检索结果-内蒙古大学图书馆

第四军医大学学报 2007年第5期28卷 469-471页

作者：石华成海恩易发平杨俊霞张溢马永平宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学基础医学研究所重庆400016

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Wester... 详细信息

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Western blot检测hIL-24的表达.结果:PCR及测序结果均证实成功克隆了人IL-24基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24,该质粒被转染入Ca Ski细胞中能表达出hIL-24蛋白.结论:成功构建了hIL-24基因的真核表达载体.

关键词：白细胞介素24 克隆真核表达 Ca Ski细胞

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三七总皂甙对抗大鼠免疫性肝纤维化的实验研究

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第三军医大学学报 2007年第23期29卷 2212-2214页

作者：张桂灵石小枫冉长清徐曼朱照静浙江省余姚市人民医院感染科余姚315400 重庆医科大学附属第二医院感染科教育部感染性疾病分子生物学重点实验室重庆400010 重庆市中药研究院中药药理室重庆400065 重庆医科大学基础医学院药学教研室重庆400016

目的进一步观察三七总皂甙抗大鼠免疫性肝纤维化的作用。方法用牛血清白蛋白等复合因素致大鼠肝纤维化,同时给予三七总皂甙60mg/kg和30mg/kg皮下注射治疗,共6周。分离血清,检测肝功能;分离肝组织,作病理学纤维化程度分级和免疫组化观察... 详细信息

目的进一步观察三七总皂甙抗大鼠免疫性肝纤维化的作用。方法用牛血清白蛋白等复合因素致大鼠肝纤维化,同时给予三七总皂甙60mg/kg和30mg/kg皮下注射治疗,共6周。分离血清,检测肝功能;分离肝组织,作病理学纤维化程度分级和免疫组化观察Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达。结果三七总皂甙能降低血清转氨酶,增加肝脏白蛋白的合成,减轻肝纤维化程度,抑制免疫性肝纤维化大鼠Ⅰ、Ⅲ型胶原及TGF-β1的合成表达。结论三七总皂甙具有抗肝纤维化作用。

关键词：三七总皂甙肝纤维化 Ⅰ Ⅲ型胶原 TGF—β1

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稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2361-2363页

作者：郑宏庭邓华聪兰丽珍方芳刘金波李丙蓉蹇锐重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G... 详细信息

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定。以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测。结果所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性。葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应。

关键词： mhPINS基因逆转录病毒 HepG2细胞胰岛素

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人PPARδ受体cDNA全长序列的克隆及测序

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重庆医科大学学报 2007年第8期32卷 789-791,795页

作者：章涛袁野李苌清杨俊卿周元国周岐新重庆医科大学基础医学院药理学教研室重庆400016 第三军医大学野战外科研究所分子生物学中心重庆400042

目的:对人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPAR δ基因真核表达载体及其受体功能研究奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长cDNA序列,胶回收... 详细信息

目的:对人过氧化物酶体增殖物激活受体δ(hPPARδ)全长cDNA序列进行克隆并测序,为构建含hPPAR δ基因真核表达载体及其受体功能研究奠定基础。方法:采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)从HepG2细胞总RNA克隆hPPARδ全长cDNA序列,胶回收目的条带后与pMD19-T载体连接并转化DH5α感受态菌,用BamHI、SalI双酶切及基因测序筛选、鉴定阳性克隆pMD19-hPPARδ-T载体中hPPARa基因的完整性和忠实性。结果:经酶切和测序证实pMD19-hPPARδ-T载体中插入的hPPARδ基因序列与GeneBank中提交的序列(AY919140)一致。结论:成功克隆了hPPARδ基因,构建了pMD19-hPPARδ-T中间载体,为含hPPARδ基因真核表达载体的构建和受体功能研究打下了良好的基础。

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体δ RT-PCR cDNA克隆 T载体测序

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重组质粒phPPARγ1-IRES2-EGFP高效体外转染表达体系的建立

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重庆医科大学学报 2007年第5期32卷 459-463页

作者：章涛万敬员杨俊卿刘颖菊周元国周岐新重庆医科大学基础医学院药理学教研室重庆400016 第三军医大学野战外科研究所分子生物学巾心重庆400042

目的:建立含人PPARγ1受体基因phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达体系。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARγ1-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及其转染... 详细信息

