检索结果-内蒙古大学图书馆

陆军军医大学学报 2024年第11期46卷 1235-1243页

作者：徐刚吴刚孙滨达刘宝高志奇陈建高钰琪高文祥陈德伟陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原特需药品与器材研究室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室(培育) 重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原生理学与病理学教研室重庆400038

目的利用基因芯片技术分析高原肺水肿(high altitude pulmonary edema,HAPE)大鼠模型肺组织差异表达基因,为深入探讨HAPE发生的分子机制提供新线索。方法将8周龄健康雄性SD大鼠[体质量(200±20)g]按随机数字表法分为常氧对照(NC)组... 详细信息

目的利用基因芯片技术分析高原肺水肿(high altitude pulmonary edema,HAPE)大鼠模型肺组织差异表达基因,为深入探讨HAPE发生的分子机制提供新线索。方法将8周龄健康雄性SD大鼠[体质量(200±20)g]按随机数字表法分为常氧对照(NC)组、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)组、低压低氧(Hypoxia)组和低压低氧复合低剂量LPS(HL)组。LPS组和HL组按照每100 g体质量尾静脉注射0.1 mL浓度为0.05%的LPS溶液,NC组和Hypoxia组给予等量生理盐水;Hypoxia组和HL组进行模拟海拔5000 m低压低氧处理6 h,NC组和LPS组于舱外同时饲养。检测肺组织的湿/干质量比(wet/dry mass ratio,WDR)、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)蛋白含量,HE染色观察肺组织病理改变。提取肺组织总RNA,采用Affymetrix基因芯片检测mRNA表达谱,采用Metascape在线基因注释和分析系统(http://***)对差异表达基因进行基因本体论(gene ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG)信号通路聚类分析。结果HL组大鼠肺组织表现出明显的充血、水肿、肺泡间隔增宽。与NC组比较,HL组大鼠肺WDR显著增加(P<0.01),BALF蛋白含量显著升高(P<0.05)。基因表达检测发现,相对NC组,Hypoxia组有79个基因表达上调,59个基因表达下调,LPS组473个基因表达上调,695个基因表达下调,HL组669个基因表达上调,1253个基因表达下调。GO和KEGG信号通路聚类分析显示:HL组差异表达上调基因主要富集于细胞因子介导的信号通路、对IL-1的反应、炎症反应调节等生物学过程,以及细胞因子-细胞因子受体相互作用、TNF、NF-κB、IL-17、补体和凝血级联反应等信号通路;表达下调的基因主要富集到细胞外基质组织、内皮细胞迁移调控、细胞-基质黏附等生物学过程,以及黏着斑、Wnt、cGMP-PKG、PI3K-Akt、Rap1等信号通路。HL组大鼠肺组织中NF-κB、TNF-α、IL-1β以及IL-6的mRNA表达均显著上调(P<0.01)。结论低氧复合低剂量LPS可稳定复制大鼠HAPE模型,低氧可显著增强LPS诱导的炎症、免疫反应,显著增强炎症介质的表达,促进HAPE的发生发展。

关键词：高原肺水肿低氧基因表达谱基因芯片

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人体成分与模拟急进高原环境有氧运动能力的相关性研究

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中国运动医学杂志 2024年第11期43卷 868-872页

作者：周思敏崔宇杨诚忠黄缄甯交琳袁超李鹏陆军军医大学高原军事医学系高原作业医学教研室重庆400038 极端环境医学教育部重点实验室重庆400038 全军高原医学重点实验室重庆400038 陆军军医大学高原军事医学系高原生理学与病理学教研室重庆400038 陆军军医大学附属第一医院麻醉科重庆400038

目的:探讨人体成分与模拟急进高原环境有氧运动能力的关系。方法:以45名青年男性为研究对象,用人体成分分析仪检测身体成分。在平原环境和模拟海拔4000 m低压氧舱中进行踏阶运动,阶高0.40 m,踏阶速度25 b/min,运动5 min。记录血氧饱和... 详细信息

