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中国细胞生物学学会2015年全国学术大会

作者：夏飞伍志盟李美玲邓莉郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的：构建人活性转录因子4(activating transcriptional facror4,ATF4)慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨成肌细胞C2C12中ATF4基因慢病毒修饰对BMP2诱导其成骨分化的作用.方法设计并合成人ATF4基因的上、下游引物,采用PCR... 详细信息

目的：构建人活性转录因子4(activating transcriptional facror4,ATF4)慢病毒载体并包装慢病毒颗粒(lentivirus),探讨成肌细胞C2C12中ATF4基因慢病毒修饰对BMP2诱导其成骨分化的作用.方法设计并合成人ATF4基因的上、下游引物,采用PCR方法从真核质粒pcDNA3.1(-)-ATF4中扩增目的基因.鉴定后与慢病毒载体pWPT-GFPV5进行重组,再将重组慢病毒载体pWPT-GFPATF4与慢病毒包装质粒pMD2G、pSPAX2共转入293T细胞中,进一步包装成ATF4慢病毒(Lv-ATF4);用病毒上清感染成肌细胞C2C12,观察绿色荧光蛋白(GFP)感染效率,并应用流式细胞仪(FCM)监测BMP2诱导成肌细胞C2C12细胞分化时对其增殖凋亡的影响,蛋白质印迹法监测凋亡相关基因Cleaved Caspase-3、Chop与p-JNK蛋白的表达,电镜观察细胞形态差异.

关键词： ATF4 慢病毒 C2C12 分化细胞增殖凋亡

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第三军医大学学报 2015年第13期37卷 1297-1301页

作者：刘树雷孙琳吴广延隋建峰曹文富重庆医科大学中医药学院中医药教研室重庆400016 解放军第324医院皮肤科重庆00020 第三军医大学基础医学部教学实验中心重庆400038

目的对腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry在大鼠内侧前额叶谷氨酸能神经元中表达的组织学及通道功能予以鉴定。方法以立体定位注射技术将腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry注射到SD雄性大鼠内侧前额叶,当病毒注射3~4周... 详细信息

目的对腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry在大鼠内侧前额叶谷氨酸能神经元中表达的组织学及通道功能予以鉴定。方法以立体定位注射技术将腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry注射到SD雄性大鼠内侧前额叶,当病毒注射3~4周后,采用免疫荧光组织化学技术检测标记蛋白（m Cherry）在谷氨酸能神经元（特异启动子Ca MKIIα）的表达情况;利用在体细胞外记录技术观测谷氨酸能神经元所表达的通道蛋白（ChR2）对不同光刺激频率的电生理反应特性。结果病毒成功注射到内侧前额叶并特异表达通道蛋白于谷氨酸能神经元的细胞膜上,表达成功率为（94.6±0.9）%;表达ChR2通道蛋白的谷氨酸能神经元对蓝光（470 nm,20 m W/mm2,5 ms波宽,5~80 Hz）产生稳定的光激活反应,并且对低频光刺激（5、10、20 Hz）的反应性优于高频光刺激（40 Hz和80 Hz;P〈0.001）。结论腺相关病毒AAV2/8-Ca MKIIα-ChR2-m Cherry能成功表达在谷氨酸能神经元的细胞膜上,对光刺激有频率选择性。

关键词：光遗传学腺相关病毒 ChR2

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椎-基底动脉走行迂曲与后循环缺血的相关性研究

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川北医学院学报 2015年第3期30卷 327-331页

作者：陈莉罗天友吕发金许仕全邓世山蔡昌平姚开情川北医学院基础医学院解剖教研室四川南充637000 重庆医科大学附属第一医院放射科重庆400016

目的:探讨椎-基底动脉迂曲及迂曲程度与后循环缺血(posterior circulation ischemia,PCI)之间的关系。方法:回顾性分析了205例行头颅容积CT数字减影血管成像(volume computed tomographic digital subtraction angiography,VCTDSA)检查的后循环缺血患者(PCI组)和108名无前后循环缺血临床表现的正常人。在VR图像上观察椎动脉颅内段和基底动脉是否有迂曲,并分别测量每个迂曲的角度。根据迂曲数量和迂曲角度对双侧椎动脉及基底动脉迂曲程度行迂曲评级。椎-基底动脉迂曲程度与PCI行相关性分析。结果:(1)对照组和PCI组的左右侧椎动脉颅内段及基底动脉迂曲的发生率均有显著性差异(χ2=66.860,P=0.000;χ2=43.457,P=0.000;χ2=19.203,P=0.000)。(2)PCI组,左右椎动脉及基底动脉迂曲程度≥Ⅲ级者显著高于对照组(χ2=91.115,P=0.000;χ2=86.620,P=0.000;χ2=43.371,P=0.000)。(3)椎动脉颅内段走行迂曲与PCI相关(r=0.49,P=0.000);椎动脉颅内段迂曲程度≥Ⅲ级与PCI中等强度相关(r=0.65,P=0.000)。基底动脉走行迂曲与PCI相关(r=0.25,P=0.000);基底动脉颅内段迂曲程度≥Ⅲ级与PCI相关(r=0.37,P=0.000)。结论:椎动脉颅内段和基底动脉走行迂曲可能引起PCI,尤其是当椎动脉迂曲程度达到Ⅲ级以上的情况。

