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中国组织工程研究 2012年第32期16卷 6025-6031页

作者：汪维伟徐艳华姜蓉段征陈晓云重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织胚胎学教研室重庆市400016

背景:近年已有干细胞移植修复慢性肠炎受损组织的报道,但其治疗机制尚不明确。目的:观察移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布及分化情况,及对大鼠结肠黏膜的修复作用。方法:取经鉴定的第3代大鼠骨髓间充质干细胞1×10... 详细信息

背景:近年已有干细胞移植修复慢性肠炎受损组织的报道,但其治疗机制尚不明确。目的:观察移植骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎大鼠结肠的分布及分化情况,及对大鼠结肠黏膜的修复作用。方法:取经鉴定的第3代大鼠骨髓间充质干细胞1×106个,应用Hoechst 33342进行荧光标记,并将其经尾静脉移植入溃疡性结肠炎大鼠体内,分别于移植后3,7,14d取材。结果与结论:骨髓间充质干细胞移植后3d,大鼠结肠即可见荧光标记的细胞,移植后14d,大鼠结肠荧光标记细胞仍较多,此时可见部分标记细胞表达细胞角蛋白。同时骨髓间充质干细胞移植后14d,溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜白细胞介素10表达增高,肿瘤坏死因子α表达降低,结肠黏膜的病理损伤明显好转。说明移植的骨髓间充质干细胞可迁移至结肠溃疡部位并分化为上皮细胞,同时可通过调节炎性因子的表达促进溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜损伤的修复。

关键词：骨髓间充质干细胞移植溃疡性结肠炎细胞角蛋白肿瘤坏死因子α 白细胞介素10

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IFT20蛋白在不同肿瘤组织中表达的研究

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中国肿瘤临床 2012年第12期29卷 841-843页

作者：姜容刘贵勇陈鹏汪长东重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆市400016 重庆市巴南区人民医院手足外科广西大学农学院重庆医科大学医学分子与肿瘤研究中心生物化学与分子生物学教研室

目的:探讨IFT20(Intraflagellar Transport,IFT)蛋白在人卵巢癌、肺癌、胰腺癌、小肠癌、前列腺癌、骨癌、胃癌和乳腺癌癌组织和癌旁组织的表达分布情况,为人类肿瘤的诊断和治疗寻找新的靶点。方法:采用免疫组织化学方法,研究IFT20蛋白... 详细信息

目的:探讨IFT20(Intraflagellar Transport,IFT)蛋白在人卵巢癌、肺癌、胰腺癌、小肠癌、前列腺癌、骨癌、胃癌和乳腺癌癌组织和癌旁组织的表达分布情况,为人类肿瘤的诊断和治疗寻找新的靶点。方法:采用免疫组织化学方法,研究IFT20蛋白在人的八种癌组织和癌旁组织的表达。结果:结果发现,IFT20蛋白在卵巢癌组织中大量表达,在卵巢癌癌旁组织低量表达。IFT20蛋白在小肠癌,胃癌和乳腺癌组织中中量表达,在小肠癌,胃癌和乳腺癌癌旁组织中低量表达。IFT20蛋白在胰腺癌,骨癌,肺癌癌组织中低量表达,在胰腺癌、骨癌、肺癌癌旁组织中几乎不表达。IFT20蛋白在前列腺癌组织和癌旁组织中均未见表达。结论:实验结果证实,IFT20蛋白可能经过多种途径直接或间接调节卵巢癌、肺癌、胰腺癌、小肠癌、骨癌、胃癌和乳腺癌的发生,发展过程,并且IFT20可能是卵巢癌、肺癌、胰腺癌、小肠癌、骨癌、胃癌和乳腺癌肿瘤药物治疗的潜在靶点。

关键词：细胞原纤毛免疫组织化学 IFT20 肿瘤

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MDA-MB-231源Exosomes对内皮细胞增殖及MAPK/ERK和P13K/Akt信号通路的影响

MDA-MB-231源Exosomes对内皮细胞增殖及MAPK/ERK和P13K/Akt信号通...

