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中国人兽共患病学报 2004年第Z1期21卷 78-79页

作者：李文桂陈雅棠刘成伟余登高重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆

　　双氢青蒿素(dihydroartemisinin;DHA)是用硼氢化钠还原青蒿素而形成的一种衍生物,我们发现DHA对卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocys"s Carin"Pneumonia;PCP)有较好的治疗作用,但尚不清楚其作用机理.因此,我们采用形态学方法研究... 详细信息

　　双氢青蒿素(dihydroartemisinin;DHA)是用硼氢化钠还原青蒿素而形成的一种衍生物,我们发现DHA对卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumocys"s Carin"Pneumonia;PCP)有较好的治疗作用,但尚不清楚其作用机理.因此,我们采用形态学方法研究DHA对PCP大鼠肺内卡氏肺孢子虫(PneumocystisCarinii;Pc)超微结构的影响,从而为阐明DHA的作用机理提供重要的基础资料.……

关键词：双氢青蒿素大鼠体内卡氏肺孢子虫肺炎作用机理还原青蒿素治疗作用硼氢化钠基础资料方法研究超微结构衍生物形态学肺内

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rSj26GST-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于慢性日本血吸虫病诊断的研究

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四川大学学报（医学版） 2011年第3期42卷 331-334页

作者：蔡世飞李文桂王敏重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所重庆400016

目的探讨rSj26GST-Sj32-IgG-ELISA用于慢性日本血吸虫病的诊断价值。方法将含有重组质粒pET32α-Sj26GST-Sj32的大肠埃希菌BL21(DE3)用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,表达产物进行SDS-PAGE电泳,用Ni-NTA试剂盒纯化重组Sj26GST-Sj32(rSj26GST-Sj32)融合蛋白。常规方法制备日本血吸虫成虫抗原(SjAWA)。用rSj26GST-Sj32融合蛋白和SjAWA作为包被抗原建立ELISA检测慢性日本血吸虫病患者的血清特异性IgG抗体,同时以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者血清和健康人血清作为对照。结果 rSj26GST-Sj32融合蛋白检测慢性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为95.00%(38/40)和97.67%(42/43),而SjAWA分别为92.50%(37/40)和97.67%(42/43)。两种抗原的检出率差异无统计学意义(P均>0.05)。两种抗原与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清均有不同程度的交叉反应。rSj26GST-Sj32融合蛋白与泡型棘球蚴病患者血清无交叉反应,但SjAWA与该病2例患者血清有交叉反应,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 rSj26GST-Sj32-IgG-ELISA可用于慢性日本血吸虫病的免疫诊断。

关键词：酶联免疫吸附试验 rSj26GST-Sj32融合蛋白 IgG

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聚合酶链反应检测粪便中微小隐孢子虫

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1996年第2期14卷 111-114页

作者：马良陈雅棠刘约翰重庆医科大学传染病寄生虫病研究所

目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作... 详细信息

目的：利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）原理建立一种敏感且特异的方法检测人和动物粪便标本中的微小隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍｐａｒｖｕｍ，Ｃ．ｐ．）。方法：从含有Ｃ．ｐ．卵囊的人和豚鼠粪便标本中直接提取ＤＮＡ用作ＰＣＲ的模板。用一对人工合成的寡核苷酸序列作为ＰＣＲ引物，扩增长为４５２ｂｐ的Ｃ．ｐ．目的ＤＮＡ片段。扩增产物用琼脂糖凝胶电泳、溴化乙锭染色检测。结果：从感染Ｃ．ｐ．的人和豚鼠粪便标本ＤＮＡ抽提物中均扩增出目的片段，而从其他几种寄生虫、肠道微生物或宿主ＤＮＡ中均不能扩增出目的片段。本方法的敏感性比目前常用的检测方法高约１００倍。结论：ＰＣＲ技术检测人和动物粪便中的Ｃ．ｐ．，具有敏感性高且特异性强的特点，有希望成为隐孢子虫病诊断和流行病学调查的有力手段。

关键词：微小隐孢子虫聚合酶链反应粪便检测

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多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ/3疫苗构建及其表达效率

