检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2013年第5期29卷 529-534页

作者：徐黎明刘红柏尹家胜卢彤岩中国水产科学研究院黑龙江水产研究所哈尔滨150070

为了建立传染性造血器官坏死病毒的免疫学检测方法,本研究以IHNV-Sn分离株基因组提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出其表面糖蛋白(glycoprotein,G)的基因序列(1527bp)。将该基因克隆到pET27b(+)表达载体中构建出重组质粒pET27b-G,通过... 详细信息

为了建立传染性造血器官坏死病毒的免疫学检测方法,本研究以IHNV-Sn分离株基因组提取物为模板,利用RT-PCR方法扩增出其表面糖蛋白(glycoprotein,G)的基因序列(1527bp)。将该基因克隆到pET27b(+)表达载体中构建出重组质粒pET27b-G,通过大肠杆菌BL21(DE3)表达菌株获得高效表达。SDS-PAGE电泳分析显示表达蛋白约55kD,大部分以包涵体的形式表达。利用尿素变性复性处理后获得高纯度的纯化蛋白,制备兔抗血清。间接ELISA结果显示,所制备的兔抗血清能够与重组糖蛋白和IHNV-Sn病毒株表面糖蛋白发生特异性反应,与重组蛋白的反应效价为1∶20 000;间接免疫荧光结果显示,该兔抗血清可与IHNV-Sn分离株和IHNV参考毒株产生特异性的荧光,以上结果说明本研究所表达的IHNV糖蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性,该研究为IHNV检测方法的建立及疫苗的研制提供了基础材料和理论依据。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒病毒表面糖蛋白原核表达

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传染性造血器官坏死病毒重组酶介导等温扩增快速检测方法的建立和验证

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中国兽医科学 2023年第7期53卷 805-810页

作者：朱崧琪吴江廖立珊朱裕敏王津津朱鹏温智清贾鹏杨鲤源刘荭深圳海关动植物检验检疫技术中心广东深圳518045 深圳技术大学广东深圳518118

为建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的荧光重组酶介导扩增(RAA)方法,本试验参考世界动物卫生组织(WOAH)《水生动物法典(第6版)》所列的诊断方法确认原则,根据IHNV核酸保守序列设计特异性引物和探针,选用其G蛋白保守序列中长... 详细信息

为建立快速检测传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)的荧光重组酶介导扩增(RAA)方法,本试验参考世界动物卫生组织(WOAH)《水生动物法典(第6版)》所列的诊断方法确认原则,根据IHNV核酸保守序列设计特异性引物和探针,选用其G蛋白保守序列中长度为196 bp的片段构建重组质粒,在不同反应条件下进行优化,建立RT-RAA检测技术,并通过26个IHNV不同基因型毒株和本实验室保存样品进行验证。结果显示,该方法对5个基因型IHNV的26种毒株均敏感,与另外7种RNA病毒无交叉反应,且反应时间仅为RT-PCR的1/5;对重组质粒原液做4个梯度稀释后,在10-4稀释度时完全呈阴性;通过对71份临床样品的验证,阳性检出率为80.28%。上述结果表明,本研究建立的RT-RAA方法具有操作简便、灵敏度高、特异性好、检测时间短、不完全依赖实验室设备和条件等优势,可为IHN防控提供更便捷、更适合现场检测的工具。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒重组酶介导扩增快速检测

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传染性造血器官坏死病核酸疫苗的构建及其在虹鳟接种部位的消长规律

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中国水产科学 2017年第6期24卷 1280-1287页