关键词：后循环缺血椎动脉迂曲基底动脉迂曲基底动脉延长

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IFN-λ真核表达载体的建立及其表达产物的生物学功能评估

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军事医学 2015年第11期39卷 816-820页

作者：李竞齐义新房桂英李雅琪周慧敏刘文宣胡洁李全海河北医科大学基础医学院免疫学教研室石家庄050017 河北医科大学第一医院细胞治疗实验室石家庄050031 河北医科大学第四医院乳腺疾病治疗中心石家庄050011 河北医科大学第一医院妇产科石家庄050031 河北医科大学第一医院内分泌科石家庄050031 河北医科大学流行病与卫生统计学教研室石家庄050017 河北医科大学护理学院石家庄050017

目的构建IFN-λ真核表达体系,检测IFN-λ基因在真核细胞中的表达,评估真核细胞表达IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从poly I∶C刺激的Hu H-7细胞mRNA中克隆IFN-λ1/2基因全长,并进行DNA基因测序;构建pc DNA3-IFN-λ1/2质粒,酶... 详细信息

目的构建IFN-λ真核表达体系,检测IFN-λ基因在真核细胞中的表达,评估真核细胞表达IFN-λ的抗增殖和抗病毒生物学作用。方法从poly I∶C刺激的Hu H-7细胞mRNA中克隆IFN-λ1/2基因全长,并进行DNA基因测序;构建pc DNA3-IFN-λ1/2质粒,酶切鉴定,并将其转染COS-7细胞,应用Western印迹检测IFN-λ1/2在COS-7细胞中的表达。COS-7细胞表达的IFN-λ1/2作用于人食管癌YES5和***细胞株,CCK-8法检测癌细胞增殖,Western印迹检测凋亡蛋白caspase-3的活化,实时荧光定量PCR检测ISG15及Mx A抗病毒基因表达。结果经PCR、DNA测序和酶切鉴定,克隆的IFN-λ1/2基因与Gen Bank公布的序列一致,IFN-λ1/2基因序列正确构建入pc DNA3载体中;在pc DNA3-IFN-λ1/2转染的COS-7细胞中检测到IFN-λ1/2蛋白表达;其表达产物可诱导食管癌细胞增殖抑制、活化凋亡蛋白caspase-3,并且上调抗病毒ISG15及Mx A基因。结论建立了IFN-λ真核表达体系,即通过pc DNA3-IFN-λ1/2转染COS-7细胞实现了IFN-λ表达;经此体系表达的IFN-λ具有抗增殖、诱导凋亡及上调抗病毒基因表达的生物学作用;此体系的建立为IFN-λ的生物学功能研究和临床应用奠定了基础。

关键词： IFN-λ 真核表达抗增殖凋亡抗病毒

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布加综合征1例报道

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诊断病理学杂志 2015年第9期22卷 569-570页

作者：唐袁婷管小琴黄文祥四川大学华西第二医院检验科成都610041 重庆医科大学基础医学院病理教研室重庆400046 重庆医科大学附属第一医院感染科重庆400046

布加综合征（Budd-Chiari syndrome,BCS）亦称肝静脉流出道阻塞,是肝静脉和/或邻近下腔静脉部分或完全阻塞引起的以肝血液回流障碍为主要表现的综合征,重庆、四川发病率低[1]。BCS临床及影像学研究较多,肝穿刺报道较少。现报道1例以不... 详细信息

布加综合征（Budd-Chiari syndrome,BCS）亦称肝静脉流出道阻塞,是肝静脉和/或邻近下腔静脉部分或完全阻塞引起的以肝血液回流障碍为主要表现的综合征,重庆、四川发病率低[1]。BCS临床及影像学研究较多,肝穿刺报道较少。现报道1例以不明原因腹水为主要临床表现的BCS并行肝穿刺活检如下。1材料与方法患者女性,21岁。因腹痛、腹胀1天就诊。

