检索结果-内蒙古大学图书馆

中华肝脏病杂志 2006年第2期14卷 81-85页

作者：王琳成军李克洪源解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白6号结合蛋白基因(Hcbp6)序列表达的调控机制。方法根据软件对启动子的预测,选取翻译起始密码子ATG上游3256bp及下游180bp的DNA序列, 分成5段活性区域,分别以聚合酶链反应技术(PCR),肝母细胞瘤细胞系He... 详细信息

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白6号结合蛋白基因(Hcbp6)序列表达的调控机制。方法根据软件对启动子的预测,选取翻译起始密码子ATG上游3256bp及下游180bp的DNA序列, 分成5段活性区域,分别以聚合酶链反应技术(PCR),肝母细胞瘤细胞系HepG2基因组DNA为模板,扩增该启动子DNA片段,将其克隆至pCAT3中,构建pCAT3-Hcbp6-p报告基因表达载体,将该质粒分别转染HepG2、NIH3T3细胞,用酶联免疫吸附法检测报告基因编码产物氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果发现质粒pCAT3-Hcbp6-1066p和pCAT3-Hcbp6-240p能够指导CAT的表达,其平均吸光度值(A)是pCAT3-basic对照质粒的3.1倍和6.4倍。结论本研究克隆的启动子DNA序列具有转录活性, 这一结果为研究Hcbp6的调节机制,进一步阐明HCV核心蛋白的作用机制奠定了基础。

关键词：肝炎病毒丙型启动子 Hcbp6

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用RACE技术对一株肠道病毒3′端进行扩增和序列分析

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 410-412页

作者：侯俊沈宏辉胡燕朱雷王志杰雷厉貌盼勇解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室北京100039

目的应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增,并对其核苷酸序列进行比较分析。方法提取病毒总RNA,以锚定oligdT(17)引物进行逆转录,用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增,将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结... 详细信息

目的应用3′RACE技术对一株本室分离肠道病毒基因组3′末端进行扩增,并对其核苷酸序列进行比较分析。方法提取病毒总RNA,以锚定oligdT(17)引物进行逆转录,用特异引物及锚定引物进行3′RACE扩增,将PCR产物进行克隆、测序和序列分析。结果获得了该病毒的3′端核苷酸序列,同源性分析结果显示该肠道病毒的核苷酸序列与肠道病毒76、89、90、91型的同源性最高为90%左右,而与其他型别的肠道病毒的同源性均小于80%;推导的氨基酸同源性与肠道病毒76、89、90、91型均在90%以上。结论用RACE技术对肠道病毒3′端进行扩增及序列分析,证明该病毒属新型肠道病毒类,为进一步研究该病毒的分子生物学特性奠定了基础。

关键词：肠道病毒属 DNA 序列分析

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端粒和端粒酶与肝细胞的永生化

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中国临床康复 2006年第41期10卷 143-145页

作者：赵擎辛绍杰貌盼勇解放军总医院军医进修学院解放军第三○二医院传染病研究所病毒室北京市100039 解放军第三○二医院传染病研究所病毒室

目的:端粒是位于真核细胞染色体末端的蛋白-DNA复合体,保护染色体完整性和稳定性。端粒酶是一种特殊的细胞核蛋白反转录酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端。端粒酶介导的端粒延长作为细胞中端粒缩短的主... 详细信息

