检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2008年第21期30卷 1998-2002页

作者：蔡飒付小兵雷永红韩冰郭永峰孙同柱王君李海红解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7d取出移植皮片,采用... 详细信息

目的在体诱导表皮细胞去分化,探索与表皮细胞去分化有关的信号通路。方法包皮皮片去除皮下组织,用中性蛋白酶分离表皮,Ⅳ型胶原反复粘贴并牵拉表皮去除基底细胞层。处理后表皮片移植于裸鼠全层皮肤下,分别于3、5、7d取出移植皮片,采用免疫组织化学染色、流式细胞仪检测、Western blot和RT-PCR等方法检测皮片移植前后表型的改变和ERK MAPK通路各信号分子表达的变化情况。结果去基底细胞层处理的表皮片干细胞标志物CK19和β1整合素染色阴性;移植后5d,存活皮片CK19和β1整合素染色呈多层分布,而不是正常表皮中的单层分布。流式细胞仪检测结果显示,表皮片移植后CK19阳性细胞和β1整合素阳性细胞由移植前的0.00%分别增加到7.54%和5.24%,而CK10阳性细胞由99.62%下降为86.56%。Western blot和PCR检测也证实CK19和β1整合素蛋白水平和mRNA水平表达在移植后明显增强。ERK及上下游信号分子(p-Raf、p-MEK1/2、p-ERK1/2和c-myc)表达增强。t-MEK1/2和t-ERK1/2移植前后表达无显著差异(P>0.05)。结论处于终末分化阶段的表皮细胞可以向干细胞状态逆转,这个过程可能与ERK MAPK信号通路有关。

关键词：去分化异种移植表皮细胞表皮干细胞胞外信号调节激酶

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低氧诱导因子-1的病毒载体制备及感染效果

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中华实验外科杂志 2008年第12期25卷 1587-1588页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室全军烧伤研究所北京100037

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行... 详细信息

目的制备低氧诱导因子（HIF）-1腺病毒载体并评价其对表皮角质细胞的感染效果。方法Ad／HIF-1质粒经酶切鉴定后，以4μg质粒转染1．2×10^6个HEK293细胞，2d后荧光显微镜下观察转染效率。1周后收集细胞及上清并感染HEK293细胞进行病毒扩增，待扩增的细胞及上清量达300ml时进行病毒纯化及滴度测定。最后用制备的病毒载体感染表皮角质细胞，流式测定其感染效果。结果Ad／HIF-1质粒酶切鉴定正确；转染或感染HEK293细胞后有绿色荧光蛋白（GFP）表达；获得的腺病毒滴度为1．8×10^11PFU／ml。病毒以MOI=50感染表皮细胞，2d后GFP阳性细胞的比例为97．46％。结论成功制备了HIF-1腺病毒载体，且感染表皮角质细胞后能得到较高的感染效率，从而为腺病毒介导的基因功能研究提供理论基础。

关键词：低氧诱导因子-1 腺病毒表皮角质细胞

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控制性诱导细胞分化与组织修复和再生

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中华创伤杂志 2008年第6期24卷 405-406页

作者：付小兵解放军总医院基础医学所、第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100853

组织修复与再生实际上是一个受损组织的再发育过程，其中修复细胞的有序增殖和分化是基础，而有目的可控性的诱导细胞增殖与分化则是实现完美修复和再生的重要手段之一。近年来有关采用控制性诱导细胞分化技术实现组织和器官的修复与再... 详细信息

组织修复与再生实际上是一个受损组织的再发育过程，其中修复细胞的有序增殖和分化是基础，而有目的可控性的诱导细胞增殖与分化则是实现完美修复和再生的重要手段之一。近年来有关采用控制性诱导细胞分化技术实现组织和器官的修复与再生已有较多的报道，已经显示出它潜在的应用前景，值得人们关注和开展相关研究。

关键词：组织修复细胞分化控制性再生细胞增殖发育过程受损组织修复细胞

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胚胎组织提取液影响表皮干细胞表型变化的初步研究

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中国病理生理杂志 2008年第5期24卷 883-887页