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中国地方病学杂志 2006年第5期25卷 490-493页

作者：李文桂王鸿朱佑明重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体p... 详细信息

目的构建多房棘球绦虫（Em）重组卡介苗（BCG—EmⅡ／3）疫苗，分析EmⅡ／3分子在该疫苗中的表达效率。方法超声粉碎泡球蚴组织提取总RNA，通过RT-PCR扩增EmⅡ／3的抗原编码基因；将该基因定向克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体pBCG，构建重组质粒pBCG—EmⅡ／3；电穿孔法转化BCG，构建多房棘球绦虫重组BCG-EmⅡ／3疫苗。免疫印迹分析重组BCG-EmⅡ／3疫苗的表达产物。结果 RT-PCR成功扩增出1680bp的EmⅡ／3抗原编码基因；双酶切证实EmⅡ／3抗原编码基因成功插入pBCG中；PCR证实rBCG—EmⅡ／3疫苗构建成功；免疫印迹分析发现重组BCG—EmⅡ／3疫苗的表达产物在相对分子质量（Mr）约为65×10^3处有明显的目的蛋白表达条带，且能被活动性泡球蚴病鼠血清特异识别。结论成功构建了多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ／3疫苗，为疫苗的开发和利用打下了坚实的理论基础。

关键词：多房棘球绦虫重组BCG—EmⅡ/3疫苗构建表达效率

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细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗的培育及鉴定

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中国地方病学杂志 2009年第3期28卷 283-287页

作者：叶艳菊李文桂周辉重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的培育并鉴定细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗。方法利用转pBI—Eg95质粒的根癌农杆菌LBA440d株介导的苜蓿子叶浸染法，将Eg95基因导入紫花苜蓿基因组，转Eg95基因苜蓿外植体在含有卡那霉素的选择培养基上经愈伤、出芽和生根阶段生长... 详细信息

目的培育并鉴定细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗。方法利用转pBI—Eg95质粒的根癌农杆菌LBA440d株介导的苜蓿子叶浸染法，将Eg95基因导入紫花苜蓿基因组，转Eg95基因苜蓿外植体在含有卡那霉素的选择培养基上经愈伤、出芽和生根阶段生长出小苗，最后移栽到装有营养土的花盆中，生长2～3个月，获得完整的转Eg95基因苜蓿疫苗。提取转Eg95基因苜蓿的DNA、RNA及叶蛋白，采用PCR、RT—PCR、十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）及Westernblot法进行鉴定。结果PCR、RT—PCR法在471bp处均扩增出目的条带；SDS—PAGE及Westernblot法可见转E驴5基因苜蓿蛋白在相对分子质量约16．5×10^3处出现特异条带，与预期结果相符：Bio—Rad Quantityone系统分析表达效率约占提取总苜蓿叶蛋白的0．06％。结论成功培育出细粒棘球绦虫转Eg95基因苜蓿疫苗。

关键词：细粒棘球绦虫植物基因修饰紫苜蓿疫苗

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隐孢子虫分子生物学研究进展

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 1995年第2期13卷 145-149页

作者：马良陈雅棠重庆医科大学传染病寄生虫病研究所

隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）为一属主要寄生于消化道上皮引起人和多种动物腹泻的原虫，因其在婴幼儿、免疫缺陷患者，尤其是获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）病人中感染率较高且危害严重而倍受人们重视。近年来国外一... 详细信息

隐孢子虫（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）为一属主要寄生于消化道上皮引起人和多种动物腹泻的原虫，因其在婴幼儿、免疫缺陷患者，尤其是获得性免疫缺陷综合征（ＡＩＤＳ）病人中感染率较高且危害严重而倍受人们重视。近年来国外一些学者相继利用核酸限制性片段长度多...