关键词：布加综合征肝活检病理诊断

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HLA-DP基因多态性与丙型肝炎病毒感染转归的关系

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现代预防医学 2015年第11期42卷 2090-2093+2113页

作者：韦娟王佳佳王洁唐筛娣袁琛南京医科大学康达学院生物化学与分子生物学教研室南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计学系江南大学无锡医学院基础医学系扬州市妇幼保健院妇产科科

目的探讨人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigens,HLA）DP基因多态性与高危人群丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）感染转归的关系。方法采用病例对照研究设计,运用Taqman-MGB技术检测401例HCV持续感染者,268例HCV自限感染者和98... 详细信息

目的探讨人类白细胞抗原（Human Leukocyte Antigens,HLA）DP基因多态性与高危人群丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus,HCV）感染转归的关系。方法采用病例对照研究设计,运用Taqman-MGB技术检测401例HCV持续感染者,268例HCV自限感染者和984例健康对照者HLA-DP基因rs3077、rs9277535、rs2395309位点的基因多态性,比较不同基因型与HCV感染转归的关系。结果采用Logistic回归分析调整性别、年龄和高危人群种类混杂因素后结果显示,rs3077位点:杂合基因型CT和突变型TT在感染组（持续感染组+自限清除组）中的频率均显著高于对照组（调整OR值及其95%CI分别为1.31,1.05;.64和1.93,1.36;.73）;rs2395309位点:杂合基因型GA和突变型AA在感染组中的频率均显著高于对照组（调整OR值及其95%CI分别为1.29,1.03;.61和1.89,1.34;.68）;rs9277535位点:杂合基因型GA和突变型AA在持续性感染组中的频率均高于自限清除组（P=0.018,P=0.037）。结论rs3077、rs9277535、rs2395309三个位点的基因多态性可能与丙型肝炎转归有一定的关联。

关键词： HLA-DP 基因多态性丙型肝炎病毒

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siPERK对BMP2介导软骨细胞分化中增殖凋亡的影响

siPERK对BMP2介导软骨细胞分化中增殖凋亡的影响

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中国细胞生物学学会2015年全国学术大会

作者：李美玲夏飞邓莉伍志盟郭风劲重庆医科大学基础医学院细胞生物学及遗传学教研室发育生物学教研室重庆400016

目的：探讨靶向蛋白激酶样内质网激酶(protein kinase like endoplasmic reticulum kinase,PERK]基因的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒在骨形态发生蛋白2(Bone Morphogenetic Protein 2,BMP2)介导的软骨细胞分化过... 详细信息

关键词： PERK 腺病毒科软骨细胞分化细胞增殖细胞凋亡

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多重荧光定量PCR技术在唐氏综合征筛查中的应用

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第三军医大学学报 2015年第4期37卷 375-377页

作者：张丹妍官燮苏燕杨玉有赵乐天李练兵杨柳国家卫生计生委出生缺陷与生殖健康重点实验室重庆市人口和计划生育科学技术研究院重庆400020 第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 重庆医科大学公共卫生学院生殖生物学教研室重庆400016

目的探讨多重荧光定量PCR技术在唐氏综合征筛查中的应用。方法针对21号染色体上的D21S1409、GATA163G03、D21S1422、D21S1435基因座设计荧光引物,通过复合扩增,利用ABI3130遗传分析仪检测212个正常个体样本、6个唐氏综合征患儿家庭样本... 详细信息

目的探讨多重荧光定量PCR技术在唐氏综合征筛查中的应用。方法针对21号染色体上的D21S1409、GATA163G03、D21S1422、D21S1435基因座设计荧光引物,通过复合扩增,利用ABI3130遗传分析仪检测212个正常个体样本、6个唐氏综合征患儿家庭样本,并比较患儿家庭样本的外周血染色体核型结果,评价该技术的准确性。结果选取的4个STR基因座的杂合度(H>0.64)、识别能力(DP>0.802)和信息量(PIC>0.58)均较高。检测的6个疑似唐氏综合征患儿家庭样本结果与染色体核型提示结果一致。结论多重荧光定量PCR技术具有较高的敏感性和特异性,可用于唐氏综合征的高通量快速筛查。

关键词：多重荧光定量PCR 唐氏综合征短串联重复序列 D21S1409 GATA163G03 D21S1422 D21S1435

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经介入治疗和手术修补房间隔缺损有效性和安全性的系统评价

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重庆医科大学学报 2014年第10期39卷 1437-1442页