作者：孙晓艳付小兵盛志勇张翠萍孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚... 详细信息

目的:模拟表皮干细胞周围生态微环境,研究表皮干细胞在此环境中的表型变化,表皮干细胞微环境在表皮干细胞"命运"决定过程中的作用。方法:分离、培养表皮干细胞,观察其形态,并进行免疫组织化学鉴定及免疫荧光检测。制备小鼠胚胎组织匀浆液,荧光活细胞示踪法和逆转录聚合酶链式反应检测胚胎组织提取液对表皮干细胞表型变化的影响。结果:原代分离培养的表皮基底层干细胞表达α6、β1整合素、K19、K14、p63、Nes-tin、PCNA为阳性,而K10不表达。激光共聚焦检测显示α6整合素和CD71在表皮干细胞中的分布存在着区域性差异。此外,流式细胞检测显示胚胎组织提取液作用后α6+CD71-表达细胞由细胞总数的22.49%减少至10.92%,而α6+CD71+、α6-CD71+表达细胞则分别由诱导前的62.29%及0.19%增加至诱导后的68.34%及4.51%。RT-PCR结果表明胚胎组织提取液作用后,表皮干细胞中β1整合素、K19、K10表达增强,而K14表达减弱。结论:Ⅳ型胶原黏附法分离的表皮干细胞具有干细胞的特点。α6整合素、CD71在表皮干细胞中分布的区域差异及CD71表达位点的空间变化可以作为区分表皮干细胞及其子代细胞标志之一。胚胎组织提取液对表皮干细胞的增殖分化具有促进作用。胚胎组织提取液中的某些因子可能抑制了K14表达的TA细胞的终末分化,甚至诱导其发生逆向分化,导致诱导后K14的总体表达水平下调。

关键词：表皮干细胞抗体单克隆胚胎组织提取液

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碱性成纤维细胞生长因子诱导表皮细胞去分化的初步研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 2003-2007页

作者：孙晓艳付小兵伊海英刘惠玲孙同柱解放军总医院基础医学研究所北京100853 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6... 详细信息

目的初步探索表皮细胞体外去分化模型的建立方法。方法HEKa细胞体外培养6～7代时开始出现老化迹象,细胞体积膨大,形态发生明显改变。加入浓度为100ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth fac-tor,bFGF)诱导液分别培养6、12、24、48、72h后,MTT法检测bFGF对表皮细胞体外生长的促进作用。同时采用免疫细胞化学染色法、流式细胞检测技术、RT-PCR法检测bFGF诱导培养后,表皮细胞的表型及功能的改变。结果MTT检测结果显示浓度为100ng/ml,诱导时间为36～48h为诱导表皮细胞去分化的最佳实验条件。在bFGF的作用之下,老化的HEKa细胞周围开始出现新生的表皮干细胞样克隆。免疫细胞化学检测结果表明,实验组细胞中β1整合素、CK19、CK14的表达增强,而CK10作为终末分化细胞的标志,在bFGF诱导组中的表达明显降低。流式细胞检测分析显示bFGF作用后,实验组CK19表达阳性的细胞与对照组相比明显增多(分别为74.77%和15.74%);CK14表达阳性的细胞也由原来的67.26%增加至被检测细胞总数的87.14%。而bFGF诱导作用后,被检测细胞中表达CK10阳性的细胞数量较对照组明显下降(分别为4.56%和98.56%)。此外,RT-PCR检测结果同样再次支持了表皮细胞去分化的理论。在bFGF诱导组中,β1整合素、CK19、CK14mRNA转录水平明显上调,而CK10mRNA表达则明显下降。结论bFGF能够在体外诱导表皮细胞逆转分化形成幼稚型表皮前体干细胞,但其涉及具体机制需要进一步研究。

关键词：表皮细胞去分化干细胞免疫细胞化学流式细胞检测 MTT RT—PCR

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脂肪干细胞促进人表皮角质形成细胞创面模型愈合的研究

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中华外科杂志 2008年第20期46卷 1575-1578页

作者：袁方雷永红付小兵盛志勇蔡飒孙同柱北京大学医学部心血管研究所 100038 解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养... 详细信息

目的探讨脂肪干细胞（ADSCs）促进人表皮角质形成细胞（HEKa）创面模型愈合的可能性。方法体外培养大鼠ADSCs（rADSCs）（n=10）。实验组为rADSCs与HEKa直接共培养组（n=10），对照组为在transwell培养板建立的rADSCs与HEKa间接共培养（间接组，n=8）和单纯HEKa培养组（单纯组，n=8）。刮擦生长融合成片的HEKa细胞制备创面。培养24、48、72h后，计数迁移到创面的HEKa细胞数量并计算创面愈合率，检测HEKa细胞吸收脱氧胸腺嘧啶核苷的放射活性以判定HEKa细胞的增殖活性。结果实验组、间接组、单纯组在伤后24h分别有（9．2±0．2）、（5．0±0．3）、（4．2±0．3）个细胞／高倍视野；48h分别有（58．5±0．4）、（26．5±0．3）、（20．7±0．5）个细胞／高倍视野；72h分别有（125．8±0．4）、（43．0±0．5）、（35．6±0．5）个细胞／高倍视野越过创缘进入创面，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。三组创面愈合率在伤后72h分别为61．0％±3．0％、35．0％±2．5％、32．0％±2．1％，实验组均明显优于两对照组（P〈0．05）。脱氧胸腺嘧啶核苷掺入培养基法表明三组HEKa细胞的放射性强度为（1440±210）、（1050±280）、（1130±390）cpm／10^5细胞，实验组与两对照组之间差异有统计学意义（P〈0．05）。结论rADSCs通过直接接触促进HEKa细胞的分裂增殖和迁移。

