检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 381-383页

作者：韩萍刘妍纪冬李莉陈国凤朱传琳北京解放军第三○二医院感染七科 100039 解放军第三○二医院传染病研究所

目的分析慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞差异表达基因,探索慢性乙型肝炎形成的分子机制。方法应用含14000条人体cDNA的微阵列芯片和来自外周血单个核细胞的标记cDNA,分析了10例慢性乙型肝炎患者和10例健康人基因表达谱。通过应用Gene... 详细信息

目的分析慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞差异表达基因,探索慢性乙型肝炎形成的分子机制。方法应用含14000条人体cDNA的微阵列芯片和来自外周血单个核细胞的标记cDNA,分析了10例慢性乙型肝炎患者和10例健康人基因表达谱。通过应用GenePix4000B扫描仪和ImaGene3.0分析软件比较Cy5标记的慢性乙型肝炎来源cDNA与Cy3标记的健康人来源cDNA的杂交结果,获得个体基因的相对表达比值。结果在分析的14000条基因中,差异表达的基因有92条,占0.66%。其中51条基因表达水平显著上调,41条基因表达水平显著下调。这些差异表达的基因主要为细胞信号转导,细胞周期和代谢,凋亡及炎症相关类基因。结论在乙型肝炎病毒致慢性乙型肝炎过程中,涉及到了众多基因的差异表达,为进一步阐明慢性乙型肝炎形成的分子机制提供基础。

关键词：基因表达外周血单个核细胞肝炎病毒乙型

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A反式激活基因的克隆化研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第3期20卷 270-272页

作者：刘妍白桂芹成军杨倩张黎颖纪冬王建军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）... 详细信息

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，进行SSH分析。将富集的二次PCR产物与TIA载体连接，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑取克隆，聚合酶链反应（PCR）扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到36个阳性克隆，经菌落PCR分析显示200～1000bp插入片段。对其中的25个片段测序，并进行同源性分析，显示18种已知基因编码蛋白和2种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS4A反式激活靶基因。结论成功构建了HCV NS4A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，为进一步阐明HCV NS4A反式调节的靶基因等提供了相关的平台。

关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类反式激活(遗传学) 抑制,遗传杂交

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人肝再生增强因子抑制层黏连蛋白B1链基因转录活性的研究

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中华肝脏病杂志 2006年第1期14卷 70-71页

作者：邵凤娟成军马英骥杨倩纪冬王琳哈尔滨医科大学第一医院传染科 150001 北京地坛医院传染病研究所解放军第三○二医院传染病研究所

肝再生增强因子（ALR）不仅有促进肝细胞再生和抗肝损伤作用，还有一定的抗肝纤维化作用。本研究利用生物信息学技术，对层黏连蛋白B1链（LAMB）基因上游调控序列进行分析克隆，采用基因重组技术构建pCAT3-LAMBp报告基因载体，与pcDNA3.... 详细信息

肝再生增强因子（ALR）不仅有促进肝细胞再生和抗肝损伤作用，还有一定的抗肝纤维化作用。本研究利用生物信息学技术，对层黏连蛋白B1链（LAMB）基因上游调控序列进行分析克隆，采用基因重组技术构建pCAT3-LAMBp报告基因载体，与pcDNA3.1（-）-ALR表达载体共转染COS7细胞，证明ALR的转基因表达对LAMB启动子具有下调作用，使下游CAT基因的表达减弱。本研究为阐明ALR的生物学作用和抗肝纤维化用用提供新的实验及理论基础。

关键词：肝纤维化层黏连蛋白人肝再生增强因子

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乙肝病毒e抗原反式激活蛋白的亚细胞定位研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 393-395页

作者：王建军赵平靳雪源成军卿松赵志海丁宁解放军第三○二医院北京100039 北京市地坛医院传染病研究所

目的验证HBeAgTP基因在细胞内的表达及表达蛋白的亚细胞定位。方法构建HBeAgTP基因的酵母表达诱饵质粒pGBKT7-HBeAgTP及绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBeAgTP,pEGFP-C1-HBeAgTP转染HepG2细胞,24h后荧光显微镜下观察蛋白表达的亚细胞定... 详细信息

