检索结果-内蒙古大学图书馆

经典型蛋白激酶Cγ及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺缺血损伤中的作用

解剖学报 2015年第2期46卷 145-150页

作者：章欣欣杨璇马维陈璐勔韩松李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中的作用。方法利用cPKCγ基因敲除(cPKCγ-/-)小鼠和原代培养脑皮层神经元1hOGD/24h复糖复氧(R)模拟离体细胞缺血模型,给... 详细信息

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)及其相互作用蛋白14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中的作用。方法利用cPKCγ基因敲除(cPKCγ-/-)小鼠和原代培养脑皮层神经元1hOGD/24h复糖复氧(R)模拟离体细胞缺血模型,给予14-3-3γ抑制剂R18干扰,采用免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹(Westernblotting)和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,验证cPKCγ与14-3-3γ的相互作用及其对原代培养小鼠脑皮层神经元1hOGD/24hR缺血损伤的影响。结果Co-IP结果证明,14-3-3γ与cPKCγ在小鼠脑皮层中确实存在相互作用;1hOGD/24hR处理使原代培养野生型(cPKCγ+/+)小鼠脑皮层神经元内cPKCγ蛋白水平明显降低,而14-3-3γ蛋白水平显著增加(P<0.05,每组n=6);对于原代培养cPKCγ-/-小鼠脑皮层神经元,尽管14-3-3γ表达水平明显高于cPKCγ+/+小鼠脑皮层神经元,但1hOGD/24hR处理却使14-3-3γ表达水平显著降低(P<0.05,每组n=6),提示cPKCγ可影响神经元内14-3-3γ的表达水平。此外,MTT结果表明,14-3-3γ抑制剂R18(100μmol/L)可显著加重1hOGD/24hR处理原代培养cPKCγ-/-和cPKCγ+/+小鼠脑皮层神经元的缺血损伤(P<0.05,每组n=6)。结论cPKCγ与14-3-3γ在小鼠脑皮层神经元内存在相互作用并影响14-3-3γ的蛋白表达水平,cPKCγ和14-3-3γ在原代培养小鼠脑皮层神经元缺血/低氧损伤中起保护作用。

关键词：原代培养小鼠脑皮层神经元氧-糖剥夺缺血损伤经典型蛋白激酶Cγ 14-3-3γ 免疫印迹法小鼠

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miRNA-181b在氧-糖剥夺致N2A细胞缺血损伤中的作用及对热休克蛋白A5表达的调节

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解剖学报 2013年第5期44卷 616-620页

作者：韩松彭志锋李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069

目的探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白(HSP)A5表达的调节。方法应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检... 详细信息

目的探讨miR-181b在氧糖剥夺(OGD)致N2As神经瘤细胞缺血损伤中的作用,及其对热休克蛋白(HSP)A5表达的调节。方法应用N2A细胞OGD模型模拟神经细胞缺血损伤,MTT比色法检测N2A细胞生存率,免疫印迹法检测HSPA5蛋白表达水平,实时定量PCR法检测miR-181b和HSPA5 mRNA表达水平,荧光素酶报告基因技术检测miR-181b对HSPA5 mRNA的直接调控作用。结果 miR-181b在OGD致N2A细胞缺血损伤中表达水平明显降低(n=5);在OGD致N2A细胞缺血损伤过程中,通过上调或抑制miR-181b的表达水平可以显著影响N2A细胞的生存率(n=6);而在非OGD条件下,miR-181b表达水平的改变对N2A细胞活力无影响;miR-181b表达水平的改变可显著影响HSPA5蛋白表达水平(n=3),而非HSPA5的mRNA水平;共转染miR-181b前体(premiR-181b)或miR-181b抑制剂(anti-miR-181b)可显著抑制或增高含有HSPA5 mRNA 3’-UTR的荧光素酶报告基因的活性(n=5)。结论 miR-181b通过负性调节HSPA5的蛋白表达水平,在OGD致N2A神经细胞缺血性损伤中发挥重要作用。

关键词：氧-糖剥夺缺血性损伤 miR-181b 热休克蛋白A5 免疫印迹法实时定量PCR 双荧光素酶报告基因分析 N2A细胞

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cPKCγ在HPC抗N2a细胞OGD损伤中作用及其分子机制