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中国病理生理学会第十三届肿瘤、第十四届免疫专业委员会学术会议

作者：隆霜沈宜谢莹珊范维珂姜蓉陈黎重庆医科大学基础医学院病理生理教研室干细胞与组织工程研究室

目的:研究人乳腺癌MDA-MB-23 1细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞HUVECs的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Ak信号转导通路在此过程中的作用。方法:低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes;采用MTT法分... 详细信息

目的:研究人乳腺癌MDA-MB-23 1细胞源Exosomes对人脐静脉内皮细胞HUVECs的促增殖作用,并初步探讨MAPK/ERK和PI3K/Ak信号转导通路在此过程中的作用。方法:低温超速离心及密度梯度离心法提取乳腺癌MDA-MB-231细胞源Exosomes;采用MTT法分别检测50、100、200、400μg/mL Exosomes对HUVECs细胞促增殖作用的影响;采用流式细胞仪测定200μg/mL Exosomes对HUVECs细胞周期的影响;采用Western blot技术检测200μg/mL Exosomes对HUVECs细胞ERK和Akt蛋白的表达水平。结果:乳腺癌MDA-MB-23 1细胞源Exosomes以时间和剂量依赖性的方式促进HUVECs细胞的增殖。细胞周期结果显示200μg/mL Exosomes作用HUVECs细胞24 h后,S期细胞比例增加,G1/S期细胞比例下降。Western blot实验显示,200μg/mL Exosomes分别作用HUVECs细胞24h、48 h、72 h后,磷酸化ERK与Akt蛋白的表达逐渐增加。结论:乳腺癌MDAMB-231细胞源Exosomes能促进人脐静脉内皮细胞HUVECs的增殖,其机制可能与细胞周期改变和MAPK/ERK和P13K/Akt信号通路的持续活化有关。

关键词： Exosomes 胞外信号调节激酶蛋白激酶B 增殖乳腺癌

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靶向IRE1a干扰质粒构建及对ERS时细胞增殖及凋亡的影响

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医学分子生物学杂志 2012年第2期9卷 103-109页

作者：姜蓉刘艳娜周菁华刘平郭风劲重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆市400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆市400016 重庆医科大学发育生物学与模式动物平台重庆市400016

目的构建靶向人IRE1a的shRNA干扰质粒（pSUPER-IRE1a）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并合成靶向IRE1a基因的两条shRNA，分别克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒pS1、pS2，依次转染入HeLa细胞和HepG2细... 详细信息

目的构建靶向人IRE1a的shRNA干扰质粒（pSUPER-IRE1a）并观察其对人HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。方法设计并合成靶向IRE1a基因的两条shRNA，分别克隆至真核表达载体pSUPER构建重组质粒pS1、pS2，依次转染入HeLa细胞和HepG2细胞中。采用RT—PCR检测pS1、pS2转染前后IRE1a在HeLa细胞和HepG2细胞中的mRNA水平，免疫印迹检测pS1、pS2转染前后IRE1a蛋白的表达；MTT比色法、BrdU／DAPI双免疫荧光法及流式细胞仪分别检测各重组质粒对HeLa细胞和HepG2细胞增殖及凋亡的影响。结果干扰质粒（pSUPER-IRE1a）能有效抑制HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a基因的表达；成功转染后，细胞处于内质网应激（ER stress）状态时，各实验组细胞增殖率及凋亡率与对照组比较，差异均具有统计学意义P〈0．05）。结论成功构建靶向人IRE1a的shRNA真核表达载体pS1、pS2，有效抑制了HeLa细胞和HepG2细胞中IRE1a的表达；细胞处于ERS状态时，IRE1a-shRNA有效促进HeLa、HepG2两种肿瘤细胞的增殖；抑制HeLa和HepG2细胞的凋亡。

关键词： IRE1a shRNA 细胞增殖细胞凋亡

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人参皂苷Rg1延缓造血干细胞衰老过程中端粒长度和端粒酶活性的变化

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中国中药杂志 2011年第22期36卷 3172-3175页

作者：周玥姜蓉杨斌姚欣王萍刘典锋王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的:探讨端粒长度和端粒酶活性在人参皂苷Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老中的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC后分5组:对照组,衰老模型组,Rg1组,Rg1治疗衰老组,Rg1延缓衰老组。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、流... 详细信息

目的:探讨端粒长度和端粒酶活性在人参皂苷Rg1延缓造血干细胞(HSC)衰老中的作用。方法:免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC后分5组:对照组,衰老模型组,Rg1组,Rg1治疗衰老组,Rg1延缓衰老组。衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、流式细胞术细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养分析Rg1调控Sca-1+HSC衰老的生物学作用;Southern blotting与TRAP-PCR SYBR Green法检测端粒长度和端粒酶活性。结果:与衰老模型组相比,Rg1治疗组和Rg1延缓衰老组Sca-1+HSC的SA-β-Gal染色阳性细胞百分比降低,G1期细胞比例下降,生成CFU-Mix数相对增加,端粒长度缩短明显减少,端粒酶活性增强;Rg1延缓衰老组各检测指标变化均较Rg1治疗组明显。结论:Rg1可能通过激活端粒酶活性和减少端粒长度缩短发挥延缓和治疗Sca-1+HSC衰老的作用。