作者：李渊徐黎明赵景壮刘淼任广明尹家胜卢彤岩中国水产科学研究院黑龙江水产研究所黑龙江哈尔滨150070 上海海洋大学水产与生命学院上海201306

本研究将传染性造血器官坏死病病毒(infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)分离株SD-12糖蛋白(glycoprotein,G)基因克隆进商业化载体pc DNA3.1(+),构建了IHNV G的表达载体,即传染性造血器官坏死病(infectious hematopoietic necrosis,IHN)核酸疫苗,命名为p IHNsd-G。采用背鳍基部肌肉注射的方式,以2μg/尾的剂量免疫虹鳟(Oncorhynchus mykiss)鱼苗(5.0±0.5)g。于免疫后第4天及第7天,利用real-time PCR技术检测免疫虹鳟头肾及接种部位肌肉组织Mx-1基因表达情况;于免疫后第21天,以100倍半数组织培养感染剂量(tissue culture infective dose,TCID50)采取腹腔注射的方式进行攻毒实验,计算核酸疫苗相对保护率(relative percent survival,RPS);于免疫后第60天及150天检测免疫虹鳟血清IHNV中和抗体效价;最后,以p IHNsd-G的启动子序列和氨苄青霉素抗性基因序列为目标基因,利用PCR方法监测p IHNsd-G在免疫虹鳟接种部位的动态分布情况。结果显示:Mx-1基因在头肾和接种部位肌肉中均显著上调表达,并且在接种部位肌肉组织中明显高于同一时间点的头肾组织;攻毒实验中p IHNsd-G对虹鳟的相对保护率高达94.4%;而在免疫后第60天,所有免疫虹鳟血清中均存在中和抗体,其最高效价高达320,在免疫后第150天,最高抗体效价为80,自此,说明已成功获得有效的IHN核酸疫苗。p IHNsd-G在虹鳟接种部位的PCR监测结果显示:在免疫后的第1天即可在注射部位的肌肉中检测到全部p IHNsd-G目标片段,在第84天时已经无法从注射部位肌肉中扩增出全长氨苄青霉素抗性基因,而所有目标基因在第150天时均消失不见。本研究在成功构建IHN核酸疫苗并系统地验证了其有效性的基础上,开展了该疫苗在接种部位的动态分析研究,为IHN核酸疫苗的研发和安全性评价研究提供了基础数据。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒核酸疫苗消长虹鳟

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IHNV核衣壳蛋白在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定

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华北农学报 2014年第3期29卷 36-40页

作者：谢三磊王雯慧孙惠玲甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 北京市农林科学院畜牧兽医研究所畜禽疫病防控技术北京市重点实验室北京100097

采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1 176 bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N。再将其转染至Sf9... 详细信息

采用RT-PCR方法从传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)中扩增RNA获得1 176 bp的核衣壳蛋白(N)基因,将其插入于pFB-LIC-Bse杆状病毒载体中,构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N,转化至感受态细胞DH10Bac中,获得重组杆粒rBacmid-N。再将其转染至Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。IFA和Western Blot分析表明,重组N蛋白可以被辣根过氧化物酶(HRP)标记的组氨酸单抗(anti-His)识别,表明,IHNV N基因在昆虫细胞Sf9中获得了正确表达。为深入研究N蛋白的功能和免疫学特性奠定了基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒核衣壳蛋白基因重组杆状病毒

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IHNV N和G基因在杆状病毒表达系统中的表达及抗体制备

IHNV N和G基因在杆状病毒表达系统中的表达及抗体制备

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作者：谢三磊甘肃农业大学

学位级别：硕士

本研究以某渔场病鱼组织内分离得到的传染性造血器官坏死病病毒（IHNV）BJLL株为材料，进行了该病毒的实验室培养、鉴定及其某些生物学特性研究，在此基础上，制备了鼠抗IHNV多克隆抗体，克隆表达了IHNV的核蛋白(N)和糖蛋白(G)，并对两... 详细信息

