目的:本研究改进基于脱氧核糖核酸(DNA)连接酶的中低通量基因分型方法,并用此方法进行核苷酸结合寡聚结构域(NOD)样受体基因NOD1和NOD2与冠心病的关联分析。方法:通过多重聚合酶链式反应(PCR)预扩增增加连接模板分子数量,提高特异性连接效率,优化DNA探针设计,摸索连接反应温度、时间、循环圈数及连接酶种类实现等位基因特异性连接,通过荧光掺入PCR和毛细管电泳实现多种等位基因特异性产物一次性检测。Sanger测序验证此方法准确性后,利用此方法对NOD1和NOD2基因上的单核苷酸多态性(SNP)位点在1 555例冠心病患者和1887例对照受试者中进行分型和关联分析。结果:通过优化反应条件和等位基因特异性探针设计原则,实现10 ng DNA样本一次性分型30个等位基因多态性位点。基于改进的DNA连接酶中低通量基因分型方法,NOD1、NOD2基因与冠心病的关联分析发现,NOD2基因上rs1861759和rs751271位点在非高血压条件下与冠心病相关(P均<0.05),经Bonferroni多重检验校正后,相关性仍然显著(P均<0.05)。结论:本研究优化了DNA连接酶链式反应技术在设计上的关键点,联合使用多重PCR和毛细管电泳,建立了一种高准确性、低成本、满足基于中低通量位点分型的临床分子诊断和科研需求的基因分型新方法,并用该方法发现NOD2基因上的位点rs1861759和rs751271在非高血压条件下与冠心病相关。
目的:探讨脂代谢紊乱在妊娠期糖尿病(GDM)中的作用,为妊娠期糖尿病的预防及指导临床干预提供理论依据。方法:观察妊娠期糖尿病患者和糖耐量正常孕妇血脂水平及胰岛素抵抗程度差异,分析妊娠期糖尿病患者饮食治疗前后的血脂及炎症标志物的动态变化,于孕12W、24W及36W分别抽取两组孕妇空腹静脉血,测定糖、脂代谢指标及炎症标志物水平,计算血浆致动脉粥样硬化指数(atherogenic index of the plasma,AIP);应用稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛分泌功能指数(HBCI),评价胰岛素抵抗指数(IR)程度及胰岛功能。结果:(1)GDM组的C肽、FINS、HOMA-IR明显高于糖耐量正常组(normal glucose tolerance,NGT)组(p<0.05),GDM组HBCI指数低于NGT组(p<0.05)。(2)干预组与对照组比较,12W时,TC、TG、HDL、LDL差异均无统计学意义(p>0.05);24W及32W差异均有统计学意义(p<0.05),均较对照组高。(3)对GDM组中TC、TG、HDL、LDL、AIP、hs-CRP、N及WBC值进行分析,TG、TC、LDL、AIP、hs-CRP、N及WBC值24W较36W及12W高(p<0.05);HDL水平24W较36W及12W低(p<0.05)。(4)NGT组中TG、TC、LDL、AIP、hs-CRP、N及WBC值36W较24W及12W高(p<0.05);HDL水平36W较24W及12W高(p<0.05)。结论:GDM孕妇存在着明显的胰岛素抵抗和胰岛β细胞分泌功能受损。GDM孕妇合并较正常妊娠更为严重的炎症反应,血脂水平明显升高,饮食治疗后对改善IR有益,提示在妊娠期糖尿病患者中,通过适当的饮食治疗进而对血糖及血脂的调整可以显著减少母儿并发症。
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