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基础医学与临床 2013年第3期33卷 308-313页

作者：罗宏苏吉儿韩松李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069

目的在离体细胞水平,探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)在低氧预适应(HPC)对抗小鼠成神经瘤细胞(N2a)氧糖剥夺(OGD)损伤中作用及其可能的细胞分子机制。方法建立N2a细胞HPC和OGD模型,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比... 详细信息

目的在离体细胞水平,探讨经典型蛋白激酶Cγ(cPKCγ)在低氧预适应(HPC)对抗小鼠成神经瘤细胞(N2a)氧糖剥夺(OGD)损伤中作用及其可能的细胞分子机制。方法建立N2a细胞HPC和OGD模型,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、原位末端标记(TUNEL)和蛋白印迹(Western blot)几种方法,分别检测N2a细胞损伤、坏死、凋亡和自噬水平。结果 OGD 2和4 h可使N2a细胞的生存率显著降低、死亡率明显增高(P<0.05,n=6);HPC(20 min)明显改善OGD 3 h对N2a细胞的损伤作用,而cPKCγ抑制剂Go6983(6 nmol/L)则显著解除HPC对OGD细胞的保护作用(P<0.05,n=16);OGD 3 h明显增加N2a细胞的凋亡数目(P<0.05,n=6),但HPC和Go6983+HPC均不能明显影响OGD细胞凋亡水平;OGD 3 h显著提高N2a细胞的自噬水平,Go6983和HPC+Go6983均可明显降低OGD细胞的自噬水平(P<0.05,n=6),而HPC则对OGD细胞的自噬水平无明显影响;HPC明显改善OGD 3 h致N2a细胞坏死的程度,而Go6983则可解除HPC的保护作用(P<0.05,n=16)。结论在离体细胞水平证实了cPKCγ在HPC改善N2a细胞OGD损伤中的作用,且这种作用主要与降低OGD细胞的坏死水平有关。

关键词：低氧预适应(HPC) 氧糖剥夺(OGD) 细胞凋亡细胞自噬细胞坏死

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脑内源性cPKC gamma水平影响缺血性卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1452-1459页

作者：李洁霏章欣欣钟洁杨璇李筠韩松李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069

目的探讨脑内源性经典型蛋白激酶C（cPKC）γ表达水平对脑中动脉阻塞（MCAO）／再灌注（R）致缺血性脑卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度的影响。方法利用cPKCγ基因野生型（WT）、杂合型（HET）和敲除型（KO）小鼠，建立小鼠1hMCAO... 详细信息

目的探讨脑内源性经典型蛋白激酶C（cPKC）γ表达水平对脑中动脉阻塞（MCAO）／再灌注（R）致缺血性脑卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度的影响。方法利用cPKCγ基因野生型（WT）、杂合型（HET）和敲除型（KO）小鼠，建立小鼠1hMCAO／R24h和7d缺血性脑卒中模型，借助Westernblot蛋白印迹、2，3，5-氯化三苯基四唑（TTC）染色、神经行为学测试等技术方法，检测脑内源性cPKCγ蛋白表达水平、脑梗死体积和神经功能损伤情况。结果MCAO／R1h／24h和7d可使WT、HET和KO小鼠脑出现明显的梗死灶和神经功能损伤；具有双拷贝基因的wT小鼠脑内cPKCγ／蛋白表达量存在个体差异的同时，只有单拷贝基因的HET小鼠脑内cPKCγ蛋白表达水平约为wT型小鼠的30％～100％，而非简单的50％；脑内源性cPKCγ／蛋白表达量与卒中脑梗死体积大小呈明显的负相关性，且神经功能损伤程度随着脑内cPKCγ／蛋白表达水平的增高而明显减轻。结论脑内源性cPKCγ／蛋白表达水平可影响缺血性卒中小鼠脑梗死体积和神经功能损伤程度。

关键词：缺血性脑卒中蛋白激酶C(PKC) 脑梗死体积神经功能损伤程度基因敲除小鼠

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转化生长因子-β在激光诱导脉络膜新生血管形成中的作用

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中华眼底病杂志 2014年第6期30卷 594-598页