本研究以某渔场病鱼组织内分离得到的传染性造血器官坏死病病毒（IHNV）BJLL株为材料，进行了该病毒的实验室培养、鉴定及其某些生物学特性研究，在此基础上，制备了鼠抗IHNV多克隆抗体，克隆表达了IHNV的核蛋白(N)和糖蛋白(G)，并对两种蛋白进行Western-Blot和IFA检测，以表达出的IHNV N蛋白作为免疫原，免疫小鼠制备抗血清，并对其进行效价测定等应用。结果如下： 1、IHNV病毒的增殖纯化和多抗制备利用对IHNV敏感的大鳞大麻哈鱼胚胎细胞系(CHSE)增殖病毒；测定了培养液中的病毒滴度和病毒在CHSE细胞中的生长曲线；采用超速离心法对收获的病毒进行了纯化；利用纯化的IHNV病毒免疫小鼠制备多克隆抗体，间接ELISA法检测表明获得的鼠抗IHNV血清效价为1:8000。 2、IHNV N蛋白的表达纯化及抗原性分析参照GenBank已发表的IHNV的WRAC株N基因序列，以分离得到的IHNV毒株（BJLL株）为实验材料，提取RNA，反转录为cDNA，将N基因克隆到pGM-T载体上，对重组质粒进行PCR鉴定和序列测定。结果表明，扩增N基因片段的长度为1176bp，所测得的基因序列与GenBank上所报道的IHNV的核蛋白序列同源性在99％以上。利用杆状病毒表达系统表达N基因，成功构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-N，制备了reBacmid-N，并进行PCR鉴定；reBacmid-N转染Sf9昆虫细胞，27℃培养72h～96h，收集细胞。表达产物进行SDS-PAGE电泳分析，结果与预期蛋白大小一致，Western-blot和IFA检测表明，该表达蛋白具有良好的免疫学活性。用纯化的N蛋白免疫Balb／c小鼠，制备高免血清。以纯化病毒包被ELISA板检测N蛋白血清滴度，测得鼠抗N蛋白血清滴度为1:8000。 3、IHNV G基因的表达及鉴定参照GenBank已发表的IHNV WRAC株G基因序列，以分离得到的IHNV毒株（BJLL株）为实验材料，提取RNA，反转录为cDNA，将去掉末端40个疏水性氨基酸的G基因克隆到pGM-T载体上，对重组质粒进行PCR鉴定和序列测定。结果表明，扩增G基因片段的长度为1380bp。利用杆状病毒表达系统对G基因进行表达，成功构建了重组质粒pFB-LIC-Bse-G，制备reBacmid-G，并进行PCR鉴定；reBacmid-G转染Sf9昆虫细胞，27℃培养72h～96h，收集细胞。表达产物进行SDS-PAGE电泳分析，结果与预期蛋白大小一致，Western-blot和IFA检测表明，该表达蛋白具有良好的反应原性。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒杆状病毒表达系统 N基因 G基因

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造血器官坏死病病毒M蛋白的可溶性表达及免疫原性分析

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中国动物检疫 2023年第3期40卷 118-124页

作者：郑园园杨延超李清扬赵宝华河北师范大学生命科学学院河北石家庄050700

为在大肠杆菌中高效表达出可溶性的传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)基质蛋白M,并分析其免疫原性,构建了pMAL-c2x-m原核表达质粒,优化表达条件并纯化MBP-M融合蛋白;对蛋白进行Western blot和DDA鉴定;将鉴定后的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用We... 详细信息

为在大肠杆菌中高效表达出可溶性的传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)基质蛋白M,并分析其免疫原性,构建了pMAL-c2x-m原核表达质粒,优化表达条件并纯化MBP-M融合蛋白;对蛋白进行Western blot和DDA鉴定;将鉴定后的蛋白免疫BALB/c小鼠,利用Western blot鉴定鼠抗MBP-M血清,通过间接ELISA检测该血清效价。结果显示:在大肠杆菌中获得了可溶性的MBP-M蛋白,其相对分子质量约为64 kDa,与预期结果一致;MBP-M蛋白在IPTG为0.5 mmol/L,25℃诱导12 h时上清表达量较高;经Western blot鉴定,MBP-M蛋白可与鼠抗血清发生特异性反应,而不与阴性对照血清发生反应;ELISA检测血清效价达1:25600。结果表明,本研究获得的MBP-M蛋白具有较好的免疫原性,这为IHNV基因工程疫苗研发奠定了基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒麦芽糖结合蛋白可溶性表达免疫原性分析