作者：万素馨罗亚玲周天津重庆医科大学基础医学院数学教研室重庆400016

目的：采用系统评价方法评估国内经手术修补和介入治疗房间隔缺损（atrial septal defect,ASD）的有效性和安全性,为临床治疗提供一定参考。方法：制定检索策略,对中国生物医学数据库、中国知网、万方、维普等数据库进行检索,全面检索... 详细信息

目的：采用系统评价方法评估国内经手术修补和介入治疗房间隔缺损（atrial septal defect,ASD）的有效性和安全性,为临床治疗提供一定参考。方法：制定检索策略,对中国生物医学数据库、中国知网、万方、维普等数据库进行检索,全面检索关于房间隔缺损经介入治疗和手术修补对照研究的临床试验,并对文献进行筛选、资料提取和质量评价。采用Rev Man5.2软件进行数据处理。结果：13篇文献纳入Meta分析,均为非随机对照试验,介入组984例,治疗组890例。结果显示,介入组的成功率低于手术组（13项对照研究,96.65%vs.99.66%,RR=0.97,95%CI=0.96～0.98,P=0.000）,术后并发症发生率低于手术组（12项对照研究,6.07%vs.20.26%,RR=0.29,95%CI=0.22～0.39,P=0.000）,术后残余分流发生率高于手术组（10项对照研究,2.31%vs.1.70%,RR=1.45,95%CI=0.75～2.82,P=0.270）。结论：介入治疗的术后并发症低于手术组,具有创伤小、安全性高、术后恢复快等优点,在适应证范围内,介入治疗可作为外科手术治疗的替代疗法。

关键词：房间隔缺损介入治疗手术修补 Meta分析

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分离、鉴定CD133^+人肝癌干细胞以及^(131)I-CD133mAb对其生物学效应的影响

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 222-227页

作者：侯妍利唐敏陈兴月段丽群康强强舒锦李少林重庆医科大学基础医学院放射医学教研室重庆400016

目的分离、鉴定CD133+人肝癌干细胞以及131I-CD133mAb对其生物学效应的影响。方法为选择最适的细胞系,流式细胞仪检测Huh-7和HepG2细胞中CD133表达率;磁珠分选Huh-7细胞,流式细胞仪检测分选后CD133表达率;体外成球、克隆形成实验及体内... 详细信息

目的分离、鉴定CD133+人肝癌干细胞以及131I-CD133mAb对其生物学效应的影响。方法为选择最适的细胞系,流式细胞仪检测Huh-7和HepG2细胞中CD133表达率;磁珠分选Huh-7细胞,流式细胞仪检测分选后CD133表达率;体外成球、克隆形成实验及体内成瘤实验验证干细胞特性;氯胺T法制备131I标记CD133单克隆抗体(131ICD133mAb)并鉴定;取分选后的CD133+-Huh-7细胞、Huh-7细胞和HepG2细胞进行实验,将每种细胞分成4组(131ICD133mAb组、131I组、CD133mAb组、131I+CD133mAb组);MTT法检测各组对CD133+-Huh-7细胞生长抑制的最适剂量和各组在最适剂量作用后24、48、72 h对3组细胞生长抑制率;流式细胞仪检测131I-CD133mAb作用3组细胞72 h时细胞凋亡和细胞周期的变化。结果 Huh-7和HepG2细胞系CD133表达率分别为18.8%和5.2%,故选用Huh-7细胞进行分选;磁珠分选后CD133+-Huh-7细胞CD133的表达率为99.28%,与分选前比较差异有统计学意义(P<0.01)。CD133+-Huh-7细胞相对于CD133--Huh-7细胞具有更强的体外成球能力、克隆形成能力和体内成瘤能力。131I-CD133mAb标记率为87.92%,放射化学纯度为97.54%,具有较好的稳定性和免疫活性。当131I 4.8 MBq/100μL、CD133mAb 4.8μg/100μL时对CD133+-Huh-7细胞抑制率最高(P<0.05),取此放射性浓度进行实验。24、48、72 h时各组对CD133+-Huh-7细胞的抑制作用明显高于Huh-7和HepG2细胞组,131I-CD133mAb组对3种细胞生长抑制率明显高于其余各组,抑制率随时间的增加而升高(P<0.01)。131I-CD133mAb作用CD133+-Huh-7细胞72 h后凋亡率为31.21%,明显高于其余2组(P<0.05)。细胞周期检测结果显示CD133+-Huh-7细胞G0/G1期减少54.77%,明显高于其余2组(P<0.05)。结论 CD133+细胞具有肿瘤干细胞特性,131I-CD133mAb能特异性结合CD133+-Huh-7细胞,调控细胞周期和诱导细胞凋亡。

关键词： CD133 肝癌干细胞 ^131I 单克隆抗体

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