目的:端粒是位于真核细胞染色体末端的蛋白-DNA复合体,保护染色体完整性和稳定性。端粒酶是一种特殊的细胞核蛋白反转录酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端。端粒酶介导的端粒延长作为细胞中端粒缩短的主要补偿机制,对正常细胞以及肿瘤细胞延长分裂代数起着重要作用。分化良好并具有肝脏正常合成代谢功能的永生化肝细胞在生物医学研究,尤其是肝细胞移植、生物人工肝支持治疗以及药理学和毒理学研究方面具有广泛的应用前景。资料来源:应用计算机检索Pubmed数据库1990-01/2005-12有关端粒、端粒酶和肝细胞永生化的文章,检索词“telomere,telomerase,hepatocyte,immortalization”,限定文章语言种类为English。同时计算机检索中国期刊全文数据库、万方数据库1994-01/2005-12期间的相关文章,检索词“端粒、端粒酶、永生化、肝细胞”,限定文章语言种类为中文。资料选择:纳入标准:①有关端粒和端粒酶结构和功能的研究文献。②有关端粒、端粒酶与肝细胞永生化相关性的文献。排除标准:重复研究。资料提炼:共收集到32篇有关端粒、端粒酶与肝细胞永生化相关性的文献,查找全文,从中选取14篇作为主要参考文献。资料综合:将所选文献资料按照以下顺序归纳总结:①端粒的结构和功能:端粒是指位于真核细胞染色体末端的一种特殊结构,由富含G的DNA重复序列与端粒结合蛋白所构成的一种蛋白-DNA复合体,它既可保护染色体不受核酸酶的破坏,又避免了因DNA粘性末端的裸露而发生的染色体融合。②端粒酶的结构和功能:端粒酶是一种RNA依赖的DNA聚合酶,能以自身的RNA为模板,反转录合成端粒DNA序列,添加到染色体末端,以补偿细胞分裂时端粒DNA缩短,使细胞克服危机期,成为永生化细胞。③端粒、端粒酶在肝细胞永生化:将端粒酶基因转染正常的人体细胞能使一部分细胞的寿命延长,这一技术目前已成功用于延缓组织工程细胞的衰老。结论:端粒酶的活化和端粒长度的维持与肝细胞永生化密切相关,端粒酶介导的永生化肝细胞为生物人工肝脏、肝细胞移植等临床治疗提供了细胞学基础。

关键词：端粒端粒,末端转移酶肝细胞文献综述

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丙型肝炎病毒非结构蛋白NS4A反式激活基因的克隆化研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第3期20卷 270-272页

作者：刘妍白桂芹成军杨倩张黎颖纪冬王建军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039 北京地坛医院传染病研究所

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）... 详细信息

目的应用抑制性消减杂交（SSH）技术构建丙型肝炎病毒非结构蛋白4A（HCV NS4A）转染细胞差异表达cDNA消减文库，克隆HCV NS4A蛋白反式激活相关基因。方法以HCV NS4A表达质粒pcDNA3．1（-）-NS4A转染Hep G2细胞，以空载体pcDNA3．1（-）为对照，制备转染后的细胞裂解液，提取mRNA并逆转录为cDNA，进行SSH分析。将富集的二次PCR产物与TIA载体连接，并转染大肠埃希菌进行文库扩增，随机挑取克隆，聚合酶链反应（PCR）扩增后进行测序及同源性分析。结果文库扩增后得到36个阳性克隆，经菌落PCR分析显示200～1000bp插入片段。对其中的25个片段测序，并进行同源性分析，显示18种已知基因编码蛋白和2种未知功能基因序列，包括一些与细胞周期、细胞凋亡、信号传导及肿瘤发生等细胞生长调节密切相关的蛋白编码基因，可能是NS4A反式激活靶基因。结论成功构建了HCV NS4A反式激活基因差异表达的cDNA消减文库，为进一步阐明HCV NS4A反式调节的靶基因等提供了相关的平台。

关键词：肝炎病毒病毒非结构蛋白质类反式激活(遗传学) 抑制,遗传杂交

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构建永生化人肝细胞系人端粒酶反转录酶真核表达质粒

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中国临床康复 2006年第45期10卷 47-50,I0005页

作者：赵擎孙颖胡燕侯俊游绍莉赵军辛绍杰貌盼勇解放军总医院军医进修学院北京市100853 解放军第三○二医院传染病研究所病毒研究室北京市100039 解放军第三○二医院感染三科北京市100039