目的:探讨人体成分与模拟急进高原环境有氧运动能力的关系。方法:以45名青年男性为研究对象,用人体成分分析仪检测身体成分。在平原环境和模拟海拔4000 m低压氧舱中进行踏阶运动,阶高0.40 m,踏阶速度25 b/min,运动5 min。记录血氧饱和度、运动前和运动结束即刻心率,通过公式计算VO_(2max)(mL/kg·min),并采用Multiple Linear Regression及Pearson相关分析探讨人体成分与VO_(2max)的相关性。以每种体成分的均值为界将受试者分为低于均值组和高于均值组,探讨单一体成分对ΔVO_(2max)(ΔVO_(2max)=平原VO_(2max)-高原VO_(2max))的影响。结果:与平原相比,模拟高原环境人体VO_(2max)显著下降。受试者人体成分均在正常值范围,但有6名受试者体重指数(BMI)>24 kg/m^(2),占13%。上肢和躯干肌肉为95%左右,需加强锻炼。相关性分析结果显示,人体成分与VO_(2max)无显著相关。单一体成分对ΔVO_(2max)的影响结果显示,人体总水分高值组ΔVO_(2max)显著低于低值组。结论:急进高原环境初期人体有氧运动能力下降,在正常范围内保证人体充足的水分有利于改善高原环境下的有氧运动能力。

关键词：高原低氧最大摄氧量人体成分水

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缺氧特异性诱导肺血管内皮细胞黏附分子3表达以促进单核细胞黏附

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陆军军医大学学报 2025年第1期47卷 51-59页

作者：孟祥琼陈婷谢宏晨杨诚忠范旭谭小玲陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系寒区医学教研室重庆陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室重庆陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原生理学与病理学教研室重庆重庆市妇幼保健院(重庆医科大学附属妇女儿童医院)生殖医学中心重庆湖北民族大学医学部湖北恩施

目的探究细胞黏附分子3(cell adhesion molecular 3,CADM3)在肺血管内皮细胞上的表达特异性,分析其介导单核细胞特异性黏附的作用,探讨缺氧诱导肺血管外周单核细胞浸润的新机制。方法以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endotheli... 详细信息

目的探究细胞黏附分子3(cell adhesion molecular 3,CADM3)在肺血管内皮细胞上的表达特异性,分析其介导单核细胞特异性黏附的作用,探讨缺氧诱导肺血管外周单核细胞浸润的新机制。方法以人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVEC)、大鼠肺血管内皮细胞(rat pulmonary vascular endothelial cell,rPEC)和大鼠主动脉内皮细胞(rat aortic endothelial cell,rAEC)为细胞模型,分为常氧(21%O2)对照组和缺氧(1%O2或5%O2)处理组。通过分析缺氧8 h HUVEC的转录组数据,筛选差异表达的CADM3。通过细胞黏附实验、siRNA干扰、免疫细胞化学技术、Western blot技术和流式细胞术,分析CADM3在缺氧HUVEC与单核细胞特异性高黏附中的作用;通过铁螯合剂-去铁胺(deferoxamine,DFX)和shRNA干扰调节HIF-1α表达,分析HIF-1转录活性对CADM3表达的影响。结果缺氧HUVEC中CADM3表达增加,在缺氧6~8 h达到最高,随后下降;靶向CADM3的siRNA转染后,与阴性对照组比较,CADM3的表达降低,缺氧HUVEC和U937细胞的黏附率显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。与常氧(21%O2)溶剂对照组比较,DFX(100μmol/L)处理的HUVEC中HIF-1α及其靶蛋白STC2蛋白水平增加;靶向HIF-1α的shRNA转染后,与阴性对照组比较,HIF-1α及其靶蛋白STC2蛋白水平下降,但CADM3蛋白表达均无变化。缺氧rPEC中CADM3的蛋白水平及其在细胞膜上的分布均增加,与rPEC细胞比较,rAEC细胞中未检测到CADM3的蛋白表达;脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)(5μg/mL)处理后,常氧或缺氧培养的rPEC细胞中HIF-1α和CADM3表达均无明显变化。缺氧rPEC与外周血白细胞中CD11b+细胞的黏附比率最高,差异具有统计学意义(P<0.01)。抗CADM3抗体孵育后,与Blank组比较,缺氧rPEC与U937细胞的黏附显著下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧以特异地非HIF-1依赖的方式诱导肺血管内皮细胞中CADM3的表达,促进缺氧诱导的肺血管内皮细胞与单核细胞的特异性黏附。

