检索结果-内蒙古大学图书馆

中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 26-29页

作者：李进刘妍戴久增徐东平张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3·1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBVX蛋白对p53基因表达的调节。结果成功构建报告载体pCAT3-p53p,克隆的p53启动子有顺式激活下游基因的活性;pCAT3-p53p与pcDNA3·1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降,说明HBV X蛋白抑制p53基因启动子的转录。RT-PCR结果表明,转染了pcDNA3·1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。结论HBVX蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达,本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果,而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。

关键词：肝炎,病毒性,人肝炎,乙型蛋白p53 反式抑制

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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 343-345页

作者：钟彦伟成军郭风劲曲建慧纪冬程勇前李晓东郭江戴久增王琳徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Tr... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析。结果应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白。初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用。结论应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白。

关键词：酵母菌杂交干扰素β 结合蛋白

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羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究

羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研...

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：刘妍徐东平戴久增韩萍陆荫英成军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院感染7科解放军第三○二医院感染9科北京地坛医院传染病研究所

目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白。本课题组前期构建了羧基端167位氨基酸截短的HBV中表面蛋白(MHBst),并证明具有反式激活SV40启动子的功能。为了深入探索MHBst反式激活靶基因的机制,本研究拟构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式

关键词：反式激活消减文库原癌基因 c-myc HBV 羧基末端

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丙型肝炎高变区1合成肽体外刺激HCV感染PBMC细胞因子分泌的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 279-281页

作者：迟淑萍李靖高蓉苏海滨李伯安李薇程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫研究室北京100039 中华医学会

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周... 详细信息

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周血单核细胞(PBMC)后,患者PBMC出现了明显的增殖;(2)培养上清中干扰素γ(IFNγ)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)都有不同程度的提高,白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平并没有提高;(3)增殖细胞主要为CD4阳性淋巴细胞。结论我们设计的HCV高变区1合成肽引发的免疫因子的释放倾向于TH2类因子。

关键词：肝炎病毒属肽合成表位细胞因子类单核细胞/血液丙型肝炎病毒(HCV) 细胞因子分泌 HCV感染高变区1 PBMC

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乙型肝炎病毒前-S1蛋白结合蛋白小鼠同源基因的生物信息学分析

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 241-244页

作者：成军董菁王建军张健纪冬钟彦伟刘妍王琳北京地坛医院传染病研究所 100011 解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室

目的克隆、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)小鼠同源基因,并进行初步的生物信息学分析。方法以克隆的人PS1BP基因序列作为参照,利用美国国立卫生研究院国立医学图书馆生物工程信息学中心建立的的核苷酸数据库,以及在线... 详细信息

目的克隆、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)小鼠同源基因,并进行初步的生物信息学分析。方法以克隆的人PS1BP基因序列作为参照,利用美国国立卫生研究院国立医学图书馆生物工程信息学中心建立的的核苷酸数据库,以及在线核苷酸序列同源性比对分析软件BLASTn,与数据库中已经收录的小鼠cDNA序列进行比对,确定PS1BP小鼠同源基因,比较人和小鼠PS1BP的蛋白质一级结构序列的同源性。对小鼠PS1BP蛋白质一级结构的特点进行生物信息学分析,并确定小鼠PS1BP基因组DNA的结构特点。结果通过不同种属核昔酸序列的同源性比对,确定小鼠PS1BP的cDNA由1455nt组成,编码产物由484aa组成。与人PS1BP蛋白质一级结构的同源性为84.92％(411／484)。对小鼠PS1BP蛋白一级结构序列进行生物信息学分析,发现一系列潜在的蛋白修饰位点。以小鼠PS1BP的cDNA序列作为参照,对高通量基因序列数据库进行同源基因的搜索,发现小鼠的一段基因组DNA序列(AC117576.3)与之同源,进一步的分子结果表明,小鼠的PS1BP基因组DNA含有3段外显子序列,2段内含子序列。结论确定了小鼠PS1BP基因序列,为进一步研究其功能和生物学作用奠定了基础。

关键词：乙型肝炎病毒前-S1蛋白结合蛋白小鼠同源基因生物信息学

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酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白的基因

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 245-248页

作者：王建军成军刘敏杨倩蔺淑梅刘妍解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与乙型肝炎e抗原反式激活蛋白(HBeAgTP)相互作用蛋白的基因。方法应用抑制性消减杂交技术及生物信息学技术筛选并克隆HBeAg反式激活的新型靶基因HBeAgTP。用聚合酶链反应(PCR)法扩增HBeAgTP基因,连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性菌落,PCR从中扩增出目的片段并测序,进行生物信息学分析。结果成功克隆出HBeAgTP基因并在酵母细胞中表达,应用酵母双杂交筛选出阳性菌落24个,经生物信息学分析为15种已知基因。结论成功克隆出HBeAgTP的结合蛋白,包括一些与细胞内蛋白质的转录、翻译、免疫调节及物质和能量代谢相关的基因。

关键词：酵母双杂交技术筛选乙型肝炎e抗原反式激活蛋白结合蛋白基因

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

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中华肝脏病杂志 2005年第10期13卷 738-740页

