检索结果-内蒙古大学图书馆

心肺血管病杂志 2016年第11期35卷 896-899页

作者：李弘夏刘涛燕吴福建兰峰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所血管生物研究室 100029

目的:通过诱导多潜能干细胞i PSC体外定向分化为心肌细胞的方法,已经成为干细胞和心血管领域研究的有效工具,也为临床治疗带来新希望。本文依据胚胎发育的分子调控机制,探索建立体外定向分化心肌的方法。方法:使用干细胞培养基培养i PSC... 详细信息

目的:通过诱导多潜能干细胞i PSC体外定向分化为心肌细胞的方法,已经成为干细胞和心血管领域研究的有效工具,也为临床治疗带来新希望。本文依据胚胎发育的分子调控机制,探索建立体外定向分化心肌的方法。方法:使用干细胞培养基培养i PSCs生长至80%,换成含6μmol/L Chir99021和25μg/L Activin A的基础培养基培养48h,基础培养基为含有2%的B27、64μg/L l-ascorbic acid2-phosphate的RPMI 1640培养基,换为含2μM Wnt-C59的WNT信号抑制剂培养基培养48h,最后换为维持培养基继续培养,每两天换液,约第8天可见心肌开始搏动。结果:i PSC在向成熟心肌分化时,显微镜下可观察到明显的肌丝肌节结构,具有心肌特异性标志物TNNT 2,MLC 2a的强阳性表达,并表现出自发跳动的电生理活动。结论:该方法可以成功诱导i PSC高效分化为具有电生理功能的心肌细胞。

关键词：诱导多潜能干细胞分化心肌细胞

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循环长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5与冠状动脉钙化的相关性研究

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中国医药 2017年第2期12卷 178-181页

作者：信满坤朱小玲张抒扬齐永芬柳景华首都医科大学附属北京安贞医院心内科北京市心肺血管疾病研究所 100029 中国医学科学院北京协和医院心内科 100730 北京大学医学部基础医学院生物活性小分子研究室分子心血管学教育部重点实验室 100191

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计... 详细信息

目的探讨外周血中长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5（lncRNAGAS5）与冠状动脉钙化（CAC）的相关性。方法选取2016年1—3月于首都医科大学附属北京安贞医院就诊的具有典型心绞痛症状和高度疑似冠状动脉粥样硬化性心脏病患者39例，计算所有患者CAC积分。根据CAC积分将患者分为无CAC组（19例，CAC积分为0-100分）和CAC组（20例，CAC积分为101-2800分）。比较2组患者外周血中lncRNAGAS5含量，并分析CAC和lncRNAGAS5的独立相关因素。结果CAC组外周血中IncRNAGAS5含量明显高于无CAC组[（0．0142±0．0111）比（0．0074±0．0072）]，差异有统计学意义（P=0．030）。多元线性回归分析模型显示lncRNAGAS5（t=1．99，P=0．045）、低密度脂蛋白胆固醇（t=2．47，P=0．019）、血钾（t=2．86，P=0．007）是CAC的独立相关因素；白细胞介素6（t=-2．516，P=0．017）和脑钠肽（t=2．236，P=0．032）是lncRNAGAS5的独立相关因素。结论外周血中lncRNAGAS5在CAC患者中表达升高，且可作为预测CAC的指标，其升高可能与炎症指标和心室功能相关。

关键词：冠状动脉钙化长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5 白细胞介素6 脑钠肽

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心肌肌球特定基因-肌球蛋白轻链基因可在人脐带间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞表达

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心肺血管病杂志 2016年第8期35卷 653-658页

作者：辛毅李娜许秀芳崔巍刘飒王超黄益民张颖周玉杰首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所细胞与分子生物学研究室首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所实验中心中国人民解放军96669部队首都医科大学附属北京安贞医院-北京市心肺血管疾病研究所心内科