关键词：缺氧细胞黏附肺血管内皮细胞单核细胞细胞黏附分子3

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铁蛋白自噬抑制调控低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞增殖

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陆军军医大学学报 2023年第12期45卷 1249-1258页

作者：印承杨陈德伟张二龙徐刚高钰琪陆军军医大学(第三军医大学):高原军事医学系高原特需药品与器材研究室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)极端环境医学教育部重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原生理学与病理学教研室重庆400038

目的探究低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)游离铁减少的机制及其在PASMCs增殖和肺血管重塑中的作用。方法①体外培养原代小鼠PASMCs,分为常氧组(C)、常氧柠檬酸铁铵组(C+FAC)、常氧雷帕霉素... 详细信息

目的探究低氧诱导小鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary artery smooth muscle cells,PASMCs)游离铁减少的机制及其在PASMCs增殖和肺血管重塑中的作用。方法①体外培养原代小鼠PASMCs,分为常氧组(C)、常氧柠檬酸铁铵组(C+FAC)、常氧雷帕霉素组(C+R)、低氧组(H)、低氧柠檬酸铁铵组(H+FAC)、低氧雷帕霉素组(H+R)。C组、C+FAC组和C+R组置于常氧(21%O_(2))环境中培养48 h,H组、H+FAC组和H+R组置于低氧(1%O_(2))环境中培养48 h。C+FAC组和H+FAC组使用柠檬酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)处理,C+R组和H+R组使用雷帕霉素(rapamycin)处理。检测各组细胞增殖情况,细胞内游离铁含量,铁调节蛋白(iron regulatory proteins,IRPs)、转铁蛋白受体(transferrin receptor,TFR)、铁转运蛋白(ferroportin,FPN)和铁蛋白重链(ferritin heavy chain,FTH)等铁稳态调节蛋白表达水平。②将24只C57/BL6N小鼠(雄性,6周龄,体质量18~22 g)分4组:常氧组(C-4W)、常氧高铁饮食组(C+HID-4W)、低氧组(H-4W)和低氧高铁饮食组(H+HID-4W)(n=6);H-4W组与H+HID-4W组置于模拟海拔5000 m低压低氧环境中4周。检测各组小鼠右心功能,右心室收缩压,以及肺血管重塑变化。结果与C组相比,H组PASMCs增殖活性显著增强(P<0.01),细胞内游离铁含量显著减少(P<0.01),FTH的蛋白水平显著上调(P<0.01)。与H组相比,H+FAC组PASMCs内游离铁含量显著增加(P<0.01),细胞增殖活性显著降低(P<0.01)。与H组相比,H+R组PASMCs内游离铁含量显著增加(P<0.01),细胞增殖活性显著降低(P<0.05),FTH的蛋白水平显著降低(P<0.05)。与H-4W组相比,H+HID-4W组小鼠的右心功能显著改善(P<0.01),右心室收缩压显著降低(P<0.05),右心肥厚显著减轻(P<0.01),肺动脉增厚显著抑制(P<0.01)。结论低氧通过抑制铁蛋白自噬途径,介导游离铁减少,进而促进PASMCs增殖以及肺动脉重塑。

关键词：低氧性肺动脉高压铁蛋白自噬肺动脉平滑肌细胞铁稳态细胞增殖

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慢性高原病与血常规和血生化指标的相关性研究

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临床血液学杂志 2023年第8期36卷 548-552页

