检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 26-29页

作者：李进刘妍戴久增徐东平张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3·1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBVX蛋白对p53基因表达的调节。结果成功构建报告载体pCAT3-p53p,克隆的p53启动子有顺式激活下游基因的活性;pCAT3-p53p与pcDNA3·1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降,说明HBV X蛋白抑制p53基因启动子的转录。RT-PCR结果表明,转染了pcDNA3·1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。结论HBVX蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达,本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果,而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。

关键词：肝炎,病毒性,人肝炎,乙型蛋白p53 反式抑制

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构建永生化人肝细胞系人端粒酶反转录酶真核表达质粒

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中国临床康复 2006年第45期10卷 47-50,I0005页

作者：赵擎孙颖胡燕侯俊游绍莉赵军辛绍杰貌盼勇解放军总医院军医进修学院北京市100853 解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室北京市100039 解放军第三○二医院感染三科北京市100039

目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②... 详细信息

目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②利用基因重组技术构建真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT,筛选阳性克隆进行双酶切、聚合酶链反应和序列测定。③转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①聚合酶链反应扩增目的基因:电泳显示人端粒酶反转录酶基因的聚合酶链反应产物在3.5kb处有特异性目的条带,绿色荧光蛋白基因的聚合酶链反应产物在750bp处显示特异性目的条带。②质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建和鉴定结果:双酶切、聚合酶链反应鉴定和测序结果与预期完全相符。③转染HepG2细胞结果:荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白主要分布在细胞核内。结论:①初步验证所构建的真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的正确性。两种质粒可使转染细胞同时表达人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白,通过观察绿色荧光蛋白的表达对转染效率和结果进行及时、快捷的观察。②重组真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建成功,为人端粒酶反转录酶转染细胞提供简洁、快速、实时的检测方法,并为建立永生化人肝细胞系奠定基础。

关键词：端粒,末端转移酶发光蛋白质类质粒

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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 343-345页

作者：钟彦伟成军郭风劲曲建慧纪冬程勇前李晓东郭江戴久增王琳徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Tr... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析。结果应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白。初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用。结论应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白。

关键词：酵母菌杂交干扰素β 结合蛋白

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乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白结合蛋白的筛选

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世界华人消化杂志 2006年第24期14卷 2382-2385页

作者：田江克成军刘妍崔玉芳纪冬王琳程勇前钟彦伟徐东平解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所免疫学研究室北京市100850 北京地坛医院传染病研究所北京市100011 解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心北京市100039

目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞与乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白(MHBst)结合蛋白．方法:PCR扩增MHBst基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达．后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进... 详细信息

目的:用酵母双杂交技术筛选白细胞与乙型肝炎病毒截短型表面抗原中蛋白(MHBst)结合蛋白．方法:PCR扩增MHBst基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达．后与转化了人白细胞文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD／-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落增菌后提出质粒转化入大肠杆菌(DH5α),并经氨苄青霉素抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定,序列测定后进行生物信息学分析．结果:应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆8个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到7种已知基因,分别为ADP核糖基因子2种,RAB6相互作用蛋白(RAB6IP1)1种,CCR4-NOT转录复合体亚基10(CCR4- NOT-10)1种,脂多糖蛋白结合蛋白(LBP)1种,醛缩酶B(ALDOB)1种,补体成分3(C3)1种,丙酮酸脱氢酶(PDH)1种．结论:成功克隆出MHBst结合蛋白．

关键词：酵母双杂交技术 MHBst 结合蛋白克隆

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抑制性消减杂交技术筛选干扰素α转染HepG2细胞中上调的表达基因

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中国新药与临床杂志 2006年第1期25卷 21-25页

作者：曲建慧成军张黎影徐东平钟彦伟刘妍王琳戴久增张玲霞中国人民解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所北京100011 中国人民解放军第302医院专家组北京100039

目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术筛选干扰素α(IFN-α) 真核表达质粒转染HepG2细胞后差异表达上调的基因。方法:首先构建IFN-α真核表达载体pcDNA3．1(-) -IFN-α,并转染HepG2细胞,以空载体pcD... 详细信息

目的:应用抑制性消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)技术筛选干扰素α(IFN-α) 真核表达质粒转染HepG2细胞后差异表达上调的基因。方法:首先构建IFN-α真核表达载体pcDNA3．1(-) -IFN-α,并转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液, 提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaI酶切后,将实验组cDNA分成2组,分别与2种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与T／A载体连接,构建cDNA消减文库,并转化大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增鉴定,进行测序及同源性分析。结果:构建了pcDNA3．1(-)-IFN-α真核表达质粒,并成功构建了该质粒转染HepG2细胞后差异表达基因的cDNA消减文库。文库扩增后得到200个白色克隆,随机挑取70个进行菌落PCR分析,结果显示均含有插入片段,将含有200-1000 bp插入片段的35个克隆进行测序,并通过生物信息学分析获得17种已知基因序列和1个染色体序列。结论:应用SSH技术成功构建了pcDNA3．1(-)-IFN-α转染的HepG2细胞中差异上调表达基因的cDNA消减文库。该文库的建立为进一步阐明IFN-α作用的分子生物学机制提供了重要的理论依据。