目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②... 详细信息

目的:构建人端粒酶反转录酶真核表达质粒,为人端粒酶反转录酶稳定转染细胞提供简单、快速的检测方法。方法:实验于2005-06/2006-03在解放军第三○二医院病毒研究室完成。①聚合酶链反应扩增人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白基因。②利用基因重组技术构建真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT,筛选阳性克隆进行双酶切、聚合酶链反应和序列测定。③转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶基因和绿色荧光蛋白的表达情况。结果:①聚合酶链反应扩增目的基因:电泳显示人端粒酶反转录酶基因的聚合酶链反应产物在3.5kb处有特异性目的条带,绿色荧光蛋白基因的聚合酶链反应产物在750bp处显示特异性目的条带。②质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建和鉴定结果:双酶切、聚合酶链反应鉴定和测序结果与预期完全相符。③转染HepG2细胞结果:荧光显微镜下观察人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白主要分布在细胞核内。结论:①初步验证所构建的真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的正确性。两种质粒可使转染细胞同时表达人端粒酶反转录酶和绿色荧光蛋白的融合蛋白,通过观察绿色荧光蛋白的表达对转染效率和结果进行及时、快捷的观察。②重组真核表达质粒VR1012-GFP-hTERT和pEGFP-C1-hTERT的构建成功,为人端粒酶反转录酶转染细胞提供简洁、快速、实时的检测方法,并为建立永生化人肝细胞系奠定基础。

关键词：端粒,末端转移酶发光蛋白质类质粒

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乙型肝炎病毒X蛋白转录抑制抑癌基因p53表达的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第1期20卷 26-29页

作者：李进刘妍戴久增徐东平张玲霞解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心-全军病毒性肝炎防治研究重点实验室北京100039

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)X蛋白对抑癌基因p53基因表达的调节作用。方法以寡核苷酸芯片技术筛选的HBx反式调节基因结果为基础,利用生物信息学技术确定抑癌基因p53的启动子区域(p53p),构建真核报告基因表达载体pCAT3-p53p;以该质粒单独及与pcDNA3·1(-)-X共转染HepG2细胞,用酶联免疫吸附法(ELISA)检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。进一步采用半定量RT-PCR技术检测HBVX蛋白对p53基因表达的调节。结果成功构建报告载体pCAT3-p53p,克隆的p53启动子有顺式激活下游基因的活性;pCAT3-p53p与pcDNA3·1(-)-X共转染时CAT的表达活性明显下降,说明HBV X蛋白抑制p53基因启动子的转录。RT-PCR结果表明,转染了pcDNA3·1(-)-X的HepG2细胞中p53基因mRNA表达减少。结论HBVX蛋白在转录水平上反式抑制抑癌基因p53的表达,本实验不仅验证了基因芯片的筛选结果,而且为HBx在致肝细胞癌发生中的作用提供分子基础。

关键词：肝炎,病毒性,人肝炎,乙型蛋白p53 反式抑制

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应用酵母双杂交技术筛选干扰素β结合蛋白的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2006年第4期20卷 343-345页

作者：钟彦伟成军郭风劲曲建慧纪冬程勇前李晓东郭江戴久增王琳徐东平解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究室北京100039 北京地坛医院传染病研究所重庆医科大学细胞生物学与遗传学教研室

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Tr... 详细信息

目的应用酵母双杂交技术筛选干扰素β(IFNβ)结合蛋白。方法用多聚酶链反应(PCR)技术扩增IFNβ基因,连接酵母表达载体pGBKT7构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109,与含人肝细胞cDNA文库质粒的酵母细胞Y187进行配合,在营养缺陷型培养基(SD/-Trp-Leu-His-Ade)和X-α-半乳糖(X-α-gal)上进行双重筛选阳性克隆,提取酵母质粒后转化大肠埃希菌(DH5α)并经氨苄西林抗性筛选,提取单克隆菌落质粒,进行酶切鉴定及序列测定,并进行生物信息学分析。结果应用酵母双杂交技术筛选出阳性克隆29个,经生物信息学分析,排除读码框架不正确者,最后得到19个克隆基因,编码14种已知蛋白和一种未知功能蛋白。初步发现铁蛋白与IFNβ具有结合作用。结论应用酵母双杂交技术筛选出多种与IFNβ具有结合作用的蛋白。

关键词：酵母菌杂交干扰素β 结合蛋白

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羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研究

羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白反式激活原癌基因c-myc表达的研...