作者：高志奇谢慎威何文娟赵力陈嫄媛张春梅王玲倪兵陈德伟陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系病理生理学教研室重庆400038 极端环境医学教育部重点实验室全军高原医学重点实验室中国人民解放军陆军第953医院健康管理科陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原生理学与病理学教研室

目的检测久居高海拔地区人群血常规和血生化指标情况,并探讨其与慢性高原病(CMS)之间的关系,为常驻高原人群健康研究提供参考。方法选取在2880~5400 m海拔生活1个月以上的252例男性受试者为研究对象,对受试者静脉血进行血常规和血生化... 详细信息

目的检测久居高海拔地区人群血常规和血生化指标情况,并探讨其与慢性高原病(CMS)之间的关系,为常驻高原人群健康研究提供参考。方法选取在2880~5400 m海拔生活1个月以上的252例男性受试者为研究对象,对受试者静脉血进行血常规和血生化指标检测,并通过血细胞分析参考区间和临床常用生化检验项目参考区间判断血常规和血生化指标异常情况;应用CMS量表调查CMS患病情况,并比较血常规和血生化指标在CMS患病人群和非患病人群之间的差异;分析血常规及血生化指标与CMS的关系。结果①多项血液指标在常驻高原人群中存在异常,其中红细胞数量、血红蛋白浓度(HGB)、红细胞压积(HCT)、平均血小板体积以及尿酸(UA)水平高于正常参考值上限的人群分别占比71.0%、75.8%、96.4%、82.1%和72.1%;血小板分布宽度低于正常参考值下限的人群占比76.3%。②与非CMS患病人群相比,CMS患病人群的HGB、HCT、总蛋白、甘油三酯(TG)和低密度脂蛋白胆固醇水平显著增高;③与非CMS患病人群相比,CMS患病人群的血小板计量和总胆汁酸水平的异常率显著增高;④嗜酸性粒细胞百分比增加(EOS%)、HGB升高和TG增高是CMS患病的主要危险因素;⑤TG的受试者工作特征曲线(ROC曲线)预测CMS的ROC曲线下的面积(AUC)为0.710。结论EOS%、HGB和TG增高是CMS患病的主要危险因素,其中TG水平增高可用于CMS早期预警,值得重点关注。

关键词：高原低氧慢性高原病血常规血生化

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DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖中的作用及机制研究

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陆军军医大学学报 2022年第8期44卷 731-739页

作者：耿建慧陈建张二龙阳一栋陈德伟吴刚王羽赵文琦高钰琪陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:高原特需药品与器材研究室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:极端环境医学教育部重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:高原生理学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系:病理生理学教研室重庆400038

目的探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering... 详细信息

目的探讨DNase 2α在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells, RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法培养原代RPASMCs,采用3%O;缺氧处理细胞构建缺氧诱导细胞增殖模型。采用小干扰RNA(small interfering RNA sequence, siRNA)敲低Dnase2a的表达,采用质粒过表达上调细胞中Dnase2a和Hif1a的表达。采用外源性加入线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)诱导细胞增殖,使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA作为HIF-1α激动剂上调细胞中HIF-1α的表达。采用MTS法检测各组细胞增殖能力,实时荧光定量PCR法检测Dnase2a的mRNA表达,Western blot法检测DNase 2α、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen, PCNA)和细胞周期蛋白(cell cycle protein D1,Cyclin D1)的表达。结果缺氧可诱导RPASMCs增殖,并上调DNase 2α的表达(P<0.05)。siRNA可显著降低RPASMCs中Dnase2a的表达(P<0.05),并显著增强缺氧诱导的RPASMCs增殖(P<0.05),同时显著上调PCNA和Cyclin D1的蛋白表达(P<0.05)。过表达Dnase2a可显著上调RPASMCs中DNase 2α的表达(P<0.05),并显著抑制缺氧诱导RPASMCs增殖(P<0.05)。外源性加入mtDNA可诱导RPASMCs增殖,而过表达Dnase2a可显著抑制mtDNA诱导的RPASMCs增殖(P<0.05)。过表达Hif1a或使用脯氨酸羟化酶抑制剂ROXA可显著上调HIF-1α表达,并显著上调DNase 2α的蛋白表达(P<0.05)。结论 DNase 2α可抑制缺氧或线粒体DNA诱导的大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖,缺氧诱导的DNase 2α表达上调与HIF-1α有关。