目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析... 详细信息

目的:探讨人心肌肌球蛋白轻链(2v)基因启动子(p MLC2v)驱动的绿色荧光蛋白(GFP)和荧光素酶(Luc)报告基因慢病毒载体在人脐带间充质干细胞(h UCMSC)向心肌样细胞分化中的表达。方法:酶消化法原代分离培养h UCMSC,采用流式细胞仪鉴定分析其细胞表面标记物及检测体外向成骨细胞、成脂细胞、内皮细胞诱导分化潜能;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC定向分化成心肌样细胞;诱导细胞并同时转染p MLC2v-GFP,于d3,d7,d10,d14,d17及d21时间点在荧光显微镜下观察及流式细胞仪检测其阳性率;用生物发光检测仪检测相同时间点的萤光素酶(p MLC2v-Luc)报告基因慢病毒载体转染分化细胞发光特征;在激光共聚焦显微镜下观察p MLC2v-GFP及红色荧光蛋白(RFP)共转染诱导21d后分化细胞蛋白的表达分布状况;与鼠心肌细胞作为对照,脉冲电流激发细胞收缩和细胞内及细胞间的钙离子流,以检测诱导分化细胞"兴奋-收缩"偶联功能;Western blot法检测诱导分化细胞p MLC2v蛋白的表达。结果:原代培养的P3 h UCMSC,经FCM检测CD90、CD105及CD73阳性率均为99%以上为高表达;获得的细胞分别经体外诱导能够向成骨细胞、成脂细胞、成内皮细胞分化;经5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导h UCMSC同时并转染p MLC2v GFP,在荧光显微镜下观察并用流式仪检测GFP表达阳性细胞数随诱导时间的延长而增加(P<0.05);生物发光检测仪检测诱导细胞p MLC2v-Luc表达同样呈阳性递增;p MLC2v GFP及RFPC共转染诱导21d后分化的细胞,细胞浆内形成较清晰的与细胞长轴平行的肌束样结构;诱导后的细胞用共聚焦显微镜检测无细胞内及细胞间的钙离子流动;随诱导时间的延长p MLC2v蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论:在h UCMSC体外诱导形成心肌样细胞过程中,p MLC2v基因随诱导时间的延长而表达增加,为监测干细胞的移植在心肌疾病治疗中提供了实验依据。

关键词：人脐带胶样组织间充质干细胞心肌样细胞肌球蛋白轻链荧光素酶绿色荧光蛋白

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长链非编码RNA在心肌生理和病理生理功能调控中的作用

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生理科学进展 2015年第2期46卷 157-160,F0003页

作者：信满坤齐永芬柳景华首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心内科北京100029 北京大学医学部基础医学院生物活性小分子研究室分子心血管学教育部重点实验室北京100191

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一组超过200个核苷酸的非编码转录RNA,能与DNA或RNA、miRNA结合位点和启动子的靶碱基结合,改变基因表达,或者直接调节蛋白功能,参与胚胎发生发育、器官功能稳态维持以及疾病发生发展等多种... 详细信息

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一组超过200个核苷酸的非编码转录RNA,能与DNA或RNA、miRNA结合位点和启动子的靶碱基结合,改变基因表达,或者直接调节蛋白功能,参与胚胎发生发育、器官功能稳态维持以及疾病发生发展等多种生理和病理过程。近年多项研究结果表明,lncRNA不但在生理性心脏发生发育、心脏各类型细胞分化和转化过程发挥重要作用,而且在心脏疾病,如心肌肥厚、心力衰竭、心肌梗死和心脏缺血再灌注损伤等病理性疾病中,表达谱发生动态改变。

关键词：长链非编码 RNA 心脏发育心肌疾病表达谱

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绿色荧光蛋白转基因小鼠不同源性间充质干细胞原代培养及生物学特性比较

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中国病理生理杂志 2014年第6期30卷 1141-1147页

作者：辛毅李娜张颖黄益民刘飒许秀芳张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029

目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显... 详细信息

目的：探讨绿色荧光蛋白转基因小鼠脐带和骨髓源性间充质干细胞（ MSCs ）的体外分离培养方法、生物学特性、表面标志及多向分化潜能。方法：应用Ⅱ型胶原酶消化培养法分离脐带MSCs及密度梯度离心法分离骨髓MSCs进行体外培养。在倒置显微镜下观察2种细胞的生长特点，运用生长曲线和MTT法检测其原代细胞增殖能力，台盼蓝法测定细胞传代成活率，采用流式细胞术测定2种第3代（ P3）细胞DNA周期及表面标志物的表达，并比较其向成脂细胞和成骨细胞的分化潜能。结果：酶消化法分离培养的脐带MSCs 1 d后，细胞贴壁呈成纤维形，2 d后呈漩涡状生长且增殖明显，3 d后达80％融合即可传代；应用密度梯度离心法分离骨髓MSCs，体外培养4 d后，细胞贴壁呈圆形、梭形和多角形生长，5 d后呈克隆样生长且增殖明显，7 d后达80％融合即可传代。原代培养的脐带MSCs生长曲线近似“S”形，骨髓MSCs 生长曲线较平缓；MTT法显示脐带MSCs在3～5 d增殖较明显，骨髓MSCs 7 d后细胞增殖较明显。2种P3细胞传代成活率均为96％以上，G0／G1期细胞均为85％以上，无明显差异（P＞0．05）；2种P3细胞CD44、CD90和CD105阳性率均为（60．7±2．3）％以上高表达，CD45、CD19、CD14和CD79a均为（25．6±4．8）％低表达，两者无明显差异（ P＞0．05）；2种MSCs在体外均具有向成骨细胞和成脂细胞分化的潜能，脐带MSCs向成骨及成脂细胞分化率均为90％以上，与骨髓MSCs的分化潜能比较有显著差异（ P＜0.05）。结论：脐带MSCs较骨髓MSCs具有较强的增殖能力及分化潜能。绿色荧光蛋白转基因小鼠的脐带MSCs可作为较好干细胞示踪的细胞源。