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第五届全国肝脏疾病临床暨中华肝脏病杂志成立十周年学术会议

作者：刘妍徐东平戴久增韩萍陆荫英成军解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院传染病研究所病毒性肝炎研究中心、全军病毒性肝炎防治研究重点实验室解放军第三○二医院感染7科解放军第三○二医院感染9科北京地坛医院传染病研究所

目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端... 详细信息

目的:乙型肝炎病毒(HBV)感染不仅引起急、慢性病毒性肝炎,而且与肝细胞癌(HCC)发生密切相关。研究发现,几乎所有HBV相关的HCC都具有HBV DNA的染色体整合现象,整合到染色体上的HBV DNA 能编码两种类型的反式激活因子,即HBxAg和羧基末端截短的HBV表面抗原中蛋白。本课题组前期构建了羧基端167位氨基酸截短的HBV中表面蛋白(MHBst),并证明具有反式激活SV40启动子的功能。为了深入探索MHBst反式激活靶基因的机制,本研究拟构建羧基末端截短的乙型肝炎病毒表面抗原中蛋白(MHBst)反式

关键词：反式激活消减文库原癌基因 c-myc HBV 羧基末端

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丙型肝炎高变区1合成肽体外刺激HCV感染PBMC细胞因子分泌的研究

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中华实验和临床病毒学杂志 2005年第3期19卷 279-281页

作者：迟淑萍李靖高蓉苏海滨李伯安李薇程云解放军第三○二医院传染病研究所免疫研究室北京100039 中华医学会

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周... 详细信息

目的检测丙型肝炎病毒(HCV)高变区1(HVR1)模拟表位刺激自然感染患者外周血淋巴细胞后的细胞因子水平变化。方法细胞因子检测运用ELISA、流式细胞仪(FACS)淋巴细胞分类以及计算机模拟多肽抗原性。结果(1)1号和5号合成肽刺激HCV患者外周血单核细胞(PBMC)后,患者PBMC出现了明显的增殖;(2)培养上清中干扰素γ(IFNγ)、白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)都有不同程度的提高,白介素2(IL-2)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平并没有提高;(3)增殖细胞主要为CD4阳性淋巴细胞。结论我们设计的HCV高变区1合成肽引发的免疫因子的释放倾向于TH2类因子。

关键词：肝炎病毒属肽合成表位细胞因子类单核细胞/血液丙型肝炎病毒(HCV) 细胞因子分泌 HCV感染高变区1 PBMC

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乙型肝炎病毒前-S1蛋白结合蛋白小鼠同源基因的生物信息学分析

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中华肝脏病杂志 2005年第4期13卷 241-244页

作者：成军董菁王建军张健纪冬钟彦伟刘妍王琳北京地坛医院传染病研究所 100011 解放军第三0二医院传染病研究所基因治疗中心全军病毒性肝炎防治研究重点实验室

目的克隆、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)小鼠同源基因,并进行初步的生物信息学分析。方法以克隆的人PS1BP基因序列作为参照,利用美国国立卫生研究院国立医学图书馆生物工程信息学中心建立的的核苷酸数据库,以及在线... 详细信息

目的克隆、鉴定乙型肝炎病毒(HBV)前-S1蛋白结合蛋白(PS1BP)小鼠同源基因,并进行初步的生物信息学分析。方法以克隆的人PS1BP基因序列作为参照,利用美国国立卫生研究院国立医学图书馆生物工程信息学中心建立的的核苷酸数据库,以及在线核苷酸序列同源性比对分析软件BLASTn,与数据库中已经收录的小鼠cDNA序列进行比对,确定PS1BP小鼠同源基因,比较人和小鼠PS1BP的蛋白质一级结构序列的同源性。对小鼠PS1BP蛋白质一级结构的特点进行生物信息学分析,并确定小鼠PS1BP基因组DNA的结构特点。结果通过不同种属核昔酸序列的同源性比对,确定小鼠PS1BP的cDNA由1455nt组成,编码产物由484aa组成。与人PS1BP蛋白质一级结构的同源性为84.92％(411／484)。对小鼠PS1BP蛋白一级结构序列进行生物信息学分析,发现一系列潜在的蛋白修饰位点。以小鼠PS1BP的cDNA序列作为参照,对高通量基因序列数据库进行同源基因的搜索,发现小鼠的一段基因组DNA序列(AC117576.3)与之同源,进一步的分子结果表明,小鼠的PS1BP基因组DNA含有3段外显子序列,2段内含子序列。结论确定了小鼠PS1BP基因序列,为进一步研究其功能和生物学作用奠定了基础。

关键词：乙型肝炎病毒前-S1蛋白结合蛋白小鼠同源基因生物信息学

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