检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验外科杂志 2009年第3期26卷 286-288,409页

作者：伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 解放军总医院基础医学研究所内蒙古医学院基础医学院

目的观察碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体（pEGFP—C3-bFGF）能否转染体外培养的人表皮细胞并表达。方法采用脂质体（LipofectamineTM2000）转染法，将pEGFP—C3-bFGF转染至人表皮细胞系（HEKa细胞）中，在荧光显微镜下观察其... 详细信息

目的观察碱性成纤维细胞生长因子基因真核表达载体（pEGFP—C3-bFGF）能否转染体外培养的人表皮细胞并表达。方法采用脂质体（LipofectamineTM2000）转染法，将pEGFP—C3-bFGF转染至人表皮细胞系（HEKa细胞）中，在荧光显微镜下观察其瞬时表达及细胞形态。以同期培养的表皮细胞作为阴性对照，免疫细胞化学染色和免疫荧光标记法检测实验组及对照组中β1整合素、CK19、CK14及CK10在表皮细胞中表达的差异。结果荧光显微镜下观察基因转染率为31，6％，转染的细胞体积小，呈圆形或圆梭形，核质比大。免疫细胞化学染色结果显示，实验组细胞中CK19、CK14表达增强，CK10表达减弱。免疫荧光染色结果显示，转染阳性细胞β1整合素弱表达分布在胞膜上，CK19、CK14在胞膜和胞质中表达，CK10表达为阴性。结论pEGFP—C3-bFGF能够转染至人表皮细胞并表达，为探讨bFGF调控表皮细胞去分化的分子机制提供实验参考。

关键词：碱性成纤维细胞生长因子表皮细胞基因转染

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创面治疗中心的建设势在必行

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中华创伤杂志 2009年第9期25卷 769-770页

作者：付小兵陆树良蒋建新王正国解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 上海交通大学附属瑞金医院烧伤研究所第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

创面治疗不仅是一切创伤治疗的基础，而且也是防止后期并发症以及促进创伤患者早日康复的关键。而有一定规模和特色的创面治疗中心，则是促进创面治疗新技术发展和惠及创伤患者的保障。近二十余年来，各种创面在数量上的不断增多和导致... 详细信息

创面治疗不仅是一切创伤治疗的基础，而且也是防止后期并发症以及促进创伤患者早日康复的关键。而有一定规模和特色的创面治疗中心，则是促进创面治疗新技术发展和惠及创伤患者的保障。近二十余年来，各种创面在数量上的不断增多和导致创面形成各种原因的复杂性，使人们对创面治疗的需求也日益增高。另一方面，高新技术的发展给创面治疗提供了许多新的治疗手段和方法，

关键词：创面治疗治疗中心创伤患者后期并发症创伤治疗高新技术复杂性

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表皮细胞表达胚胎性角蛋白与创伤不同修复结局的关系

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中华外科杂志 2009年第16期47卷 1245-1248页

作者：魏欣净姜笃银宗宪磊付小兵盛志勇王魏单菲山东大学附属省立医院皮肤科济南250021 山东大学第二医院、山东大学组织工程研究所解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨特征性细胞角蛋白（CKs）在表皮组织的分布特征和变化规律及其与创伤修复不同结局的关系。方法对人假上皮瘤样增生（PEH）、瘢痕疙瘩（Ke）、增生性瘢痕（HS）和正常皮肤（NS）标本，采用组织病理学和免疫组织化学（IHC）双染... 详细信息

目的探讨特征性细胞角蛋白（CKs）在表皮组织的分布特征和变化规律及其与创伤修复不同结局的关系。方法对人假上皮瘤样增生（PEH）、瘢痕疙瘩（Ke）、增生性瘢痕（HS）和正常皮肤（NS）标本，采用组织病理学和免疫组织化学（IHC）双染色标记技术进行对比研究，观察CKs在表皮组织的分布特征和变化规律，并进行统计学分析。结果NS组表皮不表达CK8＆18和CK17。在活动期PEH、Ke和HS表皮组织中存在数量不等的CK8＆18^＋细胞和CK17^＋细胞，含量高低依次为PEH〉Ke〉HS和HS〉Ke〉PEH（P〈0．05），CK19^＋和CK5＆6^＋细胞有相似的变化趋势，而CK10^＋细胞则呈相反的变化趋势，在局部观察到相应的表皮超常增生、细胞形态改变和表皮下炎症反应。结论活动期PEH、Ke和HS表皮细胞存在程度不同的去分化和终末分化失衡，提示表皮细胞异常增殖和分化与创伤修复不同结局有关。

