检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2007年第5期29卷 460-461页

作者：黄华阮怀珍蔡文琴吴喜贵陈鹏慧第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠DRG神经元急性分离方法。方法采用结合酶消化及机械分离的方法，急性分离成年大鼠DRG神经元，用于膜片钳研究。结果本方法可分离2-3个月的成年大鼠，不损伤神经元的基本结构和电生理学特性，形态... 详细信息

目的建立一种适合膜片钳研究的成年大鼠DRG神经元急性分离方法。方法采用结合酶消化及机械分离的方法，急性分离成年大鼠DRG神经元，用于膜片钳研究。结果本方法可分离2-3个月的成年大鼠，不损伤神经元的基本结构和电生理学特性，形态上易于区分。结论本方法步骤单一，操作简单，分离效率高，适合膜片钳研究。

关键词：膜片钳 DRG神经元急性分离

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培养神经细胞透射电镜样本制备方法的探讨

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2375-2376页

作者：陶忠芬可金星陈继兰路菊文灿黄文琪肖桃元第三军医大学基础医学部中心实验室重庆400038 第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都中医药大学基础医学院实验中心成都610000

目的探讨培养神经细胞透射电镜样本制备的新方法。方法分离SD大鼠大脑皮层神经细胞,培养于铺有琼脂糖和多聚赖氨酸薄膜的盖玻片上,适时固定、取膜,按常规程序制作超薄切片,电镜观察。结果电镜观察神经细胞及髓鞘超微结构清晰,原有位置... 详细信息

目的探讨培养神经细胞透射电镜样本制备的新方法。方法分离SD大鼠大脑皮层神经细胞,培养于铺有琼脂糖和多聚赖氨酸薄膜的盖玻片上,适时固定、取膜,按常规程序制作超薄切片,电镜观察。结果电镜观察神经细胞及髓鞘超微结构清晰,原有位置关系和连接方式保存良好,可见细胞间的紧密连接。结论薄膜细胞培养法是培养细胞超微结构研究的好方法,也适用于培养细胞电镜免疫组化、电镜原位杂交的研究。

关键词：培养细胞透射电镜样品制备

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痢疾杆菌侵袭HeLa细胞基因表达谱的研究

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微生物学报 2007年第5期47卷 810-816页

作者：黄留玉史兆兴袁静胡福泉军事医学科学院疾病预防控制研究所北京100071 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

采用cDNA微阵列技术检测了HeLa细胞被痢疾杆菌侵袭1h和3h后的基因表达变化,共发现2倍以上差异表达基因752个,上调基因有509个,下调基因有306个,并初步推测HeLa细胞通过激活某些信号通路,诱导表达多个基因,产生整体的细胞效应,以对抗痢... 详细信息

采用cDNA微阵列技术检测了HeLa细胞被痢疾杆菌侵袭1h和3h后的基因表达变化,共发现2倍以上差异表达基因752个,上调基因有509个,下调基因有306个,并初步推测HeLa细胞通过激活某些信号通路,诱导表达多个基因,产生整体的细胞效应,以对抗痢疾杆菌的侵袭。对显著差异表达的两个基因TNFR 1B和ERBB2,在痢疾杆菌侵袭HeLa细胞1h和3h后的表达量经荧光实时定量PCR验证,确定这两个基因的确在痢疾杆菌侵袭期间高表达,它们在细胞对痢疾杆菌2457T侵袭反应中起重要的作用。这些结果促进了对痢疾杆菌分子致病机理的认识,也为形成预防和治疗痢疾的策略提供了理论基础。

关键词：痢疾杆菌福氏2a HeLa细胞 cDNA微阵列技术荧光实时定量PCR 信号通路

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登革病毒及其E蛋白和NS3蛋白对HepG2细胞中GSH水平的影响

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2311-2314页

作者：江雯田衍平刘丽梅陈炜陈宗涛高娜徐小峰安静第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室西南医院病理学研究所重庆400038 第三军医大学西南医院病理学研究所

目的通过对登革病毒感染后不同时相点以及稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞中GSH水平的测定,确定登革病毒感染后细胞内GSH水平的变化规律,以及登革病毒蛋白的表达对HepG2细胞内GSH水平的影响。方法用分光光度计比色定量检测... 详细信息