目的:建立含人PPARγ1受体基因phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达体系。方法:采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000将phPPARγ1-IRES2-EGFP转染入293细胞,荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白(GFP)报告基因表达强度及其转染效率,并对转染细胞hPPARγ1表达进行荧光定量PCR和Western Blot分析。结果:荧光显微镜下可见转染phPPARγ1-IRES2-EGFP质粒的293细胞GFP报告基因高表达,转染效率为(83±11)%;荧光定量PCR和Western Blot检测结果表明,转染细胞hPPARγ1表达水平高于空载体对照组3个数量级,说明导入的重组质粒能够高效表达hPPARγ1。结论:成功建立phPPARγ1-IRES2-EGFP重组质粒高效体外转染表达体系,为hPPARγ1受体功能研究和基于hPPARγ1为靶标的药物筛选平台建立打下了良好的基础。

关键词：过氧化物酶体增殖物激活受体γ1 转染效率真核表达 293细胞

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铝过负荷致小鼠脑神经元退变与脑铁代谢失衡的关系

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中国药理学与毒理学杂志 2006年第1期20卷 66-70页

作者：何百成滕永真杨俊卿蒋青松周岐新重庆医科大学药理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学研究所重庆400016

目的探讨铝致神经元退行性变是否与脑铁代谢失衡有关。方法每只鼠侧脑室内分别注射0．125％，0．25％和0．5％的Al溶液3μL（AlCl3·6H2O配制，以Al计算浓度），每日1次，连续5d（d1—d5），建立铝过负荷小鼠模型。于d10，d20和d30... 详细信息

目的探讨铝致神经元退行性变是否与脑铁代谢失衡有关。方法每只鼠侧脑室内分别注射0．125％，0．25％和0．5％的Al溶液3μL（AlCl3·6H2O配制，以Al计算浓度），每日1次，连续5d（d1—d5），建立铝过负荷小鼠模型。于d10，d20和d30用跳台法和水迷宫测定小鼠学习记忆能力、海马病理形态学改变、海马单胺氧化酶B（MAO—B）活性、海马线粒体铁蛋白水平和全脑铁水平。结果铝过负荷致小鼠学习记忆能力明显下降，海马CAl区神经元核固缩和神经细胞丢失，脑内铁水平明显升高，海马线粒体内铁蛋白水平明显降低、MAO—B活力显著升高．均呈剂量依赖性和时间依赖性改变。结论铝过负荷致神经元退变可能与其干扰脑铁代谢有关.

关键词：铝神经元退行性变铁代谢障碍铁蛋白学习记忆

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牛磺酸对STZ诱导大鼠胰岛细胞凋亡及BCL-xL和BAX表达变化的影响

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基础医学与临床 2006年第6期26卷 613-616页

作者：余华荣张能董毅龙周岐新重庆医科大学基础医学院生理教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院药理教研室重庆400016

目的观察牛磺酸（taurine）对链脲菌素（STZ）引起胰岛细胞凋亡及胰岛素分泌与BCL-xL和BAX蛋白表达变化的影响。方法用体外单层培养的方法，培养已存活3～5 d的Wistar乳鼠的胰岛细胞，在瑞氏染液染色后光镜下分别检测STZ使用前后胰岛... 详细信息

目的观察牛磺酸（taurine）对链脲菌素（STZ）引起胰岛细胞凋亡及胰岛素分泌与BCL-xL和BAX蛋白表达变化的影响。方法用体外单层培养的方法，培养已存活3～5 d的Wistar乳鼠的胰岛细胞，在瑞氏染液染色后光镜下分别检测STZ使用前后胰岛凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中NO2^-/NO3^-含量、NOS活性、胰岛素分泌以及BCL-xL和BAX的变化，并进一步观察牛磺酸对上述指标的影响。结果 STZ可诱导胰岛细胞凋亡率明显增加，从（4.0±0.7）%升至（40.5±5.7）%，使DNA明显片段化、胰岛素分泌明显降低、BCL-xL表达下降、BAX表达增强（P＜0.01）和NO2^-/NO3^-含量升高，但NOS活性变化不明显。牛磺酸能有效抑制STZ引起的上述指标（NO2^-/NO3^-含量除外）的变化，该效应具有一定的剂量依赖性。结论牛磺酸能够改善STZ诱导的胰岛细胞凋亡，其机制可能与下调BAX/BCL-xL比例有关，而与NO2^-/NO3^-含量及NOS活性关系不大。

关键词：链脲菌素 BCL-xL BAX 牛磺酸胰岛细胞

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牛磺酸抗细胞因子诱导的原代培养胰岛细胞凋亡与抗凋亡蛋白A20的变化

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 813-815页

作者：余华荣周琴董毅龙张能周岐新重庆医科大学基础医学院生理学教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学院药理学教研室重庆400016