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IHNV诱导虹鳟鳔和肠黏膜B细胞适应性免疫功能研究

IHNV诱导虹鳟鳔和肠黏膜B细胞适应性免疫功能研究

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作者：黄振宇华中农业大学

学位级别：博士

鱼类生存环境特殊,病原微生物含量丰富。为了防止病原入侵,鱼类形成了广泛丰富的黏膜系统,包括特有的皮肤、鳃、鳔等黏膜,而且黏膜相关淋巴组织（Mucosal-associated lymphoid tissues,MALTs）构成了抵御病原感染的第一道防线。前期研... 详细信息

鱼类生存环境特殊,病原微生物含量丰富。为了防止病原入侵,鱼类形成了广泛丰富的黏膜系统,包括特有的皮肤、鳃、鳔等黏膜,而且黏膜相关淋巴组织（Mucosal-associated lymphoid tissues,MALTs）构成了抵御病原感染的第一道防线。前期研究发现,寄生虫和病原菌能够诱导鱼类黏膜产生强烈的适应性免疫反应,其中B细胞和免疫球蛋白（Immunoglobulin,Ig）发挥着关键作用。然而,当鱼类受到病毒感染后,黏膜适应性免疫应答如何?又是哪种免疫球蛋白发挥主要功能呢?都不清楚,为解决这些科学问题,我们开展了以下研究。硬骨鱼类的鳔和哺乳动物的肺是同源器官,起源于原始辐鳍鱼类的“原肺”。为了适应不同的生活环境,两者分别演化出控制沉浮和呼吸空气的不同功能,但是,作为机体气体填充器官,两者具有类似的黏膜上皮结构,表明对气流中的抗原可能存在相同的免疫机制。哺乳动物的肺受到流感或新冠病毒感染时,肺MALT能够产生大量分泌型Ig A（secretory Ig A,s Ig A）,中和病毒。鱼类鳔黏膜也存在弥散型黏膜相关淋巴组织（Diffused mucosal associated lymphoid tissue,D-MALT）,在此我们以虹鳟鳔为对象研究了病毒诱导黏膜适应性免疫功能,首先我们构建了IHNV感染虹鳟鳔模型,通过鳔腔注射的方式将传染性造血器官坏死病病毒（Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV）直接传送到鳔黏膜表面进行感染。结果发现,IHNV感染后鳔黏膜局部增殖产生了大量Ig T+B细胞,分泌的大量病毒特异性Ig T,通过多聚免疫球蛋白受体（poly immunoglobulin receptor,p Ig R）转运到鳔黏液中,发挥中和功能,从而抵抗病毒的入侵。重要的是,初次接触病毒后存活下来的鱼被高剂量病毒再次刺激时仍然能够存活下来,表明其具有一定的保护作用。但是,当这些存活鱼的Ig T+B细胞被耗竭后,黏液中特异性Ig T的含量显著下降,它们又失去了这种保护性,鳔黏膜变得对IHNV高度敏感,鱼体死亡率上升,最终证明了Ig T在机体抵御IHNV入侵过程中的重要作用。鱼类黏膜表面定植有大量的微生物,与机体相互作用,处于一个稳定状态,参与机体营养、代谢等一系列生理活动,当受到外界抗原刺激,微生物动态平衡容易被打破,也会对机体健康产生一定的影响。然而,目前鱼类中有关黏膜免疫系统、共生微生物群和病毒病原体之间的相互作用关系的研究还非常有限。本研究通过构建IHNV浸泡感染虹鳟模型,研究了病毒感染对肠黏膜免疫和微生物群落结构的影响。结果发现,IHNV感染虹鳟后,肠黏膜出现严重的组织损伤,先天性和适应性免疫基因表达显著上调。进一步研究发现肠黏膜与鳔黏膜抗病毒适应性免疫应答类似,肠黏膜Ig T+B细胞数量明显增加,肠黏液中存在大量病毒特异性Ig T。有意思的是,RNA-seq分析发现病毒感染后肠黏膜不仅激发了抗病毒免疫反应,而且抗菌免疫途径也被诱导。通过16S r RNA测序发现IHNV感染后虹鳟肠道微生物稳态被打破,菌群发生紊乱,益生菌（如粪杆菌属）显著下降,而一些条件性致病菌（如志贺氏菌）丰度显著增加,诱发了肠道继发性细菌感染。值得注意的是,病毒感染后存活下来的鱼的肠道中免疫相关基因的表达量又会回到感染之前的水平,而且微生物群落组成也逐渐恢复。因此,我们的研究结果表明,病毒感染不仅会诱导黏膜免疫应答,还会改变黏膜微生物的群落组成,导致微生物稳态失衡。因此,在制定控制病毒感染的策略时,也必须考虑继发性细菌感染。