目的通过对登革病毒感染后不同时相点以及稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞中GSH水平的测定,确定登革病毒感染后细胞内GSH水平的变化规律,以及登革病毒蛋白的表达对HepG2细胞内GSH水平的影响。方法用分光光度计比色定量检测登革病毒2型感染后不同时相点以及稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞中GSH水平的变化。结果总体来说,登革病毒2型感染后48h内,HepG2细胞内GSH的水平呈下降趋势,其中以感染后的30min、2h和24h细胞内GSH变化最为明显,与模拟感染组和其他时相点比较,均有显著差异;而稳定表达登革病毒E蛋白和NS3蛋白的HepG2细胞内GSH的水平也均较空质粒对照组降低。结论登革病毒2型感染HepG2细胞,可使细胞内的GSH下降,且呈现阶段性,推测可能与病毒的吸附、穿入、蛋白质合成、释放等过程有关,且登革病毒E蛋白和NS3蛋白在细胞内的表达也能一定程度地降低其GSH水平。

关键词：登革病毒 HepG2细胞 GSH

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GDNF及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元的作用

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第三军医大学学报 2007年第10期29卷 882-884页

作者：文灿李淑蓉张艳玲王晗知苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院病理学教研室成都610081

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响。方法取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion,SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cel... 详细信息

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子及不同生长底物对培养颈上神经节交感神经元存活和突起生长的影响。方法取新生大鼠颈上神经节(superior cervical ganglion,SCG)体外分离培养,培养基中含不同浓度的胶质细胞源性神经营养因子(glial cell derived neurotrophic factor,GDNF),并选取不同方法溶解多聚-D-赖氨酸(poly-D-lysine,PDL)包被培养盖片,观测交感神经元的存活和突起生长状况。结果用0.01mol/L硼酸溶解的PDL进行包被,细胞存活和突起生长最好,且神经元分散好,优于其他各组;GDNF对培养交感神经元的存活、突起生长具有显著的促进作用,且与其浓度存在量效关系,但它并不能阻止培养前5d存活神经元数量的减少。结论用0.01mol/L硼酸溶解PDL包被是一种良好的生长底物处理方法,GDNF能促进离体培养的交感神经元的存活和突起生长。

关键词：胶质细胞源性神经营养因子生长底物交感神经元

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经股后肌群注射DiI逆行示踪标记神经元胞体的实验研究

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第三军医大学学报 2007年第5期29卷 387-389页

作者：文灿李淑蓉王晗知苏炳银第三军医大学基础医学部神经生物学教研室重庆市神经科学研究所重庆400038 成都医学院病理学教研室成都610081

目的探讨经股后肌群注射DiI行逆行示踪以精确显示支配神经元胞体在脊髓的时空分布情况。方法新生昆明小鼠65只，经左后肢股后肌群注射DiI，在注射2、4、6、8、12、24h和2、4、7、14、28d及2、3个月后观测背根神经节和腰段脊髓示踪荧光... 详细信息

目的探讨经股后肌群注射DiI行逆行示踪以精确显示支配神经元胞体在脊髓的时空分布情况。方法新生昆明小鼠65只，经左后肢股后肌群注射DiI，在注射2、4、6、8、12、24h和2、4、7、14、28d及2、3个月后观测背根神经节和腰段脊髓示踪荧光的分布和强度。结果①示踪细胞分布在左侧L2～S2脊髓段和相应的背根神经节，主要集中在L4～L6段；②注射DiI 6h后，在背根神经节和脊髓前角可见发微弱红色荧光的神经元；③标记的神经元数量逐渐增多，4d达到高峰；④6～24h每个标记神经元荧光逐渐增强，24h后达到高峰；⑤3个月后荧光强度无显著降低。结论经股后肌群注射DiI作逆行示踪，可快速、准确、持久地标记背根神经节感觉神经元和脊髓运动神经元，且适当延长示踪时间可提高神经元的标记率。

关键词： DiI 感觉神经元运动神经元逆行示踪荧光标记

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抑制FoxO1基因表达的siRNA重组腺病毒载体的构建及功能鉴定

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第三军医大学学报 2007年第23期29卷 2215-2218页

作者：卢忠燕甘立霞王哲何凤田邹全明曹廷兵第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038 大坪医院野战外科研究所内分泌科重庆市高血压病研究所重庆400042

目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细... 详细信息

目的构建针对转录因子FoxO1的siRNA腺病毒载体,并鉴定重组腺病毒在人肝癌细胞系HepG2中对内源性FoxO1基因表达的影响。方法设计并合成针对FoxO1的siRNA的靶DNA序列,克隆于穿梭载体pAdTrack-CMV中,与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,转染293细胞,包装得到含si-FoxO1的重组腺病毒,体外转染人肝癌细胞系HepG2,Westernblot检测FoxO1蛋白表达水平的变化。结果成功构建针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,该重组腺病毒能显著抑制HepG2细胞中FoxO1蛋白的表达(P<0.01)。结论成功构建了针对FoxO1的siRNA重组腺病毒载体,能有效抑制HepG2细胞中FoxO1的表达。