关键词：脂肪干细胞细胞培养创面愈合

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干细胞与烧伤创面修复

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中华烧伤杂志 2008年第5期24卷 365-366页

作者：付小兵盛志勇解放军总医院基础医学所第一附属医院全军刨伤修复重点实验室北京100853

干细胞治疗作为生物治疗的重要方法之一，近10余年来在烧伤领域的应用已显示出诱人的前景。国内将干细胞治疗作为进一步提高烧伤创面修复质量的重要方法，已经在加快创面愈合速度和减少瘢痕发生率、促进汗腺与毛囊再生及组织工程皮肤构... 详细信息

干细胞治疗作为生物治疗的重要方法之一，近10余年来在烧伤领域的应用已显示出诱人的前景。国内将干细胞治疗作为进一步提高烧伤创面修复质量的重要方法，已经在加快创面愈合速度和减少瘢痕发生率、促进汗腺与毛囊再生及组织工程皮肤构建等领域取得了重要进展。

关键词：烧伤干细胞创面修复

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碱性成纤维细胞生长因子的研究进展

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解放军医学杂志 2008年第6期33卷 776-778页

作者：伊海英孙晓艳付小兵任明姬张广田解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037 内蒙古医学院组织胚胎学教研室

碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)是成纤维细胞生长因子蛋白(fibroblast growth factors,FGFs)家族中的一员。目前已发现至少22种FGF,其中N3F-1(aFGF)、FGF-2(bFGF)及FGF-7的研究较为深入。bFGF是哺乳动物和人体中一种非常微量的活性物质,因其具有广泛的生理功能和重要的临床应用价值而被国内外学者高度重视。bFGF不仅能刺激新生血管形成,参与创伤愈合和组织再生,促进胚胎组织发育和分化等,此外还与肿瘤的发生发展密切相关。近年来,重组bFGF已被应用于临床治疗创伤、溃疡及神经系统等疾病。[第一段]

关键词：成纤维细胞生长因子2 受体成纤维细胞生长因子

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进一步强调医学科学研究中基础与临床的密切结合

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感染．炎症．修复 2008年第1期9卷 3-4页

作者：付小兵解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

科学研究的目的总的来讲是发现自然现象、阐明科学规律以及通过理论向应用的转化促进社会生产力的发展。医学科学作为自然科学的一个部分,既服从于自然科学研究的一般规律,也有其独特的地方,其特殊性在于它的研究对象和最终的应用目标... 详细信息

科学研究的目的总的来讲是发现自然现象、阐明科学规律以及通过理论向应用的转化促进社会生产力的发展。医学科学作为自然科学的一个部分,既服从于自然科学研究的一般规律,也有其独特的地方,其特殊性在于它的研究对象和最终的应用目标是人体。因此,强调医学研究中基础与临床的密切结合,在于从源头抓起,通过创新的研究,最终解决临床的难题和服务于病人。

关键词：科学研究医学科学临床社会生产力自然现象自然科学医学研究

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高钙培养对表皮角质细胞形态和生长特点及角蛋白表达的影响

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感染．炎症．修复 2008年第2期9卷 87-89,F0002页

作者：张翠萍付小兵李淑云孙同柱解放军总医院第一附属医院全军创伤修复重点实验室北京100037

目的：观察高钙培养后表皮角质细胞的形态、生长特点及角蛋白表达的变化，进一步探讨钙在促进表皮角质细胞分化过程中的重要作用。方法：表皮角质细胞分别在低钙（0.05mmol/L）和高钙（1.2mmol/L）环境条件下培养1-2d，光镜下观察细胞... 详细信息

目的：观察高钙培养后表皮角质细胞的形态、生长特点及角蛋白表达的变化，进一步探讨钙在促进表皮角质细胞分化过程中的重要作用。方法：表皮角质细胞分别在低钙（0.05mmol/L）和高钙（1.2mmol/L）环境条件下培养1-2d，光镜下观察细胞的形态和生长特点，并采用免疫组织化学方法检测表皮角质细胞中角蛋白10（K10）、K14和K19的表达水平。结果：低钙培养的表皮角质细胞散在生长，分布均匀，细胞间隙较大，胞膜圆滑，边界清楚。高钙培养后，细胞胞体变得扁平，细胞间隙消失，并且细胞出现明显的成簇生长趋势。在正常培养即低钙培养条件下，K10和K19阳性细胞比例较少，所培养的细胞几乎全为K14阳性细胞；在高钙培养条件下，K10和K19阳性细胞比例明显增加，而K14的表达没有明显变化。结论：高钙培养能改变表皮角质细胞的形态和生长特点并提高细胞内角蛋白的表达水平，从而促进表皮角质细胞的分化成熟。

关键词：表皮角质细胞钙分化

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