关键词：人参皂苷Rg1 造血干细胞衰老端粒端粒酶

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骨髓间充质干细胞移植对大鼠溃疡性结肠炎的治疗作用

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中国生物制品学杂志 2011年第9期24卷 1033-1037页

作者：徐艳华李敏刘俊姜蓉汪维伟重庆医科大学组织学与胚胎学教研室重庆医科大学干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的观察骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植对大鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)的治疗作用。方法分离、培养、鉴定大鼠MSCs,并以DAPI标记第3代MSCs。将大鼠随机分为3组,A、B组采用免疫复合法诱导UC模型,C组为... 详细信息

目的观察骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)移植对大鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)的治疗作用。方法分离、培养、鉴定大鼠MSCs,并以DAPI标记第3代MSCs。将大鼠随机分为3组,A、B组采用免疫复合法诱导UC模型,C组为正常对照组。A组移植标记的MSCs,B组移植PBS。移植后3、7、14 d各组均处死大鼠5只,取结肠组织,光镜观察病理变化,荧光显微镜观察标记细胞的分布,激光共聚焦显微镜观察标记细胞细胞角蛋白(Cytokeratin,CK)的表达。结果 MSCs生长迅速,呈均一的成纤维样细胞,表达CD29和CD90,不表达CD45。移植后7、14 d,A组结肠的修复明显优于B组;移植后3 d,A组结肠即可见移植细胞,至14 d时最多(P<0.05);移植后7、14 d,A组少量移植细胞表达CK。结论 MSCs移植可促进UC大鼠损伤结肠的修复;部分MSCs可分化为结肠上皮细胞,参与损伤的修复。

关键词：间质干细胞移植结肠炎,溃疡性细胞分化修复

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赫赛汀对乳腺癌SK-BR3细胞Notch-1信号通路的影响及意义

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中国肿瘤临床 2011年第11期38卷 626-629页

作者：韩铭邓华瑜隆玲姜蓉重庆医科大学病理生理教研室干细胞与组织工程研究室重庆市400016

目的:探讨赫赛汀对乳腺癌SK-BR3细胞Notch-1蛋白的影响及其作用机制,认识Notch-1信号通路在乳腺癌细胞形成赫赛汀耐药中的意义。方法:选用HER-2过表达乳腺癌SK-BR3细胞及HER-2非过表达乳腺癌MDA-MB-231细胞,免疫细胞化学法和Western blo... 详细信息

目的:探讨赫赛汀对乳腺癌SK-BR3细胞Notch-1蛋白的影响及其作用机制,认识Notch-1信号通路在乳腺癌细胞形成赫赛汀耐药中的意义。方法:选用HER-2过表达乳腺癌SK-BR3细胞及HER-2非过表达乳腺癌MDA-MB-231细胞,免疫细胞化学法和Western blot法检测两细胞株中Notch-1蛋白的表达;应用赫赛汀处理SK-BR3细胞,Western blot法检测HER-2、Notch-1通路活性分子Notch-1^(IC)的蛋白表达;RT-PCR法检测Notch-1靶基因HES-1 mRNA的表达;免疫共沉淀法检测SK-BR3细胞中Nolch-1与HER-2是否存在相互作用结果:Notch-1^(IC)核定位水平及Notch-1^(IC)蛋白表达水平在HER-2过表达乳腺癌细胞(9.37±0.64)中明显低于HER-2非过表达乳腺癌细胞(21.665±1.11),P<0.01;赫赛汀处理SK-BR3细胞后,与未处理组比较,细胞内Notch-1^(IC)蛋白及HES-1 mRNA水平均明显增高(P<0.01,P<0.01),HER-2蛋白表达水平在处理前后未发生明显变化(F=0.973,P>0.05);免疫共沉淀结果显示Notch-1与HER-2蛋白之间存在共沉淀。结论:Notch-1蛋白在HER-2过表达乳腺癌细胞中活性下降;HER-2与Notch-1结合,可能负性调控Notch-1;赫赛汀活化的Notch-1信号通路,可能与细胞耐药发生有关。

关键词： Notch-1 赫赛汀乳腺癌免疫共沉淀

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三丁基过氧化氢诱导Sca-1＋造血干／祖细胞衰老与P16INK4a表达的关系

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解剖学杂志 2011年第2期34卷 172-175页

作者：周明姜蓉杨斌姚欣王亚平重庆医科大学干细胞与组织工程研究室组织学与胚胎学教研室重庆400016

目的：探讨三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导Sca-1＋造血干/祖细胞（HSC/HPC）衰老与调控P16INK4a表达的关系,为寻找延缓HSC/HPC衰老方法提供理论和实验依据.方法：免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋ HSC/HPC.用t-BHP诱导Sca-1＋ HSC/HPC6... 详细信息

