检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2009年第5期31卷 379-382页

作者：申晓冬张克斌李明胡晓梅周莹冰陈志瑾胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院医学实验技术中心重庆400037

目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌... 详细信息

目的检测理论推定的铜绿假单胞菌噬菌体PaP3末端酶小亚单位(pap3p01基因)编码蛋白对特异性DNA的结合能力。方法通过PCR从噬菌体PaP3基因组扩增出pap3p01基因,克隆至表达载体pQE31,转化入大肠杆菌JM109后,IPTG诱导表达目的蛋白,超声裂菌后发现目的蛋白质H6-PaP3P01存在于上清中,进而利用Ni-NTA亲合层析纯化蛋白。利用PCR与酶切方法获取可能含有末端酶小亚单位结合位点的DNA片段,并对其3′端进行生物素标记。最后采用凝胶迁移率改变实验检测H6-PaP3P01的DNA结合能力。结果成功构建了pQE-PaP3P01表达载体,获得的融合蛋白H6-PaP3P01表达量较高且全部存在于菌体超声后的上清中。经亲和层析初步纯化及脱盐处理后,H6-PaP3P01可与263 bp特异性DNA片段结合。结论成功构建并表达了推定的PaP3末端酶小亚单位重组蛋白H6-PaP3P01,并且检测到了该蛋白质对特异DNA的结合能力,初步证实了理论推定的正确性,为完善PaP3噬菌体包装机制的研究奠定了基础。

关键词：末端酶小亚单位噬菌体PaP3 EMSA 蛋白表达

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人体寄生虫学教学改革初探

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2009年第2期11卷 136-138页

作者：徐文岳张锡林王英黄复生第三军医大学基础医学部病原生物学教研室

为了适应寄生虫病疾病谱的变化以及满足新时期素质教育的需求，对人体寄生虫学课程的授课内容进行了优化，并对教学方法和手段进行了探索式的改革，取得了满意的结果，课程也因此被评为“总后勤部百门优质课程”。

关键词：人体寄生虫学教学方法课程改革

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登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达载体的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2009年第6期31卷 557-559页

作者：陈炜王嘉丽高娜田衍平陈宗涛徐小峰张俊磊刘丽梅江雯安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室第三军医大学基础医学部组织胚胎学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 首都医科大学基础医学院微生物学教研室北京100069

目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名... 详细信息

目的构建登革2型病毒NS1-NS2a基因真核表达质粒。方法RT-PCR扩增NS1-NS2a基因片段后,将其克隆入真核表达载体pReceiver-M01a;通过PCR、酶切、测序和间接免疫荧光染色鉴定重组质粒。结果经PCR扩增、酶切和测序验证,重组质粒构建正确,命名为pRe-NS1-NS2a;重组质粒转染Vero细胞后,间接免疫荧光染色显示细胞质中有登革2型病毒特异性蛋白的表达。结论成功构建了真核表达质粒pRe-NS1-NS2a。

关键词：登革2型病毒 NS1-NS2a基因真核表达

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含核受体真核表达载体的构建及其转染真皮多能干细胞(英文)

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中国组织工程研究与临床康复 2009年第40期13卷 7919-7924页

作者：王涛邱安春李露斯刘雁平屈纪富徐文岳解放军第三军医大学西南医院急救部重庆市400038 四川省隆昌县中医院骨二科四川省内江市642100 解放军第三军医大学西南医院神经内科重庆市400038 解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆市400038