关键词： FoxO1 siRNA 腺病毒载体 HepG2细胞

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结核分枝杆菌PstS1-U1融合抗原的表达、纯化及其免疫活性测定

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第三军医大学学报 2007年第15期29卷 1473-1476页

作者：丛延广刘利陈志瑾饶贤才胡晓梅李明胡勇胡福泉第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038 解放军324医院检验科重庆400020

目的为获得一种适于本地结核病临床诊断用抗原,将结核分枝杆菌38×103抗原——即磷酸盐传送蛋白1(phosphate transport system protein l,PstS1)和尿蛋白1(urine protein1,U1)进行融合表达、纯化并测定其抗原活性。方法用基因拼接... 详细信息

目的为获得一种适于本地结核病临床诊断用抗原,将结核分枝杆菌38×103抗原——即磷酸盐传送蛋白1(phosphate transport system protein l,PstS1)和尿蛋白1(urine protein1,U1)进行融合表达、纯化并测定其抗原活性。方法用基因拼接法将结核分枝杆菌编码PstS1和U1蛋白的基因拼接在一起,克隆到原核表达载体pET28a中,通过IPTG诱导实现其高效表达,采用亲和层析纯化表达产物。用纯化的融合抗原免疫家兔获得抗血清,用该血清以及活动性肺结核患者血清对纯化产物的抗原活性进行测定。结果成功构建了原核表达质粒,对表达产物进行亲和层析纯化,获得相对分子质量为57×103的目的蛋白。经Western blot检测融合抗原能够与活动性肺结核患者血清中的抗体发生结合。结论本研究表达并纯化出PstS1-U1融合抗原,为进一步的应用奠定基础。

关键词：结核分枝杆菌融合抗原原核表达

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稳定表达人胰岛素原突变基因的HepG2细胞构建及其胰岛素分泌

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第三军医大学学报 2007年第24期29卷 2361-2363页

作者：郑宏庭邓华聪兰丽珍方芳刘金波李丙蓉蹇锐重庆医科大学附属第一医院内分泌科重庆400016 第三军医大学新桥医院内分泌科重庆400037 第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程实验室重庆400038

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G... 详细信息

目的构建稳定表达人胰岛素原突变(mutated human proinsulin,mhPINS)基因的HepG2细胞,将HepG2细胞改建为具有胰岛素分泌能力的"胰岛代理细胞"(artificial beta cell)。方法重组逆转录病毒载体pL-mhPINS-SN转包装细胞PA317,经G418筛选,NIH3T3细胞测定病毒滴度,获取高滴度的稳定产毒细胞克隆,以PCR进行鉴定。以mhPINS病毒感染HepG2细胞,经G418筛选,对HepG2/mhPINS细胞进行RT-PCR、Western blot、放免法鉴定,并行葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测。结果所获HepG2/mhPINS细胞生长良好,RT-PCR获得286bp目的条带,Western blot检测可见34×103的特异性条带,放免法在其培养上清中检测到胰岛素与C肽,而HepG2/pLXSN细胞上述各项检测均为阴性。葡萄糖刺激的胰岛素分泌检测显示,HepG2/mhPINS细胞在不同葡萄糖浓度(0.1、10、20mmol/L)条件下引起的胰岛素分泌无显著性差异(P>0.05)。结论成功构建稳定表达mhPINS基因的HepG2细胞,其内获得成熟胰岛素的表达与分泌,但其胰岛素分泌对葡萄糖刺激缺乏反应。

关键词： mhPINS基因逆转录病毒 HepG2细胞胰岛素

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二元信号转导系统与细菌的致病性

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微生物学杂志 2007年第1期27卷 50-54页

作者：李明胡福泉唐家琪第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆400038

二元信号转导系统是广泛存在于细菌中的信号传导机制。病原菌在感染宿主的过程中,能通过该系统密切感受和响应体内外各种微环境的变化,进而调节各种基因表达以完成其致病过程。由于二元信号转导系统在病原菌的致病性方面具有重要作用,... 详细信息

二元信号转导系统是广泛存在于细菌中的信号传导机制。病原菌在感染宿主的过程中,能通过该系统密切感受和响应体内外各种微环境的变化,进而调节各种基因表达以完成其致病过程。由于二元信号转导系统在病原菌的致病性方面具有重要作用,将其作为抗感染治疗中的靶点具有良好的应用前景。

关键词：二元信号转导系统病原菌致病性

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