检索结果-内蒙古大学图书馆

世界华人消化杂志 2008年第1期16卷 20-24页

作者：李甲初左渝平刘洋曾昭淳重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市生物化学与分子药理重点实验室重庆市400016

目的:探讨Dkkl cDNA抗结肠癌的机制.方法:利用脂质体介导pcDNA3.1(+)Dkk1进行瞬时转染结肠癌细胞CT26和表达Dkk1的肝癌细胞HEPA1-6,转染后的细胞为实验组,转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞和未转染的细胞分别为空载体组和未转染组,用MTT法检... 详细信息

目的:探讨Dkkl cDNA抗结肠癌的机制.方法:利用脂质体介导pcDNA3.1(+)Dkk1进行瞬时转染结肠癌细胞CT26和表达Dkk1的肝癌细胞HEPA1-6,转染后的细胞为实验组,转染空载体pcDNA3.1(+)的细胞和未转染的细胞分别为空载体组和未转染组,用MTT法检测CT26增殖、免疫印迹法检测细胞Dkk1,p53,Bcl-2和Bax的表达量.结果:MTT实验显示在570 nm的吸光度均值CT26实验组明显低于其空载体组和未转染组(0.779±0.025 vs 0.968±0.016,0.973±0.016),P<0.05);与CT26空载体组和未转染组相比,实验组p53,Bcl-2的表达量降低、而Dkk1、Bax表达增高.结论:外源Dkk1可反馈抑制突变型p53的生成,下调Bcl-2,增加Bax因子表达而抑制结肠癌的增殖.

关键词： Dickkopf-1 p53 结肠癌免疫印迹法

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MCHR2在CHO细胞中的稳定表达及其信号通路分析

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中国药理学通报 2008年第3期24卷 294-299页

作者：杨俊霞袁成福石华魏丽丽陈济易发平马永平宋方洲重庆医科大学药理学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室重庆400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定... 详细信息

目的构建人MCHR2基因真核表达载体,在CHO细胞中进行稳定表达,并分析MCHR2介导的信号转导通路。方法采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,定向插入到真核表达载体pcDNA3·1(+),经酶切和测序鉴定后,脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418选择培养,建立稳定转染细胞系,经RT-PCR和Western blot鉴定后,通过测定细胞内cAMP、Ca2+浓度的改变分析MCHR2的信号转导通路。结果成功构建了pcDNA3·1-MCHR2真核表达载体并稳定转入CHO细胞,建立了稳定转染细胞系,成功地表达目的基因,MCH作用于MCHR2后不影响细胞内cAMP生成,可促使细胞内钙库释放Ca2+,进而使胞内Ca2+浓度出现明显而短暂的升高,提示MCHR2的信号转导通路主要是与Gq蛋白偶联。结论人MCHR2的稳定表达和信号转导通路分析为进一步体外研究MCHR2的功能提供了良好的实验基础。

关键词： MCHR2 真核表达载体稳定转染基因表达信号转导

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人宫颈癌Ca Ski细胞IL-24基因的克隆鉴定与真核表达

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第四军医大学学报 2007年第5期28卷 469-471页

作者：石华成海恩易发平杨俊霞张溢马永平宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室临床检验诊断学教育部重点实验室重庆医科大学基础医学研究所重庆400016

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Wester... 详细信息

目的:克隆人IL-24基因并构建真核表达载体,转染Ca Ski细胞进行真核表达.方法:利用RT-PCR技术扩增出Ca Ski细胞中的IL-24基因.将IL-24基因克隆入pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24.将重组质粒转染入CaSki细胞,利用Western blot检测hIL-24的表达.结果:PCR及测序结果均证实成功克隆了人IL-24基因,构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)-hIL-24,该质粒被转染入Ca Ski细胞中能表达出hIL-24蛋白.结论:成功构建了hIL-24基因的真核表达载体.