关键词： DNase 2α 线粒体DNA 大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧增殖

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低氧条件下小鼠精母细胞中热休克蛋白A2及几种热休克转录因子的表达变化

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中国男科学杂志 2023年第5期37卷 39-44页

作者：李锐殷骏张庆华陆军军医大学大坪医院生殖医学中心重庆400042 陆军军医大学高原军事医学系病理生理学教研室极端环境医学教育部重点实验室全军高原医学重点实验室重庆400038

目的探索低氧条件下精子发育功能障碍的可能机制。方法使用6孔细胞培养板常规传代培养小鼠精母细胞GC-2至对数生长期,选择8块细胞培养板,随机等分为低氧组和对照组。将低氧组与对照组分别培养于Inviv O_(2)工作站(参数设置:1%O_(2);5%CO... 详细信息

目的探索低氧条件下精子发育功能障碍的可能机制。方法使用6孔细胞培养板常规传代培养小鼠精母细胞GC-2至对数生长期,选择8块细胞培养板,随机等分为低氧组和对照组。将低氧组与对照组分别培养于Inviv O_(2)工作站(参数设置:1%O_(2);5%CO_(2);94%N_(2);37℃)和温、湿度恒定的二氧化碳(5%)培养箱中,低氧处理6、12、24及48 h后,各随机取出1块细胞培养板作为对应时间梯度的低氧组及其对照组,将低氧组6孔细胞再随机等分为两个小组,其中3孔用于提取总RNA,另3孔用于提取总蛋白,对照组作相同处理。分别通过实时荧光定量PCR技术和western blot技术检测GC-2中HSPA2、HSF1及HSF2基因表达。结果HSPA2基因mRNA水平仅在低氧处理24 h后一过性升高(P<0.05),但低氧处理6、12及48 h后,均未见明显变化(P>0.05)。HSPA2蛋白在低氧处理6 h后未见明显变化(P>0.05),但低氧处理12、24及48 h后显著降低(P<0.05)。HSF1基因mRNA水平在低氧处理6及12 h后显著降低(P<0.05),低氧处理24 h后无明显变化(P>0.05),但在低氧处理48 h后显著上升(P<0.05)。HSF1蛋白在低氧处理6、12、24及48 h后均显著降低(P<0.05)。HSF2基因mRNA在低氧处理6、12、24及48 h后均未发生显著变化(P>0.05),而其对应的HSF2蛋白在低氧处理6、12及24 h后也未见明显差异(P>0.05),但在低氧处理48 h后显著降低(P<0.05)。结论低氧条件下,HSPA2、HSF1、HSF2基因表达均发生显著变化,HSPA2、HSF1、HSF2可能都是低氧致精子发育功能障碍的关键介导因子。

关键词：低氧热休克蛋白质类热休克转录因子精子发生

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TLR9-JNK信号通路调控缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖

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第三军医大学学报 2021年第21期43卷 2350-2357页

作者：吴启建张二龙孙滨达徐刚黄缄高钰琪陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原特需药品与器材研究室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原生理学与病理学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室重庆400038