关键词：脐带骨髓间充质干细胞生物学特性绿色荧光蛋白转基因小鼠

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人宫颈癌侧群细胞差异微小RNA表达分析

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中国医药 2014年第6期9卷 872-877页

作者：邱淑兰朴春梅王克芳北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院妇产科

目的筛选入宫领癌侧群细胞差异表达的微小RNA（microRNA），方法选取16例行宫颈鳞癌切除的手术标本，进行宫颈癌细胞原代培养，流式细胞仪分选侧群细胞，对比侧群细胞和非侧群细胞的体外自我更新能力和肿瘤形成能力。分别提取侧群细胞... 详细信息

目的筛选入宫领癌侧群细胞差异表达的微小RNA（microRNA），方法选取16例行宫颈鳞癌切除的手术标本，进行宫颈癌细胞原代培养，流式细胞仪分选侧群细胞，对比侧群细胞和非侧群细胞的体外自我更新能力和肿瘤形成能力。分别提取侧群细胞和非侧群细胞的总RNA，用microRNA芯片分刖检测侧群细胞和非侧群细胞的micl’oRNA表达谱并进行分析，筛选出差异表达的microRNAi．结果在原代培养的16株宫颈癌细胞中均分选出侧群细胞，比例占（1．67±0．94）％。培养14d后，侧群细胞的克隆形成牢为0．51±0．07，而非侧群细胞的克隆形成率仪为0．05±0．02，侧群细胞和非侧群细胞的克隆形成率比较差异有统计学意义（t=2．828，P〈0．01）．仅1×10^4个侧群细胞即可形成肿瘤，而至少1×10^6个非侧群细胞才能形成肿瘤。microRNA芯片筛选出表达差异在10倍以上的有16条microRNA，其中3条microRNA上测，13条microRNA下调；差异表达超过共同2倍的microRNA有7条，其中3条microRNA上调，4条microRNA下调，结论人宫颈癌侧群细胞具有肿瘤干细胞特性，人宫颈癌侧群细胞表达一些特异的microRNA，

关键词：宫颈癌侧群细胞肿瘤干细胞微小RNA

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腔内弹力蛋白酶压力灌注联合腔外氯化钙浸润构建腹主动脉瘤大鼠模型

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中国医药 2014年第2期9卷 225-229页

作者：曹旭王嫕秦彦文首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室 100029

目的联合应用弹力蛋白酶和氯化钙浸润的方法建立病理学特征符合腹主动脉瘤特点的大鼠肾下型腹主动脉瘤模型.方法选取雄性Sprague-Dawle大鼠的左肾动脉远心端1 cm腹主动脉段给予腔内弹力蛋白酶（40 U/ml）和腔外氯化钙（0.5 mol/L）处... 详细信息

