检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：黃凱文臺灣大學

学位级别：博士

论述重点：免疫疗法及抗血管新生基因治疗在许多肝癌研究中都已经被证实对於小型肝癌有效，然而这些研究中所使用的动物模型常常不能真正反应人类肝癌的情境。这些动物肝癌常是植入肝癌细胞而长成之肿瘤，动物本身肝脏很健康。而人类肝... 详细信息

论述重点：免疫疗法及抗血管新生基因治疗在许多肝癌研究中都已经被证实对於小型肝癌有效，然而这些研究中所使用的动物模型常常不能真正反应人类肝癌的情境。这些动物肝癌常是植入肝癌细胞而长成之肿瘤，动物本身肝脏很健康。而人类肝癌一般是多发，体积较大，而且常常伴随有病毒性肝炎或是肝硬化。所以为了开发肝癌疗法之用，一个同时带有肝癌以及病毒性肝炎或是肝硬化的动物模型便显得非常重要。本研究首先利用土拨鼠来验证合并免疫疗法及抗血管新生基因治疗的鸡尾酒疗法是否有更好的疗效，慢性感染土拨鼠肝炎病毒之土拨鼠会自然产生肝癌，而这样的疾病表现非常接近人类肝癌。在土拨鼠模式上验证鸡尾酒疗法之後，我们进一步试图发展出一个同时具有肝硬化的肝癌模型。我们利用不同的诱发时间长短，而造成肝癌或是同时合并肝癌及肝硬化等两个不同动物模型，接着在同时带有肝癌及肝硬化的大鼠身上，我们使用表现干扰素α基因的重组腺病毒来进行同不对肝癌及肝硬化的基因治疗。方法本研究使用能表现抗血管新生因子（pigment epithelium-derived factor and endostatin）及细胞激素(granulocyte macrophage colony-stimulating factor and interleukin)的重组腺病毒来治疗土拨鼠肝癌。治疗後以腹部超音波或电脑断层扫瞄来进一步追踪肿瘤大小。为了进一步发展出带有肝硬化的肝癌动物模型，我们改良了传统上使用diethylnitrosamine (DEN)的诱发方法，根据动物体重变化，等比例调整药物在饮水中的浓度量，自六周龄之後连续喂食。这结果使得大白鼠在六周诱发後，便产生出多发肝癌，此时如果停止诱发，再六周後将回复正常肝脏机能。若动物喂药超过九周之後，此时除发展出肝癌外，同时会出现肝硬化的表现。这两种模式造成的肝癌数量及大小相当，不过肝脏之硬化程度差别很大。而且在肝硬化组中的动物，其肝脏纤维化为不可逆变化，非常接近人类疾病模式。而我们接下来则使用这样的动物模型来进行以腺病毒携带干扰素α的基因治疗，试图来同步治疗肝癌及肝硬化。结果我们的实验结果证实，抗血管新生基因治疗或是免疫治疗均能造成一定程度的抗肝癌疗效。而更进一步合并两者的鸡尾酒疗法，在不增加总腺病毒用量的条件下，比起任何单一成分基因疗法，更能得到加成的抗癌效益。特别是在大型肿瘤上，抗癌效益的增加更是明显。我们在接受免疫治疗的土拨鼠肿瘤内可看见大量CD3+ T淋巴球浸润，而在抗血管新生基因治疗组则观察到肿瘤内血管明显减少，而接受鸡尾酒疗法的土拨鼠肿瘤怎可看见两个情形兼而有之以外，更有比单一疗法更高的自然杀手细胞活性表现，以即便异议制分子的表现减少。至於肝硬化治疗部分，我们的研究结果证实，由於腺病毒容易感染肝细胞的特质，干扰素α基因治疗使得干扰素α大量局部表现於肝脏，而有统计意义地减少了肝肿瘤体积，同时减轻了大鼠肝硬化程度。在作用机制的探讨方面，我们发现干扰素α基因治疗能造成免疫调节抗细胞增殖，以及诱发肿瘤凋亡活动，而达到抑制肿瘤生长的目的。同时干扰素α治疗也能经由抑制transforming growth factor-β (TGF-β) 以及 tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1)表现，而造成肝纤维化的减轻。讨论免疫疗法与抗血管新生治疗的合并使用，展现出比任何一个单一疗法更强力的抗癌效益。这证实了合并这两个不同机制的基因治疗能达到加成的作用。而经过在土拨鼠这个如此贴近人类的动物模型上验证之後，我们可以期待将来可能在临床上成为一个辅助抗癌疗法，经由大幅缩小肿瘤，来增加手术切除率，改善病人治疗预後，或是延长生命。除了土拨鼠模型之外，我们发展出来的合并肝癌肝硬化之大鼠模型，也是一个研究肝癌治疗策略时，很理想的动物模式。而我们以干扰素α基因治疗来作为验证，同时也得到以腺病毒载体在肝内表现干扰素α一法能同步治疗肝癌及肝硬化的满意结果。