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基... 详细信息

背景:研究表明含核受体基因在神经系统发育过程中具有重要意义,是维持成体干细胞增殖和成神经分化的关键基因。目的:拟构建含核受体真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,并筛选出能稳定表达含核受体的真皮多能干细胞。设计、时间及地点:细胞基因学实验,于2007-03/12在解放军第三军医大学基础医学部病原生物学教研室完成。材料:成年SD大鼠1只,由解放军第三军医大学实验动物研究所提供;真皮多能干细胞由解放军第三军医大学全军复合伤研究所分离培养;质粒载体pEGFPN1及细菌DH5α由徐文岳教授惠赠。方法:首先以大鼠的大脑组织总RNA为模板,RT-PCR扩增出含核受体的编码cDNA序列,T/A克隆至pMDl8-T载体上,然后用BamHI、HindⅢ双酶切释放出经测序鉴定为阳性的重组质粒pMDl8-T-TLX中的含核受体片段,亚克隆到真核载体pEGFPN1中,从而构建真核重组表达质粒pEGFPN1-TLX,最后采用阳性脂质体将pEGFPN1-TLX转染到真皮多能干细胞中。主要观察指标:转染后24h荧光显微镜下观察绿色荧光,RT-PCR检测含核受体mRNA的表达,免疫组化染色观察向神经细胞的分化情况。结果:PCR、酶切和测序结果证明,成功地将含核受体全长cDNA克隆到pEGFPN1质粒中,并成功构建pEGFPN1-TLX重组质粒。与未转染真皮多能干细胞相比,10d后可见pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞继续生长,并于15d时形成抗性克隆,荧光显微镜下有绿色荧光蛋白表达;而未转染的真皮多能干细胞10d时已全部死亡。RT-PCR结果显示,pEGFPN1-TLX转染真皮多能干细胞表达TLXmRNA。诱导后3d与单纯真皮多能干细胞比较,pEGFPN1-TLX转染的真皮多能干细胞诱导成NF200阳性细胞数明显增加,诱导成GFAP阳性细胞数明显减少。结论:实验成功构建含核受体真核表达载体,并成功转染了真皮多能干细胞。转染后能明显提高真皮多能干细胞向神经元分化的效率,而向胶质细胞分化受到抑制。

关键词：核受体含核受体克隆真皮多能干细胞

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Bmi-1调节干性相关分子转录的初步分析

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第三军医大学学报 2009年第9期31卷 768-771页

作者：阮艳蹇锐程小星牛翰婕周恒宇郑宏庭胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 解放军总医院309临床部北京100091 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037

目的探讨Bmi-1对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子转录表达的影响。方法分别构建鼠源和人源Bmi-1过表达载体pCI-GFP-mbmi1和pCI-GFP-hbmi1;瞬时转染鼠ES细胞CCE和人神经胶质瘤细胞U87;半定量RT-PCR检测胚胎干细胞中Oct-4、Nanog、c-Myc、... 详细信息

目的探讨Bmi-1对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子转录表达的影响。方法分别构建鼠源和人源Bmi-1过表达载体pCI-GFP-mbmi1和pCI-GFP-hbmi1;瞬时转染鼠ES细胞CCE和人神经胶质瘤细胞U87;半定量RT-PCR检测胚胎干细胞中Oct-4、Nanog、c-Myc、Klf4和Sox2及肿瘤细胞中CD133、Nestin等干性分子的表达;克隆形成实验检测CCE细胞自我更新克隆形成能力。结果瞬时转染Bmi-1过表达载体后,CCE细胞中Nanog的表达上调,Oct-4、Sox2和Klf4的表达无明显变化;U87细胞中Nestin和Oct-4表达上调,CD133、Nanog变化不明显;两者c-Myc的转录表达均显著降低;过表达Bmi-1促进CCE细胞自我更新克隆形成。结论Bmi-1参与了对肿瘤及胚胎干细胞中干性相关分子的转录调节。

关键词： Bmi-1 干细胞干性相关分子转录调控

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地塞米松快速抑制大鼠背根神经节细胞中ATP所致的钙升高

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第三军医大学学报 2009年第14期31卷 1329-1332页

作者：刘晓红曾俊伟肖智阮怀珍第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 遵义医学院生理学教研室贵州遵义563003

目的通过观察地塞米松对大鼠背根节神经元中ATP所致的细胞内游离钙离子浓度(intracellular calciumcon centration,[Ca2+]i)升高的影响,了解糖皮质激素是否通过非基因组作用影响初级感觉神经元的兴奋性。方法分离、培养大鼠背根神经节细... 详细信息

