年第5期24卷 321-322页

作者：汪仕良肖光夏杨宗城盛志勇第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所

我国烧伤医学专业，是在1958年上海成功抢救特重烧伤患者邱财康后发展起来的。50年来救治了成千上万例严重烧伤患者，累积了丰富经验，形成了中国特色的烧伤救治方案，治疗水平不断提高，居世界领先水平。20世纪80年代以来，广泛开展结... 详细信息

我国烧伤医学专业，是在1958年上海成功抢救特重烧伤患者邱财康后发展起来的。50年来救治了成千上万例严重烧伤患者，累积了丰富经验，形成了中国特色的烧伤救治方案，治疗水平不断提高，居世界领先水平。20世纪80年代以来，广泛开展结合临床的实验研究，使我国烧伤医学理论研究步入世界先进行列。

关键词：成就烧伤外科进展

来源：评论

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高钙培养促进人表皮角质细胞间的黏附和聚集

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中华实验外科杂志 2007年第8期24卷 1004-1005,I0004页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱孙晓艳蔡飒解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所北京100037 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的观察细胞外钙浓度变化对表皮角质细胞黏附聚集的影响,并探讨其可能的调控机制。方法本实验分为两组:低钙培养组(60μmol/L);高钙(2 mmol/L)培养组。培养3d后,镜下观察细胞的黏附和聚集现象;然后利用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)的... 详细信息

目的观察细胞外钙浓度变化对表皮角质细胞黏附聚集的影响,并探讨其可能的调控机制。方法本实验分为两组:低钙培养组(60μmol/L);高钙(2 mmol/L)培养组。培养3d后,镜下观察细胞的黏附和聚集现象;然后利用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)的方法测定E-钙调素和P-钙调素mRNA的表达水平;最后借助免疫荧光法检测E-钙调素和P-钙调素蛋白在细胞内的表达和分布。结果高钙培养3d后细胞分层并出现明显的黏附和聚集,E-钙调素也在高钙培养的条件下表达明显增加(P<0.01),而P-钙调素的表达没有明显的变化。结论高钙培养促进人表皮角质细胞的黏附和聚集,E-钙调素的表达可能在其中发挥重要作用。

关键词：钙角质细胞培养钙调素

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进一步重视创面处理中的几个重要环节

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中华烧伤杂志 2007年第1期23卷 13-15页

作者：付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室、解放军总医院基础医学研究所北京100037

创面处理贯穿于整个创（烧）伤治疗的始终，是该领域最重要、最基本的问题之一。20余年来，由于干细胞、组织工程和基因工程等高新生物技术的发展及其在创（烧）伤救治中的应用，使得创面处理的基础理论研究不断深入，临床治疗也有突破... 详细信息

创面处理贯穿于整个创（烧）伤治疗的始终，是该领域最重要、最基本的问题之一。20余年来，由于干细胞、组织工程和基因工程等高新生物技术的发展及其在创（烧）伤救治中的应用，使得创面处理的基础理论研究不断深入，临床治疗也有突破性进展，较大程度上推动了该学科领域的进步。当然，也应看到由于创面的复杂性，该领域仍有许多没解决的问题制约着临床治疗的进展，成为今后一段时间创面处理中不可忽视的重要环节。

关键词：烧伤创伤和损伤修复外科手术干细胞伤口愈合

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成体干细胞与再生医学:几个重要领域的进展与展望

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中华医学杂志 2007年第17期87卷 1153-1155页

作者：付小兵解放军总医院基础医学研究所第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

再生医学是近年来生物学和医学领域发展最为迅速并且已经初见成效的领域之一。随着人们认识的不断深入以及对科技投入的增加和大量高新技术的应用，使再生医学、特别是成体干细胞与再生医学的基础研究和临床治疗都取得了显著的成绩，为... 详细信息

再生医学是近年来生物学和医学领域发展最为迅速并且已经初见成效的领域之一。随着人们认识的不断深入以及对科技投入的增加和大量高新技术的应用，使再生医学、特别是成体干细胞与再生医学的基础研究和临床治疗都取得了显著的成绩，为将来大规模的治疗性应用提供了重要的理论依据和实验基础。

关键词：成体干细胞再生医学治疗性应用医学领域高新技术科技投入临床治疗生物学

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表皮干细胞的分离培养和鉴定

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中华实验外科杂志 2007年第2期24卷 163-165页

作者：孙晓艳付小兵孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的分离培养和鉴定人表皮基底层干细胞。方法中性蛋白水解酶选择性的消化表皮与真皮之间的细胞连接，采用改良的Ⅳ型胶原铺板选择黏附法分离、培养表皮中的干细胞，观察培养第2、4、6天时a6、β1整合素、K19、K14、p63、Nestin、CD34、... 详细信息

目的分离培养和鉴定人表皮基底层干细胞。方法中性蛋白水解酶选择性的消化表皮与真皮之间的细胞连接，采用改良的Ⅳ型胶原铺板选择黏附法分离、培养表皮中的干细胞，观察培养第2、4、6天时a6、β1整合素、K19、K14、p63、Nestin、CD34、PCNA及K10在表皮干细胞中的表达差异。结果改良过的Ⅳ型胶原铺板选择黏附法能够有效地促进表皮干细胞的贴壁和伸展。原代分离的表皮基底层干细胞a6、p1整合素，K19，K14，p63，Nestin，CD34及PCNA表达为强阳性而K10不表达。这些细胞具有干细胞的特点，可以形成克隆。随着培养时间的增加，表皮干细胞形态发生变化，a6、β1整合素、K19、K14，表达逐渐减弱，K10表达逐渐增强。此外，在原代分离的细胞中可见单个核样干细胞表达a6、β1整合素，K19，K14，P63，Nestin，CD34及PCNA，这些细胞形态相似体积较表皮基底层干细胞大，胞核为肾形，染色较深。结论中性蛋白水解酶消化合并改良过的Ⅳ型胶原铺板选择黏附法能够高效地分离表皮中的干细胞。分离的细胞具有干细胞的特点，可以形成集落。此外，原代分离培养的表皮干细胞中仍然可见单个核样干细胞，这些细胞形态相似，类似血液系统来源的单核细胞，胞质内均匀分布着粗大的阳性颗粒。单个核样干细胞可能与皮肤的发牛、发育以及创伤修复有关。

关键词：表皮干细胞单克隆抗体免疫组织化学

来源：评论

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