作者：马维汪晓磊章欣欣陈璐勔韩松李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院 100069

目的观察转化生长因子-β（TGF-β）在激光诱导脉络膜新生血管形成（CNV）中的作用.方法 6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠80只随机分为正常对照组、光凝模型组、光凝加磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS对照组）、光凝加TGF-β受体抑制剂组（TGF... 详细信息

目的观察转化生长因子-β（TGF-β）在激光诱导脉络膜新生血管形成（CNV）中的作用.方法 6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠80只随机分为正常对照组、光凝模型组、光凝加磷酸盐缓冲液（PBS）对照组（PBS对照组）、光凝加TGF-β受体抑制剂组（TGF-β受体抑制剂组）,每组20只.光凝模型组、PBS对照组及TGF-β受体抑制剂组小鼠均采用激光光凝诱导CNV形成.激光光凝后1、2、3、4周,对正常对照组及光凝模型组小鼠行荧光素眼底血管造影（FFA）检查,动态观察小鼠模型CNV的形成情况;采用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测正常对照组及光凝模型组小鼠视网膜内TGF-β的蛋白表达以及正常对照组、PBS对照组、TGF-β受体抑制剂组小鼠视网膜内VEGF和TNF-α的蛋白表达.激光光凝后2周,作视网膜色素上皮细胞/脉络膜组织铺片,采用荧光染色计算各组CNV面积.结果 FFA检查结果显示,正常对照组小鼠视网膜血管以视盘为中心呈放射状走行,脉络膜血管呈网状分布;激光光凝后1周,光凝模型组小鼠光凝区可见荧光素渗漏呈盘状强荧光团.Western blot检测结果显示,光凝模型组小鼠视网膜内TGF-β蛋白表达随激光光凝时间延长而逐渐升高.光凝模型组与正常对照组小鼠视网膜内TGF-β蛋白表达比较,差异有统计学意义（F=13.042,P＜0.05）.激光光凝后1、2、3、4周,PBS对照组、TGF-β受体抑制剂组小鼠视网膜内TNF-α（F=14.721、17.509）、VEGF（F=18.890、11.251）蛋白表达均较正常对照组明显增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）.与PBS对照组比较,TGF-β受体抑制剂组小鼠视网膜内TNF-α、VEGF蛋白表达明显降低,差异均有统计学意义（F=21.321、16.160,P＜0.05）.激光光凝后2周,TGF-β受体抑制剂组小鼠脉络膜内CNV面积明显小于PBS对照组及光凝模型组,差异均有统计学意义（F=4.482,P＜0.05）.结论 TGF-β可能通过上调TNF-α和VEGF蛋白表达水平促进CNV形成,应用其抑制剂可以减少CNV形成.

关键词：脉络膜新生血管化/病理生理学转化生长因子β/激动剂肿瘤坏死因子α 血管内皮生长因子类动物实验

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“现实”的多巴胺——帕金森病研究新进展

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生理科学进展 2015年第3期46卷 161-162页

作者：王晓民首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069

＂众里寻他千百度,暮然回首,那人却在灯火阑珊处＂。为何会＂众里寻他＂唯倾心一人？类似的爱情故事里除了＂浪漫＂,似应有其它缘由？!二十世纪50年代,脑内一种很重要的神经递质-多巴胺被发现,科学界给文学作品中的＂浪漫＂蒙上了＂现... 详细信息

＂众里寻他千百度,暮然回首,那人却在灯火阑珊处＂。为何会＂众里寻他＂唯倾心一人？类似的爱情故事里除了＂浪漫＂,似应有其它缘由？! 二十世纪50年代,脑内一种很重要的神经递质-多巴胺被发现,科学界给文学作品中的＂浪漫＂蒙上了＂现实＂的色彩。瑞典哥德堡大学的神经药理学家阿维.卡尔森（Arvid Carlsson）教授因为发现了多巴胺（dopamine）而获得了2000年的诺贝尔生理学或医学奖。