关键词：黏膜相关淋巴组织适应性免疫反应 B细胞免疫球蛋白鳔黏膜传染性造血器官坏死病病毒肠黏膜

来源：评论

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IHNV-G蛋白原核表达、抗体制备及在IHNV检测中的应用

IHNV-G蛋白原核表达、抗体制备及在IHNV检测中的应用

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作者：金爽辽宁大学

学位级别：硕士

传染性造血器官坏死病(Infectious Hematopoietic Necrosis,IHN)是经常出现在鲑鳟鱼科中,极其容易造成一些鲑鳟鱼发生急性病毒性死亡的严重的鱼类传染病。该类传染病死亡率极高,尤其在鱼苗中危害极广。已有研究表明,传染性造血组织坏死... 详细信息

传染性造血器官坏死病(Infectious Hematopoietic Necrosis,IHN)是经常出现在鲑鳟鱼科中,极其容易造成一些鲑鳟鱼发生急性病毒性死亡的严重的鱼类传染病。该类传染病死亡率极高,尤其在鱼苗中危害极广。已有研究表明,传染性造血组织坏死病病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)呈子弹状,被分类为弹状病毒科(Rhabdoviridae)、诺拉弹状病毒属(Novirhabdovirus),基因组为单股负链RNA。IHNV-G蛋白被证实表面有囊膜结构。IHNV-G蛋白作为一种免疫原,进入机体后,可引发机体的免疫应答,从而导致特异性抗体的产生及释放,抗体可以与IHNV-G蛋白发生特异性结合。本实验从GeneBank上检索到59个IHNV的G蛋白基因,经过比对,我们在保持氨基酸序列不变、读码框整体正确的条件下,人为进行调整。最后我们选择保守密码子进行整体优化,Kpn I和Sal I酶切位点分别添加在序列两端,His标签添加于N端,最终确定一条总长1545bp IHNV-G蛋白的序列。合成得该序列,再将原核表达载体pET-30a与这个基因序列连接,pET-30a-IHNV-G是合成的重组表达质粒。对pET-30a-IHNV-G进行PCR、双酶切和测序等验证,经过确定后的重组质粒转化到BL21(DE3)plySs中,再通过诱导使重组菌表达,IHNV-G蛋白表达情况通过蛋白免疫印记实验进行验证。保证其他条件不变,分别在诱导时间、诱导剂浓度等方面来优化表达条件,借此来获得该蛋白发酵的最佳工艺。利用超声破碎将菌体裂解离心后,将上清液和沉淀物分别收集,进行SDS-PAGE分析,最终得以确认IHNV-G蛋白的是以包涵体的形式表达。包涵体收集之后,首先洗涤,再变性和复性之后,分离纯化目的蛋白,除盐冻干后,获得IHNV-G蛋白。利用该蛋白切胶回收对白兔进行免疫,获得抗体,进而建立间接酶联免疫方法检测传染性造血器官坏死病毒。研究结果:实验顺利的构建了重组质粒pET-30a-IHNV-G。经过IPTG诱导后,阳性重组菌株表达出IHNV-G蛋白。保证其他条件不变,在1 mmol/L诱导物、37℃条件下发酵4 h达到最佳效果,IHNV-G蛋白以包涵体形式表达,平均1 L发酵液纯化后得到7 g菌体及0.2～0.3 g蛋白干粉。纯化蛋白复性后进行动物免疫获得的抗体,应用间接ELISA技术,检测到抗血清对IHNV-G和IHNV的效价分别达到1:32000和1:16000,与其它对照病毒无交叉反应。与PCR检测结果符合率达到98%。结论本文建立的间接酶联免疫法方法具有良好的灵敏性和特异性,为IHNV的检测提供了快捷、高效的技术手段。为进一步建立传染性造血器官坏死病毒感染的胶体金免疫试纸条快速检测方法奠定了理论和实验基础。