关键词：抗血管新生肝硬化基因治療肝細胞癌免疫療法干擾素α 土撥鼠

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1H-吲唑类VEGFR-2抑制剂和降解剂的设计合成及抗肿瘤活性研究

1H-吲唑类VEGFR-2抑制剂和降解剂的设计合成及抗肿瘤活性研究

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作者：王兴荣兰州大学

学位级别：博士

血管表皮生长因子受体-2（VEGFR-2）是一类重要的酪氨酸跨膜蛋白,与肿瘤血管新生、淋巴结转移和肿瘤干细胞侵袭等过程密切相关,是抗肿瘤药物研究的重要靶点之一。Sorafenib是最早上市的一款VEGFR-2抑制剂,由于临床用药中出现耐药性和口... 详细信息

血管表皮生长因子受体-2（VEGFR-2）是一类重要的酪氨酸跨膜蛋白,与肿瘤血管新生、淋巴结转移和肿瘤干细胞侵袭等过程密切相关,是抗肿瘤药物研究的重要靶点之一。Sorafenib是最早上市的一款VEGFR-2抑制剂,由于临床用药中出现耐药性和口服生物利用度低等问题限制了疗效。PROTAC靶向蛋白降解技术是研究最早,降解机制和E3泛素连接酶配体研究最为广泛的一种生物技术,而VEGFR-2-PROTAC降解剂研究较少。本论文以VEGFR-2为靶点,进行了1H-吲唑类VEGFR-2抑制剂和VEGFR-2-PROTAC降解剂的设计、合成及其体外抗肿瘤活性研究,并对活性化合物分别进行了类药性评价和作用机制初步研究。第一部分以VEGFR-2抑制剂Sorafenib结构为基础,基于三维构象匹配的骨架跃迁设计策略,设计了一类6-（1H-吡唑-4-基）-1H-吲唑-3-胺类化合物,并对其所在的溶剂暴露区、连接区和疏水性口袋三部分进行了结构修饰和优化。通过以2-氟-4-氰基-溴苯为原料,经过吲唑构环、Buchwald-Hartwig和Suzuki偶联等化学合成反应,合成了26个新型1H-吲唑类化合物。生物活性评价结果表明,目标化合物整体具有较好的体外酶抑制和细胞毒活性,其中化合物W13表现出良好的体外VEGFR-2酶抑制活性(IC50:1.6 nM),中等的HUVEC细胞抗增殖活性(IC50:7.15±2.26μM),尤其对人胃癌HGC-27细胞的抑制活性(IC50:0.36±0.11μM)是人正常GES-1细胞的500倍以上(IC50:187.46±10.13μM)。机制研究表明,W13可以浓度依赖性地调节HGC-27细胞中MMP-9和E-cadherin蛋白表达,抑制细胞迁移和侵袭;并引起细胞内ROS表达增加和凋亡蛋白Bax与Bcl-x L表达水平的改变,诱导细胞凋亡;还通过减少VEGFR-2磷酸化引起下游PI3K-Akt-m TOR通路传导阻断,抑制细胞存活;此外,在HUVEC细胞小管形成实验中也表现出良好的抗血管新生活性。类药性研究表明,化合物W13对人和鼠源肝微粒体具有适宜的代谢半衰期,并对CYP450的重要亚型CYP3A4无明显抑制作用;小鼠急性毒性实验表明W13的半数致死剂量LD50大于3000 mg/kg,并对小鼠心、肝、脾、肺和肾器官无明显组织和形态学特征改变,安全性较高;大鼠药代动力学评价实验表明W13的口服生物利用度为64.5%,具有较好的成药性。第二部分借助PROTAC靶向蛋白降解技术,通过计算机辅助药物设计对VEGFR-2蛋白表面Lys残基区域进行分类,基于蛋白结构的合理药物设计策略,以化合物W13及其衍生物W27和W28为弹头,以VH032为VHL E3泛素连接酶配体抑制剂,通过不同碳原子数的烷二酸或烷基哌嗪侧链经酰胺化反应将两种配体相连,设计并合成了6个系列共计25个VEGFR-2-PROTACs降解剂分子,并对其体外细胞毒活性和HGC-27细胞中VEGFR-2蛋白降解活性进行评价。化合物P7表现出良好的体外HGC-27细胞抗肿瘤活性(IC50:2.03±0.17μM),中等的HUVEC细胞抗增殖活性(IC50:7.07±1.97μM),以及对人正常HEK293T和GES-1细胞较低的毒性(IC50:14.47±1.68μM和19.97±0.14μM),且对HGC-27细胞中的VEGFR-2蛋白具有较好的降解活性(DC50:0.084±0.04μM,Dmax:73.7%)。VEGFR-2降解机制表明,P7可以时间依赖性地对HGC-27细胞中的VEGFR-2蛋白产生快速有效的降解,并在更换新鲜培养液后24 h内保持持久的降解效力;P7通过形成三元复合物经泛素蛋白酶体（UPS）途径产生降解;P7可以明显缩短VEGFR-2蛋白合成的半衰期,并对其翻译和转录过程中VEGFR-2m RNA的表达没有影响,说明P7只对胞内现有的VEGFR-2蛋白有降解作用。细胞机制研究表明,P7可以时间和浓度依赖性地抑制HGC-27细胞的集落形成、细胞迁移和侵袭,并显著诱导HGC-27细胞凋亡和G2/M期周期阻滞。此外,P7在HUVEC细胞中具有较好的蛋白降解活性(DC50:0.51±0.10μM,Dmax:76.6%)。总之,本论文首先基于三维构象匹配的骨架跃迁设计策略,发现一种吲唑类VEGFR-2抑制剂,尤以W13表现出良好的抗胃癌活性、安全性和成药性,并进一步将其发展为VEGFR-2-PROTAC降解剂,其中P7通过形成三元复合物经UPS途径有效降解VEGFR-2蛋白。本论文的研究成果为VEGFR-2抑制剂和降解剂的设计和研发提供了新思路,更为抗胃癌药物的发现提供了新策略和实验积累。