关键词：白细胞介素24 克隆真核表达 Ca Ski细胞

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HPV-16E6基因沉默对宫颈癌CaSki细胞的影响

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第四军医大学学报 2006年第20期27卷 1888-1891页

作者：成海恩张溢张翠莉潘巍巍石华何柳兴易发平宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室公共卫生学院生殖医学教研室重庆400016 重庆医科大学重庆市生物化学与分子药理学重点实验室重庆医科大学教育部临床检验诊断学重点实验室

目的:研究特异性抑制HPVE6基因的表达对宫颈癌CaSki细胞的影响.方法:构建表达HPV-16E6基因siRNA重组质粒,体外转染CaSki细胞后检测E6mRNA表达变化及E6主要作用靶分子P53的蛋白变化;流式细胞术分析细胞周期.结果:特异RNAi表达质粒转染Ca... 详细信息

目的:研究特异性抑制HPVE6基因的表达对宫颈癌CaSki细胞的影响.方法:构建表达HPV-16E6基因siRNA重组质粒,体外转染CaSki细胞后检测E6mRNA表达变化及E6主要作用靶分子P53的蛋白变化;流式细胞术分析细胞周期.结果:特异RNAi表达质粒转染CaSki细胞后明显降低了E6mRNA水平,且P53蛋白水平增高.流式细胞仪测定发现细胞停滞在G0-G1期,细胞增殖受到抑制.结论:采用RNA干扰技术能沉默CaSki细胞中整合的HPV-16E6基因的表达,使细胞中抑癌蛋白P53水平增高,导致肿瘤细胞生长停滞.

关键词： RNA干扰宫颈肿瘤乳头状瘤病毒,人 E6基因

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ALB启动子基因报告质粒的构建及VEGF对肝前体细胞诱导分化作用的初步研究

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第四军医大学学报 2009年第20期30卷 2061-2064页

作者：黄佳祎毕杨郭丹赵迎泽冯涛重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部实验室重庆市市级重点实验室重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆医科大学第二附属医院普外科重庆400016

目的:构建白蛋白(ALB)启动子调控的荧光素酶报告质粒,以方便检测ALB的表达.并用该方法初步检测血管内皮生长因子(VEGF)对肝前体细胞分化诱导的影响.方法:PCR扩增ALB的启动子及增强子片段,插入pBGLuc载体,构建pBGLuc-ALB荧光素酶报告质粒... 详细信息

目的:构建白蛋白(ALB)启动子调控的荧光素酶报告质粒,以方便检测ALB的表达.并用该方法初步检测血管内皮生长因子(VEGF)对肝前体细胞分化诱导的影响.方法:PCR扩增ALB的启动子及增强子片段,插入pBGLuc载体,构建pBGLuc-ALB荧光素酶报告质粒,并经经酶切、测序及荧光素酶活性检测验证.包装成逆转录病毒感染肝前体细胞株E14.5d,构建稳定细胞株E14.5-ALB-LUC.以重组腺病毒载体Ad-VEGF感染E14.5-ALB-LUC细胞株,通过荧光素酶活性检测观察其分化程度,并用RT-PCR、PAS染色验证其结果.结果:构建pBGLuc-ALB重组质粒,经酶切、测序及荧光素酶活性检测证实其正确效性.建立稳定细胞株***-VEGF感染后,与对照组相比,荧光素酶的表达明显升高.RT-PCR证实肝前体细胞分化早期指标DLK,CK19降低,晚期指标ALB升高.PAS染色可见阳性细胞明显增加.结论:成功构建pBGLuc-ALB荧光素酶报告质粒,为进一步研究肝前体细胞分化打下基础,并在此基础上发现VEGF能诱导肝前体细胞分化为类肝细胞.