关键词：干扰素α 杂交基因文库蒂选

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基因芯片技术筛选干扰素β刺激HepG2细胞后的差异表达基因

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中国新药与临床杂志 2006年第1期25卷 17-20页

作者：钟彦伟成军曲建慧李晓东郭江戴久增中国人民解放军军医进修学院北京100853 北京地坛医院传染病研究所北京100011 中国人民解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

目的:应用基因芯片技术阐明重组干扰素β(IFN-β)作用HepG2细胞后,对HepG2细胞基因表达谱的影响。方法:以2×10~6U·L^(-1)浓度的重组IFN-β刺激对数生长期的HepC2细胞系,以生理盐水处理的 HepG2细胞为平行对照,制备转染后的细... 详细信息

目的:应用基因芯片技术阐明重组干扰素β(IFN-β)作用HepG2细胞后,对HepG2细胞基因表达谱的影响。方法:以2×10~6U·L^(-1)浓度的重组IFN-β刺激对数生长期的HepC2细胞系,以生理盐水处理的 HepG2细胞为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA。应用基因表达谱芯片技术对差异表达的 mRNA进行检测和分析。结果:HepG2细胞经重组IFN-β刺激之后,有80条差异基因表达,其中38条基因表达增强,42餐基因表达降低。这些差异表达基因与细胞的增生,分化和细胞的信号转导密切相关。结论:应用基因表达谱芯片技术筛选到重组IFN-β作用HepC2细胞后差异表达基因,为进一步了解IFN-β治疗病毒性肝炎的作用机制提供新的依据。

关键词：干扰素β 重组蛋白质类基因表达基因芯片

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丙型肝炎病毒基因型分型及临床意义

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肝脏 2006年第6期11卷 416-417页

作者：王琳徐东平张玲霞北京解放军第三二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室 100039

全世界约有1.7亿人受到丙型肝炎病毒(HCV)感染,我国HCV感染率为3.2%,感染者约3800万。HCV基因分型与病程发展和治疗应答有一定相关性,例行检测有助于对特定的感染做出判断和有效的临床干预。[第一段]

关键词：丙型肝炎病毒基因型分型临床意义 HCV基因分型感染率治疗应答病程发展临床干预

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酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白基因

酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白基因

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：钟彦伟郭风劲曲建慧纪冬程勇前李晓东戴久增王琳成军郭江解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所

目的:应用酵母双杂交技术筛选重组干扰素β(IFN-β)结合蛋白基因,探索IFN-β抗病毒作用的分子机制。方法:用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFN-β基因,与酵母表达载体pGBKT7连接构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,然后与含人肝细胞cDNA文库质... 详细信息

目的:应用酵母双杂交技术筛选重组干扰素β(IFN-β)结合蛋白基因,探索IFN-β抗病毒作用的分子机制。方法:用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFN-β基因,与酵母表达载体pGBKT7连接构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,然后与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD／ -Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落。提取酵母质粒后转化大肠杆菌(DH5 α)并经氨苄青霉素抗性筛选;提取单克隆菌落质粒,酶切鉴定,序列测定后进行生物信息学分析

关键词：酵母双杂交技术干扰素β 结合蛋白

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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆化

乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆化

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：宫嫚纪冬刘妍王建军张健李筠成军郭江张黎颖解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所

目的:应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法:以HBV X蛋白表达质粒pcDNA3．1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照... 详细信息

目的:应用基因表达谱芯片技术及生物信息学技术筛选并克隆乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白反式激活新型靶基因,进一步阐明HBV感染相关性疾病的发病机制。方法:以HBV X蛋白表达质粒pcDNA3．1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照,提取总RNA进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析。应用分子生物学技术,结合生物信息学技术,克隆HBV X反式激活作用的新的靶基因。结果:对于所获基因片段序列分析表明,其中之一为新型基因片段。从HepG2细胞提取总RNA,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)

关键词：反式激活靶基因克隆化乙型肝炎病毒 XTP13

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应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选XTP12蛋白上调基因

应用抑制性消减杂交技术克隆和筛选XTP12蛋白上调基因

引用

第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：宫嫚纪冬刘妍李筠成军郭江张黎颖解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室解放军第302医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所北京地坛医院传染病研究所

目的:为筛选与克隆乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能线索,我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选并克隆XTP12反式激活的新型靶基因。方法: 以XTP12表达质粒pcDNA3．1(-)-XTP12转... 详细信息

目的:为筛选与克隆乙型肝炎病毒(HBV)反式激活基因XTP12的上调基因,了解其可能存在的调节功能线索,我们应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学技术筛选并克隆XTP12反式激活的新型靶基因。方法: 以XTP12表达质粒pcDNA3．1(-)-XTP12转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3．1(-)为平行对照,制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经Rsa Ⅰ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行2次消减杂交及2次抑制性聚合酶链反应(PCR),将产物与pGEM-Teasy 载体连接,构建cDNA消减文库,并转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性

关键词：抑制性消减杂交技术反式激活消减文库上调基因 XTP12

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