目的验证HBeAgTP基因在细胞内的表达及表达蛋白的亚细胞定位。方法构建HBeAgTP基因的酵母表达诱饵质粒pGBKT7-HBeAgTP及绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBeAgTP,pEGFP-C1-HBeAgTP转染HepG2细胞,24h后荧光显微镜下观察蛋白表达的亚细胞定位。pGBKT7-HBeAgTP转化AH109酵母细胞,提取转化了质粒的酵母蛋白质,进行Western免疫印迹分析。结果成功构建出HBeAgTP基因。HBeAgTP基因的酵母表达诱饵质粒pGBKT7-HBeAgTP及绿色荧光蛋白表达质粒pEGFP-C1-HBeAgTP,Western免疫印迹法印证HBeAgTP可表达蛋白,其表达的蛋白亚细胞定位于细胞质。结论HBeAgTP基因可表达蛋白,其表达蛋白亚细胞定位于细胞质。

关键词：肝炎e抗原乙型免疫印迹法

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构建永生化人肝细胞系人端粒酶反转录酶真核表达质粒

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中国临床康复 2006年第45期10卷 47-50,I0005页

作者：赵擎孙颖胡燕侯俊游绍莉赵军辛绍杰貌盼勇解放军总医院军医进修学院北京市100853 解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室北京市100039 解放军第三○二医院感染三科北京市100039

目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②... 详细信息

目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②利用基因重组技术构建真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT,筛选阳性克隆进行双酶切、聚合酶链反应和序列测定。③转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①聚合酶链反应扩增目的基因:电泳显示人端粒酶反转录酶基因的聚合酶链反应产物在3.5kb处有特异性目的条带,绿色荧光蛋白基因的聚合酶链反应产物在750bp处显示特异性目的条带。②质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建和鉴定结果:双酶切、聚合酶链反应鉴定和测序结果与预期完全相符。③转染HepG2细胞结果:荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白主要分布在细胞核内。结论:①初步验证所构建的真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的正确性。两种质粒可使转染细胞同时表达人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白,通过观察绿色荧光蛋白的表达对转染效率和结果进行及时、快捷的观察。②重组真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建成功,为人端粒酶反转录酶转染细胞提供简洁、快速、实时的检测方法,并为建立永生化人肝细胞系奠定基础。

关键词：端粒,末端转移酶发光蛋白质类质粒

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乙型肝炎病毒X蛋白转录抑制抑癌基因p53表达的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 26-29页

作者：李进刘妍戴久增徐东平张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3·1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBVX蛋白对p53基因表达的调节。结果成功构建报告载体pCAT3-p53p,克隆的p53启动子有顺式激活下游基因的活性;pCAT3-p53p与pcDNA3·1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降,说明HBV X蛋白抑制p53基因启动子的转录。RT-PCR结果表明,转染了pcDNA3·1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。结论HBVX蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达,本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果,而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。

关键词：肝炎,病毒性,人肝炎,乙型蛋白p53 反式抑制

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严重急性呼吸综合征患者相关病毒的随访监测及意义

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第2期20卷 66-68页

作者：孙颖辛绍杰沈宏辉胡燕徐东平朱虹朱雷端青貌盼勇解放军军医进修学院北京100853 解放军第三二医院传染病研究所病毒研究室军事医学科学院微生物流行病研究所

目的随访监测确诊SARS患者,研究SARS-CoV、新型呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒在患者体内的存在状况及与SARS的可能相关性。方法采集8例SARS患者痊愈2年后的咽拭子、唾液(或痰液)、尿液、血清及连续3天的粪便标本,用RT-PCR的方法分别扩增SARS... 详细信息

目的随访监测确诊SARS患者,研究SARS-CoV、新型呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒在患者体内的存在状况及与SARS的可能相关性。方法采集8例SARS患者痊愈2年后的咽拭子、唾液(或痰液)、尿液、血清及连续3天的粪便标本,用RT-PCR的方法分别扩增SARS-CoV、呼肠病毒和脊髓灰质炎病毒;采用ELISA的方法检测患者血清中的SARS-CoV抗体和脊髓灰质炎病毒IgG抗体。结果8例患者中有4例的粪便中脊髓灰质炎病毒RNA阳性,均为Sabin1毒株,在5′端非编码区的第480nt及VP1蛋白编码区的第2795nt两个重要的减毒位点上均发生了回复突变;SARS-CoV和新型呼肠病毒均阴性。对照组标本中均未检测到上述三种病毒。3例随访患者血清中SARS-CoV抗体阳性;4例患者血清中脊髓灰质炎IgG抗体阳性。25例健康体检者的血清中SARS-CoV抗体均阴性,其中23例的血清中脊髓灰质炎病毒抗体阳性。结论SARS患者痊愈2年后的血清中特异性脊髓灰质炎病毒抗体与健康人有显著差异,其粪便标本中仍有较高的脊髓灰质炎病毒阳性率,而且病毒核酸在两个重要的减毒位点上均发生了回复突变。