目的通过观察地塞米松对大鼠背根节神经元中ATP所致的细胞内游离钙离子浓度(intracellular calciumcon centration,[Ca2+]i)升高的影响,了解糖皮质激素是否通过非基因组作用影响初级感觉神经元的兴奋性。方法分离、培养大鼠背根神经节细胞,采用激光共聚焦技术观察地塞米松对培养神经元ATP所致的[Ca2+]i升高的影响。结果ATP(100μmol/L)可导致背根节神经元[Ca2+]i升高,是由P2X受体介导细胞外Ca2+内流所致;地塞米松预孵育5 min可剂量依赖性地抑制背根节神经元ATP所致的[Ca2+]i升高,地塞米松的抑制作用可被糖皮质激素受体拮抗剂RU38486(10μmol/L)、蛋白激酶A抑制剂H-89(10μmol/L)所阻断。结论地塞米松通过糖皮质激素受体激活细胞内蛋白激酶A信号途径可显著抑制大鼠背根节神经元ATP所致的[Ca2+]i升高。糖皮质激素可通过非基因组作用影响初级感觉神经元的ATP/P2X受体功能而参与痛觉的调制。

关键词：地塞米松背根神经节 ATP 激光共聚焦技术

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猪链球菌2型中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷菌株的构建

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第三军医大学学报 2009年第2期31卷 93-97页

作者：胡丹王长军胡福泉王晶程功李明潘秀珍唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 南京军区军事医学研究所南京210002

目的构建猪链球菌2型(Streptococcus suisserotype 2,***2)中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株。方法利用同源重组基因敲除方法获得***2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株,通过小鼠攻毒实验证实荚膜缺陷株对细菌毒力的影响。结果PCR... 详细信息

目的构建猪链球菌2型(Streptococcus suisserotype 2,***2)中国强致病株05ZYH33荚膜缺陷株。方法利用同源重组基因敲除方法获得***2强毒株05ZYH33荚膜合成基因cps2B敲除突变株,通过小鼠攻毒实验证实荚膜缺陷株对细菌毒力的影响。结果PCR和Southern杂交结果均显示cps2B基因完全被壮观霉素抗性基因替代,表明基因敲除突变体构建成功。电镜结果证实突变体荚膜合成能力缺失,小鼠致病性实验结果显示突变体毒力基本丧失。结论成功构建05ZYH33荚膜缺陷株,提示菌体荚膜多糖成分对于猪链球菌2型侵袭和致病具有显著作用。

关键词：猪链球菌2型荚膜多糖基因敲除致病性实验

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革兰阴性菌基因敲除载体的构建及其应用

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第三军医大学学报 2009年第23期31卷 2299-2301页

作者：王景穆媛嫒黎庶陈志瑾熊坤丛延广第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 遵义医学院研究生院贵州遵义563003

目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ... 详细信息

目的构建1个适用于革兰阴性菌的精确基因敲除载体并证明其有效性。方法构建的载体主要包括以下成分:π蛋白依赖性复制起点oriR6K;接合转移基因mob,使载体可以通过简单的接合方式实现转移;多克隆位点序列:EcoRⅠ-XbaⅠ-ApaⅠ-SfiⅠ-SacⅠ-NotⅠ-SpeⅠ-NdeⅠ-SacⅡ-BglⅡ;反向选择标志SacB;正向选择标志卡那霉素抗性片段。载体构建完成后,采用该载体对弗氏枸橼酸杆菌的yeeZ基因进行框架内敲除,以验证其有效性。结果成功构建了敲除载体,命名为pYG4,并对yeeZ基因进行了框架内精确敲除获得突变株。结论本研究构建的载体适用于对革兰阴性菌进行目的基因的精确敲除,将在细菌基因功能研究中得到广泛的应用。

关键词：敲除载体构建突变株基因功能

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瑞芬太尼复合异丙酚微泵法在癫痫病灶切除加软膜下横切术中的应用