关键词：多巴帕金森病神经药理学瑞典哥德堡大学 dopamine 爱情故事运动症状突触核蛋白黑质纹状体

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帕金森病发病机制与治疗研究进展

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生理科学进展 2015年第3期46卷 163-169页

作者：刘佳段春礼杨慧北京市脑重大疾病研究院首都医科大学基础医学院神经生物学系北京100069

帕金森病(Parkinson's disease PD)是第二大中枢神经退行性疾病,常见于老年人。其最主要的临床表现是静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势不稳等运动症状。典型的病理特征是中脑黑质多巴胺能神经元进行性变性缺失,残存的多巴胺能神... 详细信息

帕金森病(Parkinson's disease PD)是第二大中枢神经退行性疾病,常见于老年人。其最主要的临床表现是静止性震颤、肌强直、运动迟缓和姿势不稳等运动症状。典型的病理特征是中脑黑质多巴胺能神经元进行性变性缺失,残存的多巴胺能神经元胞质内出现病理标志物路易体(lewy's body)。PD的病因和发病机制尚不完全清楚,目前认为PD可能是遗传、环境、老龄化等因素共同作用的结果,具体机制涉及线粒体功能障碍、氧化应激、神经炎症、兴奋性毒性损伤等。由于病因不清、发病机制复杂导致PD的治疗依旧是一个亟待解决的问题,目前已有的治疗手段包括药物治疗、外科手术治疗、细胞和组织移植治疗、基因治疗等,但均存在不同程度的弊端。本文主要结合近年来文献研究进展,对PD发病机制及其治疗现状进行概述,旨在为PD基础研究及药物研发提供一定线索。

关键词：帕金森病致病机制治疗

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经典型蛋白激酶Cγ对突触蛋白-Ⅰ磷酸化调节及其在脑缺血损伤中的作用

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解剖学报 2016年第2期47卷 145-151页

作者：朱弘倚张楠于津泠魏海萍韩松李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069 首都医科大学人体解剖学与组织学胚胎学系北京100069

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(c PKCγ)对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的影响及其在小鼠原代脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中作用。方法借助c PKCγ基因敲除(c PKCγ^(-/-))小鼠,利用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)在体缺血模型和原代脑皮层神... 详细信息

目的探讨经典型蛋白激酶Cγ(c PKCγ)对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的影响及其在小鼠原代脑皮层神经元氧-糖剥夺(OGD)缺血损伤中作用。方法借助c PKCγ基因敲除(c PKCγ^(-/-))小鼠,利用小鼠大脑中动脉阻塞(MCAO)在体缺血模型和原代脑皮层神经元OGD离体细胞缺血模型,采用免疫共沉淀(Co-IP)、蛋白免疫印迹和免疫荧光等生物化学技术,验证c PKCγ与突触蛋白-Ⅰ的相互作用,探讨c PKCγ对突触蛋白-Ⅰ磷酸化水平的调节及小鼠原代脑皮层神经元OGD损伤后对神经元形态的影响。结果免疫共沉淀结果证明,正常及缺血小鼠脑皮层组织中c PKCγ与突触蛋白-Ⅰ均存在相互作用;对突触蛋白-Ⅰ5个可能的丝氨酸磷酸化位点进行筛选发现,只有Ser549和Ser553位点的磷酸化水平在OGD和c PKCγ敲除前后有明显变化;进一步统计分析得出,野生型(c PKCγ^(+/+))小鼠原代脑皮层神经元中,OGD处理使突触蛋白-ⅠSer549和Ser553位点的磷酸化水平显著降低(每组n=5,与野生型常氧组相比P<0.05),c PKCγ基因敲除可显著降低上述两个位点的磷酸化水平(每组n=5,与野生型常氧组相比P<0.05),而OGD处理后降低趋势更明显(每组n=5,与野生型OGD组相比P<0.05);除此之外,OGD处理可使c PKCγ^(+/+)和c PKCγ^(-/-)脑皮层神经元突起的长度和数目均显著降低(每组n=8,与野生型常氧组相比,P<0.05),c PKCγ^(-/-)组降低现象更加显著(每组n=8,与野生型OGD组相比,P<0.05)。结论缺血/低氧损伤情况下,c PKCγ可能通过调节突触蛋白-ⅠSer549和Ser553磷酸化水平影响神经元突起的形态,从而保护神经元免受缺血/低氧损伤。