目的研究Toll样受体-9(toll-like receptor 9,TLR9)在缺氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(rat pulmonary artery smooth muscle cells,RPASMCs)增殖中的作用及机制。方法采用MTT、Western blot、PCR法检测RPASMCs的相对增殖水平、蛋白表达水平、mRNA转录水平。①3%O_(2),36 h处理RPASMCs,构建缺氧诱导RPASMCs增殖的细胞模型,检测细胞相对增殖水平、TLR9、磷酸化c-jun氨基末端激酶(phosphorylated c-jun N-terminal kinase,p-JNK)蛋白表达水平。②缺氧条件下分别使用小干扰RNA序列(small interfering RNA sequence,siRNA)或20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826敲低或活化TLR9,检测RPASMCs的细胞增殖水平和c-jun氨基末端激酶(c-jun N-terminal kinase,JNK)磷酸化水平。③缺氧时使用5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测缺氧条件下细胞相对增殖水平。④缺氧时复合使用20μmol/L TLR9激动剂ODN 1826和5μmol/L JNK抑制剂SP600125处理RPASMCs,检测RPASMCs的JNK磷酸化水平和相对增殖水平。结果缺氧组RPASMCs的相对增殖水平[(1.30±0.07),P<0.01]以及TLR9蛋白水平[(1.70±0.22),P<0.05]和JNK磷酸化[(1.83±0.18),P<0.01]都显著高于常氧组。敲低TLR9显著抑制缺氧诱导的RPASMC增殖[(0.64±0.09),P<0.01]并减少JNK磷酸化[(0.49±0.01),P<0.001]。TLR9激动剂显著促进RPASMCs增殖[(2.01±0.08),P<0.001]且增加JNK的磷酸化[(2.11±0.33),P<0.01]。JNK抑制剂抑制RPASMCs增殖[(0.70±0.06),P<0.05]。与缺氧+TLR9激动剂组相比,缺氧+TLR9激动剂+JNK抑制剂组RPASMCs JNK磷酸化[(0.82±0.14)vs(1.59±0.30),P<0.001]和相对增殖水平[(1.08±0.05)vs(1.35±0.02),P<0.001]都显著降低。结论缺氧时TLR9通过激活JNK通路促进大鼠肺动脉平滑肌细胞增殖。

关键词： Toll样受体-9 磷酸化c-jun氨基末端激酶大鼠肺动脉平滑肌细胞缺氧细胞增殖

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利用Seahorse XF-96探讨不同细胞浓度和血清对线粒体功能的影响

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局解手术学杂志 2022年第4期31卷 284-291页

作者：李晓栩崔宇阳一栋周晓英矫力王辰元杨诚忠史诗黄缄陆军军医大学高原军事医学系/高原生理学与病理学教研室/极端环境医学教育部重点实验室/全军高原医学重点实验室重庆400038 重庆医药高等专科学校生理教研室重庆401331

目的利用Seahorse XF-96探讨不同细胞浓度和血清对HUVEC细胞和U87细胞线粒体功能的影响。方法利用细胞线粒体应激试剂盒,在不同浓度的HUVEC细胞和U87细胞中加入抑制剂(寡霉素、解偶联剂、鱼藤酮和抗霉素A),根据细胞浓度分为2000组、400... 详细信息