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第三军医大学学报 2009年第16期31卷 1608-1609页

作者：欧珊刘国栋周乐顺刘合年冉茂荣林露第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都军区总医院麻醉科成都610083 第三军医大学大坪医院野战外科研究所第八研究室重庆400042

目的探讨"瑞芬太尼-异丙酚"合剂微泵法在癫痫病灶切除加软膜下横切术中对外伤性癫痫患者血流动力学、动脉血气及术中脑电描记的影响。方法40例拟行癫痫病灶切除加软膜下横切术的外伤性癫痫患者,诱导插管后以"瑞芬太尼-... 详细信息

目的探讨"瑞芬太尼-异丙酚"合剂微泵法在癫痫病灶切除加软膜下横切术中对外伤性癫痫患者血流动力学、动脉血气及术中脑电描记的影响。方法40例拟行癫痫病灶切除加软膜下横切术的外伤性癫痫患者,诱导插管后以"瑞芬太尼-异丙酚"合剂微泵法维持麻醉,根据术中情况调节持续注药速度或间断推注。监测不同时间点患者的血流动力学和动脉血气变化;打开硬脑膜和癫痫病灶切除后2次进行皮层电极检查;记录手术时间、苏醒时间和患者术中、术后反应。结果各时间点血流动力学及动脉血气变化均在正常范围内,ST-T无明显改变,无一例出现心律失常,停药后呼吸及意识恢复快,拔除气管导管后无恶心呕吐、嗜睡及复发性呼吸抑制,无术中知晓。切开硬脑膜后,皮层电极监测显示未出现脑电活动受抑,棘尖波出现部位与术前诊断描记部位完全一致,麻醉过程中未出现棘波活动异常增加或受抑现象,第2次皮层脑电描记棘波消失或基本正常,术后第2日复查脑电图均无癫痫波出现,3d内无癫痫早期发作。结论"瑞芬太尼-异丙酚"合剂微泵法在癫痫病灶切除加软膜下横切术中应用对血流动力学、动脉血气及术中脑电描记的影响小,是安全、有效、可行的全凭静脉麻醉配方。

关键词：癫痫软膜下横切瑞芬太尼异丙酚

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抑郁模型大鼠脑脊液、海马和皮层组织脑源性神经营养因子的变化

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第三军医大学学报 2009年第3期31卷 230-232页

作者：尹烈虎李学成陆地蒋渝吴虹辰杨忠田竞吴喜贵解放军第324医院精神病科重庆400020 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的观察抑郁对大鼠脑脊液、海马和皮层组织脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的影响,探讨BDNF与抑郁症的发病关系及作用机制。方法采用慢性不可预见性应激法制作大鼠抑郁模型,运用Open-Field评分方法观察大... 详细信息

目的观察抑郁对大鼠脑脊液、海马和皮层组织脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)的影响,探讨BDNF与抑郁症的发病关系及作用机制。方法采用慢性不可预见性应激法制作大鼠抑郁模型,运用Open-Field评分方法观察大鼠行为学变化;免疫组化法检测海马和皮层BDNF的表达,ELISA法检测脑脊液、海马和皮层BDNF的含量。结果与正常对照组比较,抑郁模型组大鼠海马和皮层BDNF阳性细胞数量均明显减少;正常对照组大鼠脑脊液、海马和皮层BDNF的含量分别为:(6.87±2.44)ng/ml、(11.75±3.60)ng/g、(4.31±1.37)ng/g,抑郁模型组大鼠脑脊液、海马和皮层BDNF的含量分别为:(4.23±1.54)ng/ml、(8.56±2.45)ng/g、(3.06±0.67)ng/g,表明抑郁模型组大鼠脑组织中BDNF的含量显著低于正常对照组(P<0.01)。结论抑郁模型大鼠脑组织中BDNF水平降低可能是导致抑郁症发生的重要因素之一。

关键词：慢性应激抑郁脑源性神经营养因子 ELISA

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