目的联合应用弹力蛋白酶和氯化钙浸润的方法建立病理学特征符合腹主动脉瘤特点的大鼠肾下型腹主动脉瘤模型.方法选取雄性Sprague-Dawle大鼠的左肾动脉远心端1 cm腹主动脉段给予腔内弹力蛋白酶（40 U/ml）和腔外氯化钙（0.5 mol/L）处理（模型组,n=9）,灌注组（n=6）（弹力蛋白酶和氯化钙溶液用0.9％氯化钠注射液代替）和假手术组（n=6）（仅正常开腹游离血管）作为对照组.分别于术前、术后3、7和10 d超声检测腹主动脉（瘤）直径变化.术后10 d取材固定,游标卡尺测量腹主动脉（瘤）直径,行组织切片苏木精-伊红染色和弹力蛋白Elastin yon Gieson（EVG）染色,计算机图像半定量分析比较3组血管壁厚度,弹力纤维含量参数的变化.结果每组手术均在20 min内完成,围手术过程无技术失误和死亡.术后10 d,模型组腹主动脉直径以及扩张率分别为（2.75 ±0.49）mm、（68.4±22.6）％,高于灌注组[（1.86±0.16）mm,（6.3±3.7）％]和假手术组[（1.81±0.11）mm,（4.6±3.4）％].模型组、灌注组和假手术组术前、术后3、7和10 d动脉内径依时间变化分别为（1.68 ±0.18）mm,（2.37±0.26） mm,（2.69±0.34）mm,（2.81±0.38）mm;（1.71 ±0.15）mm,（1.79±0.21）mm,（1.83±0.19）mm,（1.82±0.24） mm;（1.66 0.19）mm,（1.64 0.14）mm,（1.63 ±0.22） mm,（1.61 ±0.13）mm.其中模型组动脉直径依时间变化明显,灌注组和假手术组2组无明显变化.苏木精-伊红染色示术后10 d模型组血管壁厚度为（136 ±6） μm明显小于灌注组的（177±5）μm和假手术组的（178±6）μm,灌注和假手术组2组差异无统计学意义（P＜0.05）.弹力蛋白EVG染色示模型组弹力蛋白含量为（5.8±2.9）％明显低于灌注组的（17.1±6.4）％和假手术组的（16.7±7.1）％,上述结果灌注组和假手术组2组差异无统计学意义.结论联合应用腔内弹力蛋白酶灌注和腔外氯化钙浸润处理可简单、有效地构建稳定性高、可复制性强的大鼠腹主动脉瘤模型,该模型在病理学特征上可有效模拟人腹主动脉瘤细胞外基质破坏特点,为腹主动脉瘤发病机制和干预治疗的研究提供良好的动物模型.

关键词：实验性腹主动脉瘤弹力蛋白酶氯化钙大鼠

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iCys激光定量成像细胞仪对全心脏化学发光和荧光标记的定量分析

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心肺血管病杂志 2014年第4期33卷 581-585页

作者：邱淑兰王克芳王吉静朴春梅杜杰首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室 100029 北京市心肺血管疾病研究所妇产科 100029

目的:利用iCys激光定量成像细胞仪(iCys research imaging cytometer,RIC)对小鼠全心脏切片中标记的化学发光或荧光信号进行大面积、高速度、高分辨率的扫描,根据所获得图像统计分析小鼠全心脏切片中荧光和化学发光的阳性细胞比例,并分... 详细信息

目的:利用iCys激光定量成像细胞仪(iCys research imaging cytometer,RIC)对小鼠全心脏切片中标记的化学发光或荧光信号进行大面积、高速度、高分辨率的扫描,根据所获得图像统计分析小鼠全心脏切片中荧光和化学发光的阳性细胞比例,并分群追踪分析对象的图像以排查假阳性。方法:利用血管紧张素II灌注小鼠,对心脏切片进行巨噬细胞特异性的mac-2抗体的免疫组化,通过光电二极管(photodiode,PD)检测器收集二氨基联苯胺法(DAB染色法)的化学发光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的巨噬细胞的阳性面积;利用小鼠心肌梗塞模型后心脏进行末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定法(terminal dexynucleotidyl transferase(TdT)-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)标记,通过器光电倍增管(photo multiplier tube,PMT)检测器收集荧光信号获得全心脏相关影像,进而分析图片以统计全心脏中的细胞死亡率。结果:400倍放大时iCys激光定量成像细胞仪对小鼠全心脏切片的扫描花费大约20min,获得大约300张局部图片,软件自动拼合成全心脏切片图。通过对全心脏图片的统计分析显示:AngII灌注的全心脏中DAB染色法显示的mac-2抗体阳性巨噬细胞阳性面积为(2.36±0.7)%;全心脏的TUNEL标记后荧光阳性的死亡细胞比率为(32.3±4.1)%。结论:iCys激光定量成像细胞仪可以对病理切片样本中的化学发光以及荧光信号进行大面积、高速度、高清晰的扫描,分析软件可以进行后期的图像的定性定量分析,并且可以通过对分析对象的追踪图像显示以明确统计分析的正确性。

关键词： iCys激光定量成像细胞仪巨噬细胞细胞凋亡全心脏扫描

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静脉血管平滑肌细胞中的多倍体细胞分析

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中国医药 2014年第7期9卷 1072-1074页

作者：邱淑兰王克芳朴春梅王绿娅刘飒杜杰北京市心肺血管疾病研究所心血管生物研究室 100029 首都医科大学附属北京安贞医院妇产科

目的探讨流式细胞术分析静脉血管平滑肌细胞多倍体细胞的方法和意义。方法选取普通级健康成年日本大耳白兔2只，雄性，8月龄，大约3 kg;普通级SD大鼠2只，雄性，8周龄，大约200 g。人大隐静脉为2例心脏冠状动脉旁路移植术中修补血管所... 详细信息