关键词：严重急性呼吸综合征脊髓灰质炎病毒基因

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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 343-345页

作者：钟彦伟成军郭风劲曲建慧纪冬程勇前李晓东郭江戴久增王琳徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Tr... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析。结果应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白。初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用。结论应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白。

关键词：酵母菌杂交干扰素β 结合蛋白

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SARS患者咽拭标本中新分离呼肠病毒部分基因组序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 373-375页

作者：沈宏辉孙颖周育森朱虹胡燕何君徐东平辛绍杰端青貌盼勇北京解放军第三○二医院传染病研究所 100039 军事医学科学院微生物流行病研究所

目的研究SARS患者中多病原感染状况，测定并分析新分离呼肠病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法 SARS患者咽拭子标本经处理后接种Hep-2细胞，提取分离到的病毒RNA，以随机引物逆转录PCR扩增，PCR产物经克隆... 详细信息

目的研究SARS患者中多病原感染状况，测定并分析新分离呼肠病毒基因组序列，从病毒的分子生物学角度研究其分类学位置。方法 SARS患者咽拭子标本经处理后接种Hep-2细胞，提取分离到的病毒RNA，以随机引物逆转录PCR扩增，PCR产物经克隆、测序，将其核苷酸序列及推断的氨基酸序列与GenBank（数据库中基因进行比较分析并建立系统进化树。结果从4份SARS患者咽拭子标本中分离到3株呼肠病毒，部分基因片段测序结果显示为同一病毒，其病毒基因与呼肠病毒1、2、3型有较高的同源性，尤其是与呼肠病毒1、3型，相应片段的核苷酸序列同源性达82％～92％，推断相应氨基酸序列同源性高达94％～99％，而与其他病毒不存在有意义的同源性；系统进化树分析显示新分离呼肠病毒属于呼肠病毒科呼肠病毒属，且可能为哺乳动物呼肠病毒中的新血清型。结论 SARS患者咽拭子标本中存在呼肠病毒，新分离呼肠病毒核苷酸和氨基酸序列与呼肠病毒1、3型同源性最高，由于尚未得到决定病毒血清型的S1片段基因序列，故该病毒的确切分型有待进一步确定，与SARS患者病情的关系有待进一步研究。

关键词：呼肠病毒科严重急性呼吸综合征基因组

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新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究

新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：刘妍徐东平戴久增李进成军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心解放军第三○二医院医务部北京地坛医院传染病研究所

目的:乙型肝炎病毒(HBV)的X基因编码产物(HBxAg)是一种具有反式激活作用的病毒蛋白,能够影响细胞信号转导途径,激活多种病毒及细胞基因启动子,调控细胞基因的转录,在HBV感染与肝细胞癌发生发展过程中发挥十分重要的作用。本课题组在应... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(HBV)的X基因编码产物(HBxAg)是一种具有反式激活作用的病毒蛋白,能够影响细胞信号转导途径,激活多种病毒及细胞基因启动子,调控细胞基因的转录,在HBV感染与肝细胞癌发生发展过程中发挥十分重要的作用。本课题组在应用基因芯片技术筛选。HBxAg反式激活作用的部分靶基因时,结合生物信息学技术(bioinformatics)克隆了HBxAg反式激活的新靶基因——HBxAg反式激活基因11(XTP11), 该新基因的开放读码框架长度为1344个核苷酸,编码产物由447个氨基酸残基组成。为进一步探索XTP11的生物学功能,本研究拟构建新基因XTP11的酵母表达载体,探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合

关键词：新基因酵母细胞 XTP11 功能研究

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