关键词：氧糖剥夺经典型蛋白激酶Cγ 突触蛋白-Ⅰ 基因敲除免疫荧光小鼠

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结合自评量表和认知任务测量医学生抑郁情绪

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首都医科大学学报 2018年第6期39卷 889-893页

作者：王培培莫少华马昕宇张嘉玲徐志卿王静首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100069

目的研究抑郁主观自评量表和客观认知任务监测方法之间的相关性,为提高医学院在校学生抑郁倾向的筛检率提供更准确有效的方法。方法招募首都医科大学在校学生31名,采用自评量表结合客观任务监测的方法,即要求被试完成常规的自评量表包括... 详细信息

目的研究抑郁主观自评量表和客观认知任务监测方法之间的相关性,为提高医学院在校学生抑郁倾向的筛检率提供更准确有效的方法。方法招募首都医科大学在校学生31名,采用自评量表结合客观任务监测的方法,即要求被试完成常规的自评量表包括Beck抑郁问卷(Beck depression inventory,BDI)、自评抑郁量表(self-rating depression scale,SDS)、抑郁形容词检查表(depression adjective checklist,DACL),以及客观的情绪Stroop任务。结果学生的BDI评分为(7. 57±9. 36)分,SDS评分为(37. 27±5. 23)分,DACL评分为(28. 27±11. 63)分,提示医学生中存在着抑郁倾向。相关分析显示DACL与SDS、BDI的相关性呈显著性(r=0. 44,P <0. 05; r=0. 36,P <0. 05),表明量表测查的医学生抑郁倾向具有一致性。情绪Stroop任务的结果显示正常组(Beck≤4分)和抑郁倾向组(Beck≥5分)对正性词汇的反应时间分别是485 ms和561 ms;对中性词汇的反应时间分别是545 ms和606 ms;对负性词汇的反应时间分别是530 ms和603 ms。相对于中性词汇,被试者对情绪性词汇的反应时延长,有抑郁倾向的医学生存在情绪Stroop效应。结论自评量表与客观认知任务结合将有助于医学院校更有效的筛查出有抑郁倾向的医学生,为进一步抑郁干预提供了前提。

关键词：自评量表情绪Stroop 抑郁倾向医学生

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miR-378负性调节caspase-3蛋白表达减轻氧-糖剥夺致小鼠N2A细胞缺血损伤

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基础医学与临床 2013年第11期33卷 1446-1451页

作者：钟洁李洁霏郭颖韩松尹艳玲李淑娟李俊发首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院北京100020 首都医科大学附属北京朝阳医院神经内科北京100020

目的探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究。方法离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细... 详细信息

目的探讨miR-378在氧-糖剥夺(OGD)致小鼠成神经瘤N2A细胞缺血损伤中的作用及其可能分子机制研究。方法离体培养N2A细胞,采用3 h OGD/24 h复糖复氧模拟缺血/再灌细胞模型,3-(4,5-二甲基噻唑)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)比色法检测N2A细胞生存率,蛋白印迹(Western blot)检测caspase-3蛋白表达,实时定量RT-PCR检测miR-378和caspase-3 mRNA表达,荧光素酶报告基因验证miR-378对caspase-3 mRNA 3'非翻译区(UTR)的直接调控作用。结果 miR-378在N2A细胞内表达水平,随着3 h OGD复糖复氧时间的增加,而显著降低(P<0.05,n=5);在3 h OGD/24 h复糖复氧致N2A细胞缺血损伤中,上调或下调miR-378的表达水平可显著提高或降低N2A细胞生存率(P<0.05,n=6);而在非OGD条件下,miR-378表达水平改变对N2A细胞生存率则无明显影响;同样,在3 h OGD/24 h复糖复氧条件下,miR-378表达水平的改变可显著影响caspase-3蛋白表达(P<0.05,n=3)而非caspase-3 mRNA表达水平;共转染pri-miR-378可显著抑制含caspase-3 mRNA 3'-UTR的荧光素酶报告基因的表达(P<0.05,n=6)。结论 miR-378可通过负性调节caspase-3蛋白表达水平,来减轻OGD致N2A细胞缺血损伤,所获实验结果有助于从miRNAs水平为缺血性脑卒中提供潜在的治疗靶点。

关键词：氧-糖剥夺缺血性损伤 miR-378 caspase-3 N2A细胞

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