目的探讨流式细胞术分析静脉血管平滑肌细胞多倍体细胞的方法和意义。方法选取普通级健康成年日本大耳白兔2只，雄性，8月龄，大约3 kg;普通级SD大鼠2只，雄性，8周龄，大约200 g。人大隐静脉为2例心脏冠状动脉旁路移植术中修补血管所得。在麻醉日本大耳白兔和大鼠后开腹腔获取下腔静脉，采用多种酶组合的消化液消化兔、大鼠以及人的静脉血管得到适合流式细胞检测的静脉血管平滑肌单细胞悬液，用碘化丙啶标记细胞，利用细胞流式仪分析兔、大鼠以及人的静脉血管平滑肌单细胞悬液各5 000个细胞，检测细胞DNA含量，DNA含量翻倍的细胞为多倍体细胞。并利用荧光原位杂交技术（FISH）验证阳性对照HEK293细胞系中的多倍体的存在。结果流式结果显示分析的5 000个细胞中，阳性对照HEK293细胞的多倍体细胞为1 355个（27.1%），从2例患者中取得的大隐静脉多倍体细胞为310个（6.2%）和250个（5.0%）;2只大鼠的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞为360个（7.2%）和450个（9%）;2只兔的下腔静脉平滑肌细胞中多倍体细胞分别为270个（5.4%）和305个（6.1%）。结论成年的静脉血管包括人大隐静脉的平滑肌细胞中普遍存在一定比例的多倍体细胞。

关键词：静脉血管平滑肌细胞多倍体细胞

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小鼠骨髓间充质干细胞定向诱导分化血管内皮细胞的实验研究

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新乡医学院学报 2014年第1期31卷 8-14页

作者：辛毅李娜黄益民刘飒许秀芳张兆光首都医科大学附属北京安贞医院北京市心肺血管疾病研究所分子生物学研究室北京100029 北京市心肺血管疾病研究所实验中心北京100029 首都医科大学附属北京安贞医院心外科北京100029

目的探讨体外小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)的分离培养对其定向诱导分化为血管内皮细胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓贴壁法,分离骨髓间充质干细胞(MSCs)体外纯化培养并传代,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,采用生长曲线法及3-(4,5... 详细信息

目的探讨体外小鼠骨髓间充质干细胞(mBMMSCs)的分离培养对其定向诱导分化为血管内皮细胞(VECs)的可行性。方法采用全骨髓贴壁法,分离骨髓间充质干细胞(MSCs)体外纯化培养并传代,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,采用生长曲线法及3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)法观察传代细胞生长特性。采用第3代mBMMSCs在内皮细胞生长培养基(EBM-2)中以血管内皮细胞生长因子(VEGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)进行定向诱导,观察细胞形态学变化;流式细胞仪分析比较第3代mBMMSCs及诱导后细胞DNA周期、细胞免疫表型的变化;免疫细胞荧光技术分别检测CD31、vWF和CD34表达及摄取Di-lac-LDL结合FITC-UEA-1的功能特点;体外血管形成实验检测血管内皮细胞的功能。结果 mBMMSCs原代培养呈长梭形、漩涡状排列生长,P1、P2、P3细胞生长曲线及MTT法显示呈潜伏期、对数生长期及平台期生长。诱导后的部分细胞形态可见类似血管内皮样改变,呈多角形、短梭形、铺路石样排列生长;细胞周期分析显示,第3代mBMMSCs G0/G1期为86%,诱导分化后的细胞G0/G1期为92%,细胞DNA周期无明显差异;第3代mBMMSCs免疫表型结果显示为CD105、CD90、CD73、CD44阳性表达,而CD34、CD45、VEGF(CD309)、CD14阴性表达;诱导分化后的细胞VEGF(CD309)、CD34弱阳性表达,而CD105、CD90、CD73、CD44、CD45、CD14阴性表达;细胞免疫荧光技术检测第3代mBMMSCs表面CD31、vWF和CD34阴性表达,不具有摄取Dil-ac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及形成血管管腔样结构;诱导后的细胞表达VECs特异性表面标志CD31、vWF和CD34,具有摄取Di-lac-LDL、结合FITC-UEA-1的功能特点及体外可形成血管管腔样结构。结论采用全骨髓贴壁法培养的mBMMSCs在体外具有定向诱导分化为VECs的潜能,成为血管组织工程理想的细胞来源。

关键词：骨髓间充质干细胞血管内皮细胞诱导分化小鼠

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