关键词：传染性造血器官坏死病病毒 G蛋白表达条件分离纯化抗体间接ELISA检测

来源：评论

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虹鳟头肾和体肾在IHNV感染过程中免疫功能的比较研究

虹鳟头肾和体肾在IHNV感染过程中免疫功能的比较研究

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作者：孙汝涵华中农业大学

学位级别：硕士

肾脏是硬骨鱼重要的免疫器官，其在生命早期行使排泄功能，随后在发育的过程中肾脏分化成了头肾和体肾两个部分。头肾失去了排泄能力，发展成为硬骨鱼重要的内分泌和造血器官，体肾则主要执行渗透压调节和排泄功能。已有研究表明，虹鳟... 详细信息

肾脏是硬骨鱼重要的免疫器官，其在生命早期行使排泄功能，随后在发育的过程中肾脏分化成了头肾和体肾两个部分。头肾失去了排泄能力，发展成为硬骨鱼重要的内分泌和造血器官，体肾则主要执行渗透压调节和排泄功能。已有研究表明，虹鳟在小瓜虫和柱状黄杆菌感染后，头肾中炎症相关基因迅速出现显著上调，并且在感染后期，免疫球蛋白及B淋巴细胞表达量也显著增加，这表明了头肾中产生了强烈的先天和适应性免疫反应。但目前为止，关于鱼类头肾和体肾在抗病毒感染中免疫功能的比较研究尚未见报道。　　因此，本研究采用传染性造血器官坏死病病毒(Infectioushematopoieticnecrosisvirus,IHNV)来对虹鳟进行浸泡感染，通过qRT-PCR、免疫荧光、蛋白印迹和流式细胞术等技术，从分子、细胞和蛋白水平上系统阐明头肾和体肾免疫球蛋白及不同B细胞亚群在抗IHNV感染过程中的免疫应答规律及机制，揭示头肾和体肾在抗病毒感染中的功能异同，丰富鱼类肾脏的免疫理论，为今后硬骨鱼体肾功能的研究提供新的思路和挑战。主要实验及结果如下:　　1.通过浸泡感染IHNV,虹鳟在感染后出现眼球突出，鳃丝苍白，尾鳍出血等典型的病理症状。通过qRT-PCR对头肾和体肾病毒载量进行分析发现，在感染后的第7天，头肾和体肾中IHNV载量达到峰值，随后至感染后第28天，病毒载量逐渐降低。选择感染后第7天的头肾和体肾进行免疫荧光，检测到了IHNV阳性细胞，表明了在感染后第7天的头肾和体肾内存在着富集的病毒颗粒。　　2.通过石蜡切片及H&E染色，我们对病毒感染后的头肾和体肾进行组织病理学实验。我们的结果发现，在IHNV感染后，头肾和体肾均出现了显著的病理改变。头肾表现为淋巴索紊乱，血管积液以及血窦出血，病理变化从感染后第4天开始出现,至感染后第7天最为严重，随后病变程度有所恢复。体肾在感染后第4天出现肾小管上皮细胞轻微脱落，肾小球肿大以及间质细胞坏死出血等典型的病理改变，到感染后第7天病变程度最为严重，随后逐渐恢复。　　3.随后我们对IHNV感染后头肾和体肾中免疫相关基因的表达情况进行分子层面的探究。挑选了17个具有典型代表的免疫相关基因，包括抗病毒基因，炎症因子以及免疫球蛋白重链基因。通过对数据进行分析，我们发现在IHNV感染后的头肾和体肾中，大部分免疫相关基因存在相似的表达趋势，即在感染后第7天表达水平出现显著上调。值得注意的是，tnfa基因在体肾中的表达量要明显高于头肾。　　4.为了进一步探究头肾和体肾免疫应答的动态变化，我们进行了RNA-seq实验。与qRT-PCR的结果类似，在感染后的第7天，抗病毒基因及炎症因子的表达量在头肾和体肾中均出现了显著性上调。一些干扰素刺激基因如dhx58,mx2及vig1在体肾中的表达量明显高于头肾，这似乎表明在体肾内诱发了较头肾更为强烈的干扰素反应。通过KEGG通路富集分析，我们发现在感染后第7天的头肾和体肾中，免疫相关信号通路被主要富集，比如模式识别受体(PRRs)相关信号通路(TLR、NLR)及IL-17信号通路。而感染后的第28天，头肾和体肾中富集到的主要信号通路不同，头肾所涉及的信号通路大多与细胞及信号转导相关，体肾则与代谢相关。5.通过蛋白印迹，免疫荧光以及流式细胞术，我们从细胞和蛋白层面对头肾和体肾适应性免疫应答进行了比较探究。结果表明，相比于对照组，在IHNV感染后的头肾和体肾中，IgT及IgT+B细胞、IgM及IgM+B细胞的表达量均出现了显著性的上调。值得注意的是，在体肾中IgT及IgT+B细胞的变化较头肾更为显著，而在头肾中IgM及IgM+B细胞的变化趋势更为明显。通过EDU免疫荧光，我们发现IgT+及IgM+B细胞是由头肾和体肾自身增殖产生。综上所述，我们的结果表明了在头肾和体肾内发生了由B细胞介导的适应性免疫应答反应。