关键词：皮肤创伤和损伤细胞角蛋白干细胞细胞分化

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应用噬菌体随机十二肽库筛选hFGF-7相关模拟肽

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山东大学学报（医学版） 2009年第11期47卷 46-49页

作者：宗宪磊蔡景龙姜笃银付小兵盛志勇单菲山东大学组织工程研究所济南250033 山东大学第二医院美容整形烧伤外科济南250033 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽。方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体... 详细信息

目的应用噬菌体随机十二肽库生物淘选具有刺激表皮细胞增殖作用的人成纤维细胞生长因子-7(hFGF-7)噬菌体模拟肽。方法以hFGF-7单克隆抗体为靶,进行4轮生物淘选噬菌体随机十二肽库;随机挑取单克隆噬菌体,应用ELISA方法检测单克隆噬菌体的结合力,对结合力较好的单克隆噬菌体提取噬菌体DNA,进行测序,并行序列分析。结果经过4轮生物淘选,特异性噬菌体模拟肽获得了富集,ELISA检测结果显示获得的一些噬菌体模拟肽具有较好的结合力,测序获得11个与促进细胞分裂、增殖或抑制细胞增殖有关的碱基序列。结论从噬菌体随机十二肽库中可淘选到与hFGF-7相关的噬菌体模拟肽,其中部分噬菌体模拟肽可能会促进表皮细胞增殖,期望将来可应用于促进创面愈合。

关键词：噬菌体随机十二肽库人成纤维细胞生长因子-7噬菌体模拟肽生物淘选测序

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诱导性多潜能干细胞(iPS)研究：现状与展望

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中国工程科学 2009年第5期11卷 81-87页

作者：韩为东赵亚力付小兵解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为多潜能干细胞(iPS),是近年来干细胞研究领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术。与胚胎干细胞(ES)不同,iPS细胞的制造不需要毁损胚胎,因而不会涉及更多的伦理学问题。iPS的... 详细信息

通过特定的基因组合与转染可以将已分化的体细胞诱导重编程为多潜能干细胞(iPS),是近年来干细胞研究领域最令人瞩目的一项新的干细胞制造技术。与胚胎干细胞(ES)不同,iPS细胞的制造不需要毁损胚胎,因而不会涉及更多的伦理学问题。iPS的出现不仅为体细胞重编程去分化机制的研究注入了新的活力,而且为疾病发生发展相关机制研究与特异的细胞治疗,特别是再生医学带来新的曙光。目前,iPS的研究尚处于初级阶段,文章就iPS的研究现状与应用前景进行综述和展望。

关键词：体细胞重编程 iPS细胞

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成体干细胞在组织修复与再生中的治疗性应用:现状与展望

成体干细胞在组织修复与再生中的治疗性应用:现状与展望

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第六届全国烧伤救治专题研讨会

作者：付小兵解放军总医院基础医学研究所第一附属医院全军创伤修复重点实验室

尽管诱导性多能干细胞(iPS)的研究正在兴起,并认为有可能取代胚胎干细胞和成体干细胞而广泛应用于发育生物学以及组织修复与再生研究等多个领域,但成体干细胞作为一种多能干细胞,其对损伤细胞、组织以及器官的修复与替代作用已经逐步得... 详细信息

尽管诱导性多能干细胞(iPS)的研究正在兴起,并认为有可能取代胚胎干细胞和成体干细胞而广泛应用于发育生物学以及组织修复与再生研究等多个领域,但成体干细胞作为一种多能干细胞,其对损伤细胞、组织以及器官的修复与替代作用已经逐步得到证实,并有较多的研究。本文仅就近年来以骨髓间充质干细胞(MSCs)为代

关键词：成体干细胞治疗效果组织修复多能干细胞现状与展望

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蜕皮甾酮对人表皮干细胞体外增殖的影响

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新乡医学院学报 2009年第3期26卷 246-248,F0004页

作者：李国芳吴旭付小兵张翠萍周云峰吴昌昊南方医科大学附属南方医院胸心血管外科广东广州510515 解放军总医院第一附属医院全军烧伤研究所创伤修复重点实验室北京100037

目的观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞(hESCs)体外增殖的影响。方法采用中性蛋白酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(CK19)、角蛋白14(CK14)及角蛋白10(CK10)的表达以鉴定hESC... 详细信息

