检索结果-内蒙古大学图书馆

中华肝脏病杂志 2008年第9期16卷 714-716页

作者：张玲霞高志良扈晓宇范振平曲建慧罗生强解放军第三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 中山大学附属第三医院感染科成都中医药大学附属医院

肝脏炎症坏死及其所致的肝纤维化是疾病进展的主要病理学基础，因此，如能找出病因，在对因治疗的基础上有效控制肝组织炎症，有可能减少肝细胞破坏和延缓肝纤维化的发展。如慢性乙型肝炎在免疫清除期，应用干扰索仅及核苷类似物就能有... 详细信息

肝脏炎症坏死及其所致的肝纤维化是疾病进展的主要病理学基础，因此，如能找出病因，在对因治疗的基础上有效控制肝组织炎症，有可能减少肝细胞破坏和延缓肝纤维化的发展。如慢性乙型肝炎在免疫清除期，应用干扰索仅及核苷类似物就能有效抑制病毒，从病原学控制的角度阻止病毒性肝炎肝组织炎症的发生。而抗炎保肝治疗只是其综合治疗的一部分，须在病原学或特异性治疗的基础上适当选用抗炎保肝药物。

关键词：肝病药物疗法抗炎保肝

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拉米夫定耐药患者乙型肝炎病毒多聚酶区基因突变的检测分析

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肝脏 2008年第2期13卷 104-107页

作者：许彪成军徐东平李晓东毛远丽王海滨马洪滨胡瑾华王业东解放军第三○二医院全军传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 解放军第三○二医院全军传染病研究所肝衰竭治疗研究中心北京100039 北京地坛医院解放军第三○二医院全军传染病研究所临床检验中心北京100039 解放军第三○二医院院办北京100039

目的建立以基因测序检测乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区基因突变的方法,并分析拉米夫定耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况。方法采用巢式PCR方法对174例拉米夫定耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序,将YMDD... 详细信息

目的建立以基因测序检测乙型肝炎病毒(HBV)多聚酶区基因突变的方法,并分析拉米夫定耐药者HBV多聚酶区基因主要耐药突变的分布情况。方法采用巢式PCR方法对174例拉米夫定耐药患者血清HBV多聚酶区进行扩增,对PCR产物进行直接测序,将YMDD突变阳性与阴性的病例分别进行HBV耐药基因突变的分析和比较。结果本研究154例YMDD突变阳性的患者中有10种突变类型,其中以rt M204I突变最多见,为46例(29.9%),其次为rt L180M/M204V(26.6%)、rt L180M/M204I(17.5%)、rt V173/L180M/M204V(13.0%)、rt M204V(2.6%)、rt L180M/M204V/M204I(5.8%)、rt V173L/L180M/M204V/M204I(1.3%)、rt V173L/M204I rt M204I/M204V(1.3%)、rt M204I/M204V(1.3%)。另外,rt M204V联合rt L180M或rt V173L的突变率较rt M204I联合rt L180M或rt V173L显著增高。从rt L180M突变角度来看,rt L180M与rt M204V的联合突变率最高,其次为rt L180M联合rt M204I突变,rt L180M与rt L173M的联合突变率最低。从rt V173L突变角度来看,rt V173L联合rt M204V或rt L180M突变的发生率均高于rt V173L联合rt M204I的突变率,且rt V173L突变多联合rt M204V和rt L180M突变同时发生。结论拉米夫定耐药株的氨基酸突变复杂多样,需要对拉米夫定耐药多个相关位点进行检测。

关键词：肝炎病毒,乙型变异拉米夫定 YMDD

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基因表达谱芯片技术筛选乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因12

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临床荟萃 2007年第23期22卷 1694-1697页

作者：宫嫚成军刘妍李筠解放军三0二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京市地坛医院传染病研究所北京100011

目的应用基因表达谱芯片技术研究乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因12(XTP12)的反式调节基因。方法以分子生物学技术构建XTP12的真核表达载体[pcDNA 3.1(-)]-XTP12,以表达质粒pcDNA 3.1(-)-XTP12转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞,以空载... 详细信息