关键词：荧光素酶报告基因白蛋白肝前体细胞血管内皮生长因子

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诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的实验研究

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重庆医学 2009年第10期38卷 1185-1187,I0001,I0002页

作者：陈小菊王嫣王兰左国伟寇小琴谭启华周兰冯涛重庆医科大学护理学院 400016 重庆市超声医学工程重点实验室 400016 英国剑桥大学生物工程学研究所重庆医科大学检验系 400016 重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室 400016

目的明确大鼠骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)在体外全骨髓培养条件下的生物学特性及其向成骨细胞分化的能力,探索更为简便有效的BMSCs体外培养方法。方法提取大鼠原代BMSCs,用αMEM完全培养基和成骨诱导条件培... 详细信息

目的明确大鼠骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)在体外全骨髓培养条件下的生物学特性及其向成骨细胞分化的能力,探索更为简便有效的BMSCs体外培养方法。方法提取大鼠原代BMSCs,用αMEM完全培养基和成骨诱导条件培养基体外培养,倒置相差显微镜和HE染色观察细胞形态;台盼蓝活细胞计数绘制细胞生长曲线;ALP检测试剂盒检测ALP含量变化和von Kossa染色检测细胞矿化结节,以判断细胞是否向成骨细胞分化。结果全骨髓培养法在体外培养的大鼠原代BMSCs贴壁生长,呈梭形或多角形;使用Dex-SaMEM向成骨诱导后的BMSCs具有与成骨细胞在体外培养时相似的特征,倍增时间延长;合成ALP能力显著增强(P<0.05),von Kossa染色出现阳性的棕褐色或棕黑色团块的钙化结节。结论全骨髓培养法取材方便,经成骨诱导培养的BMSCs表现出成骨细胞的形态特征和生物学特性,该方法可作为骨组织工程种子细胞培养的常规方法。

关键词：骨髓间充质干细胞成骨诱导组织工程

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黑色素浓集激素及其受体与肥胖的相关关系

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国际内分泌代谢杂志 2006年第B4期26卷 38-41页

作者：杨俊霞宋方洲重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市生物化学与分子药理学重点实验室 400016

黑色素浓集激素(MCH)是一种含19个氨基酸的神经肽,由下丘脑外侧区释放,其神经纤维广泛分布于大脑各个区域,在摄食行为、能量平衡及体重的调节中起重要作用,并与肥胖的发生、发展密切相关。近年来研究发现,MCH受体有2个亚型,即MCH-1R和MC... 详细信息

黑色素浓集激素(MCH)是一种含19个氨基酸的神经肽,由下丘脑外侧区释放,其神经纤维广泛分布于大脑各个区域,在摄食行为、能量平衡及体重的调节中起重要作用,并与肥胖的发生、发展密切相关。近年来研究发现,MCH受体有2个亚型,即MCH-1R和MCH-2R,均属于G蛋白偶联受体家族,可激活多个第二信使通路。对MCH及其受体与肥胖关系的研究可能为控制肥胖提供新的治疗策略。

关键词：黑色素浓集激素黑色素浓集激素受体肥胖

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双歧杆菌在家兔实验性肝坏死模型中的靶向增殖研究

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中国微生态学杂志 2005年第6期17卷 408-410页

作者：马永平刘革力钟贞宋方洲邱宗荫重庆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室暨重庆市生化与分子药理学重点实验室重庆400016

目的探讨双歧杆菌在海扶超声聚焦刀(H IFU)制作的肝凝固性坏死模型中的靶向性增殖的可能性。方法用H IFU制作成家兔肝凝固性坏死模型,经耳缘静脉注射两歧双歧杆菌活菌,通过检测注射前后家兔体温、红细胞、白细胞和血小板等生理指标的变... 详细信息