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)和γ干扰素(IFNγ)引起的原代培养胰岛细胞凋亡与A20蛋白表达变化以及牛磺酸对其影响。方法用体外单层培养的方法,培养Wistar大鼠胰岛细胞,采用流式细胞仪、DNA电泳、放射免疫法及其R... 详细信息

目的探讨白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子(TNF)和γ干扰素(IFNγ)引起的原代培养胰岛细胞凋亡与A20蛋白表达变化以及牛磺酸对其影响。方法用体外单层培养的方法,培养Wistar大鼠胰岛细胞,采用流式细胞仪、DNA电泳、放射免疫法及其RTPCR等分别观察I-L1β、TNF和IFN-γ对胰岛细胞凋亡细胞百分率、DNA片段、培养液中胰岛素分泌以及A20蛋白表达的影响,并进一步观察牛磺酸的作用。结果流式细胞仪分析显示IL1β、TNF和IFN-γ联合可诱导胰岛细胞凋亡率增加(从3.5%增加到30.2%),DNA明显片段化,同时胰岛素分泌明显降低(P<0.01),而A20蛋白无表达;牛磺酸能阻断上述细胞因子的作用(P<0.01)。结论牛磺酸能够改善细胞因子诱导的原代培养胰岛细胞凋亡,其机制可能与促进A20蛋白表达有关。

关键词：白细胞介素-1β 细胞凋亡 A20 牛磺酸胰岛细胞

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当归多糖对小鼠外周血造血干细胞动员作用的研究

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中草药 2006年第12期37卷 1835-1838页

作者：胡晶吴宏重庆医科大学基础医学院组胚教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室重庆医科大学基础医学研究所重庆400016

目的探讨当归多糖(APS)对小鼠外周血造血干细胞的动员作用。方法采用外周血白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LC)计数、免疫细胞化学、流式细胞术、造血祖细胞体外培养等实验技术观察APS的动员作用。结果APS动员后小鼠外周血的WBC、LC数明显... 详细信息

目的探讨当归多糖(APS)对小鼠外周血造血干细胞的动员作用。方法采用外周血白细胞(WBC)计数、淋巴细胞(LC)计数、免疫细胞化学、流式细胞术、造血祖细胞体外培养等实验技术观察APS的动员作用。结果APS动员后小鼠外周血的WBC、LC数明显高于生理盐水(NS)组(P<0.05);APS动员后外周血中CD34+细胞百分率明显高于NS组(P<0.05);APS组CFU-Mix产率显著高于NS组(P<0.01);并且APS和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)联合动员后的各项指标均高于单用APS或单用rhG-CSF组。结论APS对小鼠外周血造血干细胞有一定的动员作用,并且APS和rhG-CSF联合动员的效果好于单用APS或单用rhG-CSF的动员效果。

关键词：当归多糖(APS) 外周血造血干细胞动员

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铝负荷致小鼠神经元退行性病变的实验研究

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工业卫生与职业病 2006年第3期32卷 153-157页

作者：何百成滕永珍杨俊卿周岐新重庆医科大学药理教研室重庆400016 重庆医科大学基础医学研究所重庆400016

目的研究铝负荷致小鼠神经元退行性病变的量-效和时-效关系及相关指标的变化。方法小鼠侧脑室内注射3μl AlCl3建立铝负荷致神经元退行性变模型。以跳台和水迷宫法评价学习记忆成绩;以常规HE染色观察海马病理变化;以等离子体原子发射光... 详细信息

目的研究铝负荷致小鼠神经元退行性病变的量-效和时-效关系及相关指标的变化。方法小鼠侧脑室内注射3μl AlCl3建立铝负荷致神经元退行性变模型。以跳台和水迷宫法评价学习记忆成绩;以常规HE染色观察海马病理变化;以等离子体原子发射光谱法测定脑内总铝与总锰水平;以海马胆碱酯酶(ChE)和单胺氧化酶B(MAOB)活力作为生化评价指标。结果与对照组相比,铝负荷组小鼠下台潜伏期和寻台时间分别呈剂量和时间依赖性明显缩短或延长;海马ChE和MAOB活力明显升高,脑总锰水平也明显升高;病理切片显示,铝负荷组小鼠海马CA1和CA3区出现神经元核固缩和神经元减少,且表现出与铝负荷剂量和时间依赖性相关的加重趋势。结论铝过负荷致小鼠出现明显神经元退行性病变和学习记忆能力障碍;这些变化至少可能与脑ChE和MAOB活力增强及脑内锰水平升高有关。

关键词：铝神经元退行性变锰实验

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