目的利用Seahorse XF-96探讨不同细胞浓度和血清对HUVEC细胞和U87细胞线粒体功能的影响。方法利用细胞线粒体应激试剂盒,在不同浓度的HUVEC细胞和U87细胞中加入抑制剂(寡霉素、解偶联剂、鱼藤酮和抗霉素A),根据细胞浓度分为2000组、4000组、6000组和8000组,根据有无血清和不同的解偶联剂浓度分为血清+低解偶联剂组、血清+高解偶联剂组、无血清+低解偶联剂组和无血清+高解偶联剂组。在Seahorse XF-96中测定线粒体的耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR),并比较HUVEC细胞和U87细胞各组线粒体的基础氧耗、质子漏、最大呼吸能力、非线粒体的氧耗、储备的呼吸能力、三磷酸腺苷(ATP)生成能力、线粒体呼吸潜力和偶联效率;比较HUVEC细胞和U87细胞之间上述指标的差异;观察血清和解偶联剂浓度对HUVEC细胞线粒体功能的影响。结果在HUVEC细胞和U87细胞中,2000组OCR显著低于4000组、6000组和8000组(P<0.01);2000组的ECAR显著低于4000组(P<0.01),4000组显著低于6000组和8000组(P<0.01)。在HUVEC细胞中,与2000组比较,6000组和8000组的基础氧耗、储备的呼吸能力、ATP生成能力和最大呼吸能力增强(P<0.05),8000组非线粒体的氧耗和质子漏增强(P<0.05);在U87细胞中,与2000组比较,6000组和8000组的基础氧耗、非线粒体的氧耗和最大呼吸能力增强(P<0.05),8000组ATP生成能力、储备的呼吸能力和质子漏增强(P<0.05);HUVEC细胞和U87细胞各组间线粒体的偶联效率和线粒体呼吸潜力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。U87细胞8000组的质子漏高于HUVEC细胞(P<0.05);HUVEC细胞2000组、6000组和8000组的偶联效率高于U87细胞(P<0.05);HUVEC细胞6000组的ATP生成能力和储备的呼吸能力高于U87细胞(P<0.05);HUVEC细胞和U87细胞各组基础氧耗、最大呼吸能力、非线粒体的氧耗、线粒体呼吸潜力比较差异均无统计学意义(P>0.05)。血清+低解偶联剂组储备的呼吸能力和线粒体呼吸潜力高于无血清+低解偶联剂组(P<0.05),其余指标组间比较差异均无统计学意义(P>0.05);血清+高解偶联剂组和无血清+高解偶联剂组的线粒体功能各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论随着细胞浓度的不断增加,HUVEC细胞和U87细胞的OCR和ECAR不断升高,细胞浓度会影响两种细胞线粒体的OCR和ECAR,HUVEC细胞和U87细胞的质子漏和偶联效率存在显著差异,血清会影响HUVEC细胞线粒体储备的呼吸能力和线粒体呼吸潜力。

关键词：线粒体能量代谢氧耗 Seahorse

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SOX6-SOCS3通过STAT3信号通路调控缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞增殖

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第三军医大学学报 2021年第4期43卷 295-302页

作者：王羽王授衔陈德伟刘宝高钰琪陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原特需药品与器材研究室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系病理生理学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系极端环境医学教育部重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系全军高原医学重点实验室重庆400038

目的探究SRY盒转录因子6(SRY-Box transcription factor 6,SOX6)-细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)在缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞(human pulmonary artery smooth cells, HPASMCs)增殖中的作用及其可能机制。方法 (1)4%O2缺氧处理HPASMCs分为3组:常氧组、缺氧24 h组、缺氧48 h组(n=3)。(2)使用小RNA干扰SOX6或SOCS3表达,干扰SOX6表达分为4组:si-SOX6-NC组、si-SOX6-1组、si-SOX6-2组、si-SOX6-3组(n=3),干扰SOCS3表达分为3组:si-SOCS3-NC组、si-SOCS3-1组、si-SOCS3-2组(n=3)。(3)构建慢病毒过表达SOX6细胞后缺氧处理48 h,分为4组:常氧对照组、过表达SOX6组、缺氧对照组、缺氧+过表达SOX6组(n=3)。(4)采用CCK-8检测各组细胞增殖,RT-qPCR、Western blot检测各组SOX6、SOCS3、磷酸化信号转导与转录激活因子3(phosphorylated-signal transduction and activators of transcription 3,p-STAT3)、增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。结果缺氧可降低SOX6和SOCS3的表达(P<0.01),不仅能诱导HPASMCs增殖(P<0.05),还能显著上调p-STAT3、PCNA的表达(P<0.05)。在常氧条件下,干扰SOX6或SOCS3可显著增强HPASMCs的增殖(P<0.05),细胞中p-STAT3、PCNA的表达也显著升高(P<0.01)。在缺氧条件下过表达SOX6可显著抑制缺氧诱导的HPASMCs增殖(P<0.01),并显著降低p-STAT3、PCNA的表达(P<0.01)。结论 SOX6-SOCS3可抑制缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞的增殖,其机制可能与抑制STAT3信号通路有关。

关键词： SOX6 SOCS3 STAT3 肺动脉平滑肌细胞缺氧增殖

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