目的应用基因表达谱芯片技术研究乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因12(XTP12)的反式调节基因。方法以分子生物学技术构建XTP12的真核表达载体[pcDNA 3.1(-)]-XTP12,以表达质粒pcDNA 3.1(-)-XTP12转染人肝母细胞瘤细胞系(HepG2)细胞,以空载体pcDNA 3.1(-)为平行对照,制备转1染后的细胞裂解液,提取mRNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达mRNA进行检测和分析。结果HepG2细胞经转染XTP12后,有21条基因表达增强,14条基因表达降低。这些基因包括免疫调节、细胞凋亡、信号转导等基因。结论XTP12基因的表达对于肝细胞基因表达谱有显著影响。DNA芯片技术是分析反式激活靶基因的有效技术途径。

关键词：肝炎病毒乙型基因表达谱 X蛋白反式激活基因芯片

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病毒感染相关microRNA的研究进展

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胃肠病学和肝病学杂志 2007年第1期16卷 90-94页

作者：刘妍徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

MicroRNA(miRNA)是继小干涉RNA(siRNA)后新发现的一类调节基因表达的小分子单链非编码RNA,虽然长度只有－22个核苷酸(nt)大小,却能够广泛参与细胞分化、增殖、凋亡、代谢以及肿瘤发生等多种生物学过程,在转录后水平调控基因表达,逐渐成... 详细信息

MicroRNA(miRNA)是继小干涉RNA(siRNA)后新发现的一类调节基因表达的小分子单链非编码RNA,虽然长度只有－22个核苷酸(nt)大小,却能够广泛参与细胞分化、增殖、凋亡、代谢以及肿瘤发生等多种生物学过程,在转录后水平调控基因表达,逐渐成为当今分子生物学领域的研究热点。结合生物信息学分析和直接基因克隆的方法已经鉴定出4039种miRNA,包括462种人miRNA(release8.2,http://***),这些miRNA约占人类基因组的1%,调控着大约人类30%－50%基因的表达,一旦miRNA自身表达的调节出现异常,就可能导致人类疾病的发生。此外,最近的研究还发现一些引起人类或哺乳动物疾病的病毒基因组也编码miRNA。[第一段]

关键词： microRNA 非编码RNA 病毒感染基因调控

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HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用位点的确定

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中华实验和临床感染病杂志（电子版） 2007年第2期1卷 68-71页

作者：程勇前王琳成军刘妍徐东平钟彦伟李晓东戴久增解放军第三二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal... 详细信息

目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal的酵母四缺培养基上培养观察。结果转化了CAML不同剪接体及CAML缺失突变体pGADT7/CAML-1-211,pGADT7/CAML-1-57的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上均有菌落生长,并且菌落呈现蓝色。转化了CAML缺失突变体pGADT7/CAML-58-211,pGADT7/CAML-234-296的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上未见菌落生长。结论HCVNS4A与CAML的相互结合位点位于CAML的N-末端1～57位氨基酸残基,CAML不同剪接体与HCVNS4A均可以相互结合。

关键词：丙型肝炎病毒钙离子信号调节亲环素配体结合位点

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丙型肝炎病毒核心蛋白6号结合蛋白基因启动子序列的确定及转录活性鉴定