目的：探讨三丁基过氧化氢（t-BHP）诱导Sca-1＋造血干/祖细胞（HSC/HPC）衰老与调控P16INK4a表达的关系,为寻找延缓HSC/HPC衰老方法提供理论和实验依据.方法：免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1＋ HSC/HPC.用t-BHP诱导Sca-1＋ HSC/HPC6h建立体外细胞衰老模型,通过衰老相关β-半乳糖苷酶（SA-β-Gal）染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落（CFU-Mix）培养观察t-BHP诱导Sca-1＋ HSC/HPC衰老的生物学作用;逆转录聚合酶链反应检测衰老相关基因p16INK4a mRNA的表达;蛋白免疫印迹检测P16INK4a蛋白的表达.结果：免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1＋ HSC/HPC纯度可达87.33%±1.25%.衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率和G1期细胞比例高于对照组,生成CFU-Mix数低于对照组,衰老组P16INK4a mRNA及蛋白的表达水平较对照组上调.结论：t-BHP能有效诱导Sca-1＋ HSC/HPC衰老,其机制可能与调节P16INK4a mRNA及蛋白的表达有关.

关键词：造血干/祖细胞衰老三丁基过氧化氢 P16^INK4a

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三丁基过氧化氢通过调控细胞周期诱导Sca-1^+造血干/祖细胞衰老

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第三军医大学学报 2011年第18期33卷 1893-1896页

作者：周玥姜蓉王萍杨斌姚欣刘典锋王亚平重庆医科大学组织学与胚胎学教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016

目的探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳... 详细信息

目的探讨三丁基过氧化氢(t-BHP)诱导Sca-1+造血干/祖细胞(HSC/HPC)衰老的细胞周期调控机制。方法免疫磁性分选法分离纯化小鼠Sca-1+HSC/HPC后分为对照组(常规培养细胞),衰老模型组(用t-BHP复制细胞体外衰老模型)。通过衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色、细胞周期测定和造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)培养观察t-BHP诱导Sca-1+HSC/HPC衰老的生物学作用;RT-PCR检测衰老相关基因p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA的表达。Western blot检测细胞周期调控蛋白P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1、Cyclin E、CDK4、CDK2的表达。结果免疫磁性分选法分离纯化的Sca-1+HSC/HPC纯度可达(87.33±1.25)%。衰老组细胞SA-β-Gal染色阳性率为(57.9±4.2)%,高于对照组[(9.1±2.4)%,P<0.05],G0/G1期细胞比例为(87.53±4.03)%,高于对照组[(72.26±3.40)%,P<0.05],生成造血祖细胞混合集落(CFU-Mix)数为(1.5±1.2)/104,低于对照组[(9.8±2.1)/104,P<0.05]。与对照组比较,衰老组细胞p16INK4a、p19Arf、p53、p21Cip1/Waf1 mRNA及P16INK4a、P21Cip1/Waf1、CyclinD1蛋白表达上调(P<0.05),Cyclin E、CDK4、CDK2蛋白表达下调(P<0.05)。结论 t-BHP能有效诱导Sca-1+HSC/HPC衰老,其机制可能与调控细胞周期调控分子的表达有关。

关键词：造血干/祖细胞衰老三丁基过氧化氢细胞周期调控分子

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人参多糖对K562细胞基因表达谱的影响

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中草药 2011年第5期42卷 940-943页

作者：李建平何轩姜蓉李静左国伟雷翠蓉王亚平王建伟陈地龙重庆医科大学组织胚胎教研室干细胞与组织工程研究室重庆400016 重庆医科大学临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室重庆400016

目的利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线... 详细信息

目的利用基因表达谱芯片研究人参多糖对体外培养的人红白血病K562细胞基因表达谱的影响。方法人参多糖处理K562细胞48 h后,分别提取给药组和对照组K562细胞总RNA,将两组RNA纯化为mRNA,逆转录成cDNA,用2种不同的荧光染料Cy3和Cy5进行线性扩增标记,与Illumina全基因组表达谱基因芯片杂交,采用生物信息学方法分析人参多糖处理后K562细胞基因表达谱的改变。结果共发现差异基因306个,其中上调基因220个,下调基因86个,并对其进行生物学功能分类。结论诱导肿瘤细胞分化是多基因作用的综合结果,筛选的基因对研究肿瘤发生、发展与逆转分化,以及寻找潜在的抗肿瘤药物作用靶点可能有意义。

关键词：人参多糖 K562细胞基因表达谱基因芯片抗肿瘤

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