关键词：虹鳟肾脏传染性造血器官坏死病病毒抗病毒感染免疫功能

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虹鳟感染IHNV的组织学和血液细胞学规律研究

引用

畜牧兽医杂志 2019年第6期38卷 16-20页

作者：王琦张亚亚谈龙飞李久艳牛明强王建福甘肃农业大学动物科学技术学院

传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)感染是造成鲑鳟鱼类肝肾等造血组织病变坏死,组织缺血性急性死亡的重要原因,危害十分严重。为了阐明虹鳟感染IHNV发病后造血组织和血液细胞学变化规律,选择不同规格和发病程度的虹鳟进行了组织学和血液... 详细信息

传染性造血器官坏死病病毒(IHNV)感染是造成鲑鳟鱼类肝肾等造血组织病变坏死,组织缺血性急性死亡的重要原因,危害十分严重。为了阐明虹鳟感染IHNV发病后造血组织和血液细胞学变化规律,选择不同规格和发病程度的虹鳟进行了组织学和血液细胞学变化规律研究。结果表明:发病虹鳟肝脏组织严重贫血且水肿呈土黄色,石蜡切片,HE染色后可观察到病鱼肝脏组织大范围坏死,坏死细胞胞浆内可见嗜酸性病毒包涵体,出现不同程度的炎性细胞浸润。肾脏、肠上皮组织、心肌这些组织都发生不同程度坏死。发病鱼血细胞密度明显少于未发病鱼,而且红细胞沉降快、脆性高、比容相对较小。IHNV感染对虹鳟组织和血细胞造成了十分严重的影响。

关键词：虹鳟传染性造血器官坏死病病毒石蜡切片血液细胞学

来源：评论

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