目的观察蜕皮甾酮(EDS)对人表皮干细胞(hESCs)体外增殖的影响。方法采用中性蛋白酶-Ⅳ型胶原黏附法分离正常人包皮表皮干细胞,免疫细胞化学法检测第3代细胞β1整合素、角蛋白19(CK19)、角蛋白14(CK14)及角蛋白10(CK10)的表达以鉴定hESCs。分别用含0 mg.L-1(对照组)、10 mg.L-1(10 mg.L-1组)、20 mg.L-1(20 mg.L-1组)、40 mg.L-1(40 mg.L-1组)、80 mg.L-1(80 mg.L-1组)及160 mg.L-1(160 mg.L-1组)EDS的Ep ilife培养基作用第3代hESCs 3 d,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测酶标仪490 nm下的吸光度值,评价EDS对hESCs体外增殖的影响。结果免疫细胞化学法检测提示第3代表皮干细胞β1整合素、CK 19、CK 14的表达阳性,CK 10表达阴性。EDS作用3 d后,10 mg.L-1组、20 mg.L-1组、40 mg.L-1组、80 mg.L-1组及160 mg.L-1组吸光度均高于对照组(P<0.05);40 mg.L-1组、80 mg.L-1组和160 mg.L-1组吸光度均高于10 mg.L-1组和20 mg.L-1组(P<0.05);80 mg.L-1组吸光度高于40 mg.L-1组和160 mg.L-1组(P<0.05);其余各组间两两比较无统计学差异(P>0.05)。结论体外培养条件下EDS能促进hESCs增殖,该作用在EDS浓度为80 mg.L-1时最为显著。

关键词：蜕皮甾酮表皮干细胞增殖体外

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去分化表皮干细胞的来源鉴定和分析

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感染．炎症．修复 2009年第4期10卷 205-207,F0002页

作者：张翠萍付小兵陈鹏包晓霞孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100048 军事医学科学院放射医学研究所电磁学和激光生物学实验室北京100850

目的:利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法:包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移... 详细信息

目的:利用染色体特异性分析方法鉴定去分化表皮干细胞的来源。方法:包皮皮片去除皮下脂肪后,中性蛋白酶消化过夜,分离表皮和真皮。分离的表皮片用Ⅳ型胶原反复粘贴并冲洗去除表皮干细胞。处理后的表皮片经免疫组化鉴定无表皮干细胞后移植到雌性BALB/c裸鼠背部全层皮肤缺损创面,5d后用免疫组化法检测皮片内角蛋白10(CK10)、CK19和β1整合素的表达,然后用Ⅳ型胶原粘贴法分离皮片内去分化来源的表皮干细胞,并采用PCR的方法检测去分化细胞内的Y染色体。结果:未经处理的表皮片基底部细胞呈CK10染色阴性,CK19和β1整合素染色阳性;Ⅳ型胶原处理后的表皮片内细胞全呈CK10染色阳性。而去基底皮片移植后5 d,在皮片的基底侧重新出现CK10染色阴性、CK19和β1整合素染色阳性的细胞。Ⅳ型胶原粘贴分离去分化来源的表皮干细胞,结果表明,移植皮片组在10min内约有4.56%的贴壁细胞出现,而未移植皮片组3h内无贴壁细胞出现。PCR分析结果显示在上述贴壁细胞内能检测到Y染色体的特异序列,而宿主来源的组织检测不到。结论:去分化表皮干细胞来源于移植皮片内成熟表皮细胞的去分化,而非宿主体内的干细胞。

关键词：表皮细胞去分化染色体

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低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果

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中华实验外科杂志 2008年第12期25卷 1587-1588页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室全军烧伤研究所北京100037

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行... 详细信息

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增，待扩增的细胞及上清量达300ml时进行病毒纯化及滴度测定。最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞，流式测定其感染效果。结果Ad／HIF-1质粒酶切鉴定正确；转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白（GFP）表达；获得的腺病毒滴度为1．8×10^11PFU／ml。病毒以MOI=50感染表皮细胞，2d后GFP阳性细胞的比例为97．46％。结论成功制备了HIF-1腺病毒载体，且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率，从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础。

关键词：低氧诱导因子-1 腺病毒表皮角质细胞

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胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 883-887页

作者：孙晓艳付小兵盛志勇张翠萍孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚... 详细信息

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响。结果:原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nes-tin、PCNA为阳性,而K10不表达。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异。此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α6+CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α6+CD71+、α6-CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68.34%及4.51%。RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱。结论:Ⅳ型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调。

关键词：表皮干细胞抗体单克隆胚胎组织提取液

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