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中华肝脏病杂志 2006年第2期14卷 81-85页

作者：王琳成军李克洪源解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白6号结合蛋白基因(Hcbp6)序列表达的调控机制。方法根据软件对启动子的预测,选取翻译起始密码子ATG上游3256bp及下游180bp的DNA序列, 分成5段活性区域,分别以聚合酶链反应技术(PCR),肝母细胞瘤细胞系He... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白6号结合蛋白基因(Hcbp6)序列表达的调控机制。方法根据软件对启动子的预测,选取翻译起始密码子ATG上游3256bp及下游180bp的DNA序列, 分成5段活性区域,分别以聚合酶链反应技术(PCR),肝母细胞瘤细胞系HepG2基因组DNA为模板,扩增该启动子DNA片段,将其克隆至pCAT3中,构建pCAT3-Hcbp6-p报告基因表达载体,将该质粒分别转染HepG2、NIH3T3细胞,用酶联免疫吸附法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果发现质粒pCAT3-Hcbp6-1066p和pCAT3-Hcbp6-240p能够指导CAT的表达,其平均吸光度值(A)是pCAT3-basic对照质粒的3.1倍和6.4倍。结论本研究克隆的启动子DNA序列具有转录活性, 这一结果为研究Hcbp6的调节机制,进一步阐明HCV核心蛋白的作用机制奠定了基础。

关键词：肝炎病毒丙型启动子 Hcbp6

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A反式激活基因的克隆化研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第3期20卷 270-272页

作者：刘妍白桂芹成军杨倩张黎颖纪冬王建军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）... 详细信息

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，进行SSH分析。将富集的二次PCR产物与TIA载体连接，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑取克隆，聚合酶链反应（PCR）扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到36个阳性克隆，经菌落PCR分析显示200～1000bp插入片段。对其中的25个片段测序，并进行同源性分析，显示18种已知基因编码蛋白和2种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS4A反式激活靶基因。结论成功构建了HCV NS4A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，为进一步阐明HCV NS4A反式调节的靶基因等提供了相关的平台。

关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类反式激活(遗传学) 抑制,遗传杂交

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抑制性消减杂交技术筛选重组IFNβ下调HepG2细胞靶基因

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第3期20卷 273-275页

作者：钟彦伟成军曲建慧张黎颖郭江李晓东徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的利用抑制性消减杂交（SSH）技术构建重组干扰素β（IFNβ）刺激人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库，筛选IFNβ下凋HepG2相关基因。方法重组IFNβ2000U／ml刺激对数生长期HepG2细胞，以生理盐水作用的HepG2细胞为阴性对... 详细信息

目的利用抑制性消减杂交（SSH）技术构建重组干扰素β（IFNβ）刺激人肝癌细胞系HepG2差异表达基因的cDNA消减文库，筛选IFNβ下凋HepG2相关基因。方法重组IFNβ2000U／ml刺激对数生长期HepG2细胞，以生理盐水作用的HepG2细胞为阴性对照；制备细胞裂解液，从中提取mRNA并逆转录为cDNA，经Rsa Ⅰ酶切后将实验组cDNA分成两份，分别与两种不同的接头连接，再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制性PCR，将产物与T／A载体连接，构建cDNA消减文库，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑选克隆PCR后进行测序及同源性分析。结果成功构建重组IFNβ刺激HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后，得到58个阳性克隆，进行菌落PCR分析，均得到200～1000bp插入片段。随机挑选其中35个插入片段测序，并通过生物信息学分析，结果共获得12种编码基因。结论应用SSH技术成功构建了IFNβ刺激HepG2细胞差异表达基因的cDNA消减文库，为进一步了解IFNβ在肝细胞内的免疫调节机制提供了依据。

关键词：干扰素β 杂交减量调节

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乙型肝炎病毒X蛋白转录抑制抑癌基因p53表达的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 26-29页

作者：李进刘妍戴久增徐东平张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3·1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBVX蛋白对p53基因表达的调节。结果成功构建报告载体pCAT3-p53p,克隆的p53启动子有顺式激活下游基因的活性;pCAT3-p53p与pcDNA3·1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降,说明HBV X蛋白抑制p53基因启动子的转录。RT-PCR结果表明,转染了pcDNA3·1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。结论HBVX蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达,本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果,而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。

关键词：肝炎,病毒性,人肝炎,乙型蛋白p53 反式抑制

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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 343-345页

作者：钟彦伟成军郭风劲曲建慧纪冬程勇前李晓东郭江戴久增王琳徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Tr... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析。结果应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白。初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用。结论应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白。

关键词：酵母菌杂交干扰素β 结合蛋白

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