作者：刘妍白桂芹成军吴顺华王琳严福明张玲霞崔玉芳解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A) 相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4A(NS4A) 相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将聚合酶链反应法扩增的HCV NS4A基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和X-α-半乳糖上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠杆菌,接种在氨苄青霉素-LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCV NS4A基因, 构建表达载体并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在四缺培养基又能在铺有X-α-半乳糖的四缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落22个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞能量代谢、蛋白翻译合成等多种生物学过程。结论成功克隆出HCV NS4A蛋白在肝细胞内的结合蛋白, 为进一步研究NS4A蛋白的功能、阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。

关键词：肝炎病毒,丙型病毒非结构蛋白基因表达肝细胞结合蛋白酵母双杂交丙型肝炎病毒(HCV) 非结构蛋白NS4A 结合蛋白基因人肝细胞克隆

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B肝细胞结合蛋白基因的筛选与克隆

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 248-251页

作者：刘妍成军白桂芹严福明吴顺华王琳张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵... 详细信息

目的筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白4B(NS4B)相互作用蛋白的基因,明确其具体作用机制。方法应用酵母双杂交系统3,将多聚酶链反应(PCR)法扩增的HCVNS4B基因连接入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基和Xα半乳糖(Xαgal)上进行双重筛选阳性菌落,提取阳性酵母菌落的质粒转化大肠埃希菌,接种在氨苄西林LB平板上,选择生长菌落,提取质粒酶切鉴定,测序并在GenBank中进行生物信息学分析。结果成功克隆出HCVNS4B基因并在酵母细胞中表达,与肝文库配合后选出既能在4缺(SD/TrpLeuAdeHis)培养基又能在铺有Xαgal的4缺培养基上生长,并变成蓝色的真阳性菌落5个,序列分析显示,筛选到的肝细胞蛋白编码基因参与细胞代谢、生物氧化、生长调节等多种生物学过程。结论成功克隆出HCVNS4B蛋白与肝细胞相互作用蛋白,为进一步研究NS4B蛋白的功能,阐明HCV致病的分子生物学机制提供了新线索。

关键词：肝炎,丙型肝炎病毒属病毒非结构蛋白质类双杂交系统技术丙型肝炎病毒(HCV) NS4B基因结合蛋白基因人肝细胞非结构蛋白克隆

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乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP13的克隆

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传染病信息 2005年第4期18卷 177-179页

作者：宫嫚成军纪冬刘妍郭江张黎颖王建军张健李筠解放军第三○二医院病毒性肝炎研究室北京100039 北京市地坛医院传染病研究所北京100011

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多... 详细信息

目的克隆乙型肝炎病毒(HBV)X 蛋白反式激活新型靶基因。方法以 HBV X 蛋白表达质粒 pcDNA3 1(-)-X转染 HepG2细胞,以空载体 pcDNA3.1(-)为平行对照,提取总 RNA 进行逆转录,对产物行基因表达谱芯片分析,确定新基因编码序列后,以逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)技术扩增新基因序列。结果获得新基因的全长序列,并测序证实,命名为 X 蛋白反式激活蛋白13(XTP13)。结论成功克隆 XTP13,为进一步阐明 HBxAg 在 HBV 感染中的分子生物学机制奠定基础。

关键词：乙型肝炎病毒 X抗原反式激活

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4B反式激活基因的克隆化研究

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肝脏 2005年第1期10卷 24-26页

作者：刘妍成军王建军白桂芹王志凌郭风劲纪冬崔玉芳北京解放军第三○二医院传染病研究所基因治疗研究中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室

目的　应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法　以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B... 详细信息

目的　应用抑制性消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)技术构建丙型肝炎病毒 (HCV)非结构蛋白 4B(NS4B)转染细胞差异表达cDNA消减文库 ,克隆HCVNS4B蛋白反式激活相关基因。方法　以HCVNS4B表达质粒pcDNA3 .1( ) NS4B转染HepG2细胞 ,以空载体pcDNA3 .1( )为对照 ,制备转染后的细胞裂解液 ,提取mRNA并逆转录为cDNA ,进行抑制性消减杂交分析。将富集的二次PCR产物与T A载体连接 ,并转染大肠杆菌进行文库扩增 ,随机挑取克隆聚合酶链反应 (PCR)扩增后进行测序及同源性分析。结果　文库扩增后得到 3 3个阳性克隆 ,经菌落PCR分析显示其中 2 8个克隆含有大小不等的 2 0 0～ 10 0 0bp插入片段。测序及同源性分析显示 ,12种已知基因编码蛋白 ,包括一些与细胞周期、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因 ,可能是NS4B反式激活靶基因。结论　成功构建了HCVNS4B反式激活基因差异表达的cDNA消减文库 ,为进一步阐明HCVNS4B反式调节的靶基因在肝炎。

关键词： NS4B 非结构蛋白反式激活基因克隆化研究丙型肝炎病毒(HCV) 聚合酶链反应(PCR) cDNA消减文库抑制性消减杂交分析反式激活相关基因 HepG2细胞反式激活靶基因分子生物学机制同源性分析基因编码蛋白蛋白编码基因

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