关键词：隐孢子虫分子生物学

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日本血吸虫重组质粒pGEX—Sj26GST的构建及在大肠埃希菌BL21（DE3）中的表达

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中华地方病学杂志 2013年第6期32卷 608-611页

作者：张丽李文桂向进平重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的构建日本血吸虫（Schistosomajaponicum，sj）重组质粒pGEX—Sj26GST，并研究其在大肠埃希菌（Escherichiacoli，Ecoli）BL21（DE3）中的表达。方法使用RNeasyMini试剂盒提取研成虫总RNA，实时荧光定量PCR（real—timePCR，RT—PCR）扩增日本血吸虫26kDa的谷胱甘肽-S-转移酶（Sj26GST）编码基因，并将扩增产物定向克隆到pGEX—lhT载体上，构建重组质粒pGEX—Sj26GST；将重组质粒电穿孔转化感受态大肠埃希菌BL21（DE3），异丙基硫代-B—D-半乳糖苷（IPTG）诱导其表达；通过十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）分析表达产物及蛋白印迹（Westernblot）试验鉴定表达的融合蛋白的抗原性。结果RT—PCR扩增出676bp大小的Sj26GST抗原编码基因；双酶切试验证实Sj26GST抗原编码基因成功克隆到pGEX—1λT载体中；SDS—PAGE分析出现相对分子质量（Mr）约52×10^5的融合蛋白，薄层扫描分析显示表达的融合蛋白约占总菌体蛋白的20％，Westernblot结果显示融合蛋白可被研感染的兔血清识别。结论成功构建重组质粒pGEX—sj26GST，其在大肠埃希菌BL21（DE3）中可获得表达，且表达的融合蛋白具有特异的抗原性。

关键词：血吸虫日本质粒大肠埃希菌

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细粒棘球绦虫重组Bb—Eg95疫苗的构建及鉴定

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中国地方病学杂志 2009年第2期28卷 218-221页

作者：周必英陈雅棠李文桂杨梅重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的构建和鉴定细粒棘球绦虫（珞）重组双歧杆菌（rBb）-Eg95疫苗。方法自行设计引物，从细粒棘球蚴包囊中分离原头节，超声粉碎后提取总RNA为模板，通过RT—PCR扩增获得Eg95抗原编码基因．采用BamH I和Eco RI双酶切，定向克隆到大肠埃... 详细信息

目的构建和鉴定细粒棘球绦虫（珞）重组双歧杆菌（rBb）-Eg95疫苗。方法自行设计引物，从细粒棘球蚴包囊中分离原头节，超声粉碎后提取总RNA为模板，通过RT—PCR扩增获得Eg95抗原编码基因．采用BamH I和Eco RI双酶切，定向克隆到大肠埃希菌-双歧杆菌（***—Bb）穿梭表达载体pGEX—IλT中．转化*** BL21（DE3）感受态细胞，构建重组质粒pGEX—Eg95。抽提质粒进行双酶切鉴定后，电穿孔转化到B6中，构建细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，抽提质粒进行PCR扩增鉴定。结果RT—PCR扩增出471bp的Eg95抗原编码基因；重组质粒用双酶切鉴定可切出4947bp的载体片段和471bp的目的基因片段；以具有氨苄青霉素抗性的rBb中抽提的质粒为模板进行PCR扩增可得到471bp的Eg95基因片段。结论成功构建了细粒棘球绦虫rBb—Eg95疫苗，为该疫苗的开发利用奠定了理论基础。

关键词：细粒棘球绦虫疫苗合成 DNA 重组

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日本血吸虫重组两歧双歧杆菌pGEX—Sj14—3—3疫苗免疫BALB／c小鼠的血清抗体动态观察

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中国地方病学杂志 2012年第3期31卷 301-304页

作者：张宁李文桂重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的动态观察重组两歧双歧杆菌（Bb）pGEX—Sj14—3—3疫苗免疫BALB／c小鼠后血清IgG及其亚类、IgE和IgA的变化。方法将96只BALB／c小鼠按体质量随机分为2组，每组48只．分别经口服灌胃（PO组）和鼻腔黏膜途径（IN组）用重组Bb（pGEX-S... 详细信息