目的探讨双歧杆菌在海扶超声聚焦刀(H IFU)制作的肝凝固性坏死模型中的靶向性增殖的可能性。方法用H IFU制作成家兔肝凝固性坏死模型,经耳缘静脉注射两歧双歧杆菌活菌,通过检测注射前后家兔体温、红细胞、白细胞和血小板等生理指标的变化和注射后主要器官的组织切片来评价双歧杆菌作为基因治疗载体系统的安全性,同时对肝坏死模型等组织切片还做了革兰染色检测,证明了双歧杆菌在坏死组织中的增殖。结果双歧杆菌能够在H IFU制作的肝凝固性坏死模型中增殖、而这一增殖过程并不影响家兔的生命安全。结论双歧杆菌作为肿瘤基因治疗的靶向载体系统是安全和可行的,H IFU制作的肝坏死模型可以用于双歧杆菌基因治疗的靶向载体系统的辅助研究。

关键词：两歧双歧杆菌基因治疗载体超声聚焦刀动物模型

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OLFM4^(GW112/hGC-1)、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达分析

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胃肠病学和肝病学杂志 2007年第5期16卷 481-484页

作者：黄轶曾昭淳左渝萍张玥重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室重庆市生化与分子药理重点实验室重庆400016 中国人民解放军白求恩军医学院临床医学系

目的检测OLFM4GW112/hGC-1、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达,并探讨与肿瘤细胞凋亡与周期的关系。方法利用RT-PCR半定量的方法检测GW112、GRIM19与PIN1三种基因在人12种肿瘤细胞株中转录水平。结果RT-PCR结果显示:12种人... 详细信息

目的检测OLFM4GW112/hGC-1、GRIM19及PIN1基因在12种人肿瘤细胞株中的表达,并探讨与肿瘤细胞凋亡与周期的关系。方法利用RT-PCR半定量的方法检测GW112、GRIM19与PIN1三种基因在人12种肿瘤细胞株中转录水平。结果RT-PCR结果显示:12种人肿瘤细胞株中GW112、GRIM19与PIN1三种基因均有表达,未出现转录缺失。其中胃癌细胞SGC-7901与脑胶质瘤细胞CHG-5中的GW112表达明显强于GRIM19,而在其余十种细胞株中GW112表达却明显低于GRIM19。实验组细胞中,PIN1基因只在SGC-7901株与CHG-5株中表达较弱,其余表达均较强。结论GW112、GRIM19与PIN1在这些肿瘤细胞中的表达状况很可能与它们的周期调控和细胞凋亡有关,对三种基因的表达研究可进一步对分析三种基因的功能提供依据。

关键词： OLFM4 GRIM19 PIN1 肿瘤细胞株基因表达 RT-PCR

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藻酸钙影响骨髓间充质干细胞增殖活性的实验研究

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检验医学与临床 2009年第10期6卷 743-745页

作者：陈小菊王嫣王兰左国伟寇小琴谭启华周兰冯涛重庆医科大学护理学院 400016 重庆市超声医学工程重点实验室英国剑桥大学生物工程学研究所重庆医科大学检验系重庆医科大学生物化学与分子生物学教研室

目的研究藻酸钙凝胶对骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)增殖活性的影响,为藻酸盐作为BMSCs在骨组织工程中的载体提供实验依据。方法将BMSCs种植在藻酸钙凝胶上,通过倒置相差显微镜和甲苯胺蓝染色观察细胞形态;四... 详细信息

目的研究藻酸钙凝胶对骨髓间充质干细胞(bone mensenchymal stem cells,BMSCs)增殖活性的影响,为藻酸盐作为BMSCs在骨组织工程中的载体提供实验依据。方法将BMSCs种植在藻酸钙凝胶上,通过倒置相差显微镜和甲苯胺蓝染色观察细胞形态;四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测细胞在藻酸盐凝胶上的增殖活性。结果MTT检测发现在培养板上和在藻酸盐凝胶上用SαMEM培养的两组BMSCs之间细胞的增殖活性差异无统计学意义(P>0.05);与之相似,在培养板上和在凝胶上用Dex-SαMEM诱导培养的两组BMSCs之间的增殖活性也无显著差异。结论BMSCs在藻酸钙凝胶中的增殖活性不受影响,是良好的骨组织工程支架材料。

关键词：骨髓间充质干细胞海藻胶增殖活性组织工程

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