目的动态观察重组两歧双歧杆菌（Bb）pGEX—Sj14—3—3疫苗免疫BALB／c小鼠后血清IgG及其亚类、IgE和IgA的变化。方法将96只BALB／c小鼠按体质量随机分为2组，每组48只．分别经口服灌胃（PO组）和鼻腔黏膜途径（IN组）用重组Bb（pGEX-Sj14—3—3）疫苗单次免疫小鼠，免疫后0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22周时每组各剖杀4只小鼠，眼球取血，采用常规酶联免疫吸附实验（ELISA法）检测小鼠血清IgG及其亚类、IgE和IgA水平。结果P0组和IN组小鼠血清IgG、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3、IgE、IgA水平分别在免疫后2—22、2～14、2～22、2～22、2～20、2～22、2—22周升高，PO组分别在8、6、6、4、8、10、6周达最高水平（0．065±0．001、0．021±0．002、0．011±0．001、0．015±0．003、0．014±0．002、0．011±0．001、0．013±0．002），与同组0周（0．032±0．001、0．015±0．002、0．005±0.002、0．005±0．001、0．006±0．001、0．006±0．001、0．005±0．001）比较，除IgG1、IgG2b外，差异有统计学意义（P均〈0．05或〈0．01）；而IN组分别在4、6、4、4、8、10、8周达最高水平（0．064±0．003、0．022±0．002、0．012±0．003、0．019±0．001、0．013±0．001、0．015±0．001、0．01±-0．003），与同组0周（0．032±0．001、0．015±0．002、0．005±0．002、0．005±0．001、0．006±0．001、0．006±0．001、0．005±0．001）比较，除IgG1、IgA外，差异均有统计学意义（P均〈0．05或〈0．01）。结论重组Bb（pGEX—sj14—3—3）疫苗在免疫早期（2—10周）可通过促进IgG2a、IgG2b、IgG3和IgG1、IgE、IgA合成诱导小鼠产生Th1和Th2混合型免疫应答。

关键词：血吸虫,日本疫苗抗体

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rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值

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中国地方病学杂志 2011年第1期30卷 39-43页

作者：王敏李文桂蔡世飞重庆医科大学附属第一医院传染病寄生虫病研究所 400016

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值.方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原（SjAWA）建立IgG-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型... 详细信息

目的探讨rSj26-Sj32融合蛋白-IgG-ELISA用于急性日本血吸虫病的诊断价值.方法利用纯化的rSj26-Sj32融合蛋白和日本血吸虫成虫粗抗原（SjAWA）建立IgG-ELISA方法检测急性日本血吸虫病患者血清,并以华支睾吸虫病、卫氏并殖吸虫病、泡型棘球蚴病、囊型棘球蚴病、乙型肝炎、肺结核患者和健康人血清作对照.结果 rSj26-Sj32和SjAWA检测急性日本血吸虫病患者的敏感性和特异性分别为90.00%（45/50）、97.67%（42/43）和92.00%（46/50）、97.67%（42/43）,二者比较差异无统计学意义（x2值均为0.0,P均＞0.05）;SjAWA与泡型棘球蚴病患者血清的交叉反应率为20.00%（2/10）,rSj26-Sj32与泡型棘球蚴病患者血清未见交叉反应,二者比较差异无统计学意义（x2=0.5,P＞0.05）;rSj26-Sj32和SjAWA与华支睾吸虫病和卫氏并殖吸虫病患者血清的交叉反应率分别为14.29%（3/21）、7.69%（1/13）和19.05%（4/21）、7.69%（1/13）,与囊型棘球蚴病、乙型肝炎和肺结核患者血清均未见交叉反应,二者比较差异无统计学意义（x2值均为0.0,P均＞0.05）.rSj26-Sj32-IgG-ELISA和SjAWA-IgG-ELISA诊断急性日本血吸虫病的阳性预告值、阴性预告值和诊断效率分别为97.83%（45/46）、89.36%（42/47）、93.55%（87/93）和97.87%（46/47）、91.30%（42/46）、94.62%（88/93）,二者比较差异无统计学意义（x2值均为0.0,P均＞0.05）.结论 rSj26-Sj32融合蛋白可用于急性日本血吸虫病的免疫诊断.

关键词：血吸虫病,日本诊断酶联免疫吸附测定免疫学试验

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