关键词： VEGFR-2 1H-吲唑 PROTAC降解剂抗肿瘤抗血管新生

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稳定的CPS11衍生物的临床前预研究

稳定的CPS11衍生物的临床前预研究

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作者：霍爱红天津大学

学位级别：博士

CPS11无论在体外活性评价还是在体内的药效学评价中,都表现出很高的抗肿瘤生长活性和抑制血管新生活性。但CPS11难以制备得到高纯度的产品,并且在放置过程中极其不稳定。因此,CPS11难以开发成临床上可用的药物。基于此,我们合成了一系列... 详细信息

CPS11无论在体外活性评价还是在体内的药效学评价中,都表现出很高的抗肿瘤生长活性和抑制血管新生活性。但CPS11难以制备得到高纯度的产品,并且在放置过程中极其不稳定。因此,CPS11难以开发成临床上可用的药物。基于此,我们合成了一系列CPS11的前药,通过溶液稳定性研究、溶解度研究、动物体内/体外代谢研究、动物组织分布研究和体内/体外药效学评价筛选得到化合物Ⅱ。化合物Ⅱ可制备成有机酸盐或无机酸盐,提高了化合物在水中的溶解度。化合物Ⅱ在溶液中的稳定性较CPS11大大提高。并且化合物Ⅱ在放置一年半后,HPLC测试显示纯度没有明显变化。化合物Ⅱ在动物体内可迅速代谢出活性物质CPS11和沙利度胺。化合物Ⅱ具有较好的生物利用度,小鼠灌胃给药和腹腔给药的生物利用度分别为60.7%和79.5%。化合物Ⅱ在体外不同生物样品中具有类似的代谢模式,可避免不同种属代谢差异而导致的活性或毒性差异,且引入基团为内源性的物质-烟酸,可降低或避免由于引入基团可能产生的毒副作用。体外活性评价结果表明化合物Ⅱ能够显著抑制ECV-304细胞的增殖活性,IC50为0.143μM;化合物Ⅱ在195μM的浓度下对人脐静脉内皮细胞小管形成抑制为91.9%。在鼠源黑色素瘤B16肺转移模型中,化合物Ⅱ能够显著抑制B16在动物肺部形成转移灶,抑制率为74%,并且对动物没有显著的毒性作用。在鼠源脑胶质瘤G422皮下肿瘤模型的药效实验中,化合物Ⅱ与BCNU联合用药组抑瘤率为71.14%,CDI为0.58;表明化合物Ⅱ与BCNU联合应用具有协同抑制肿瘤生长的作用。在人源乳腺癌MX-1裸鼠异体移植瘤模型中,化合物Ⅱ联合紫杉醇对肿瘤的生长抑制率为74.3%,CDI为0.4,体现出显著的协同作用,并且没有出现毒性的协同或相加作用。通过对化合物Ⅱ的一系列评价,化合物Ⅱ具备开发成药物的潜力。

关键词： CPS11 前药抗血管新生抗肿瘤药代动力学组织分布

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活性维生素D_3的抗肿瘤信号转导作用

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生命的化学 2009年第4期29卷 552-556页

作者：尹贻贞刘兆鹏山东大学药学院有机化学研究室济南250012

1α,25-(OH)2D3是维生素D在体内发挥生理作用的活性形式。活性维生素D3除了具有调节钙磷代谢的功能外,还对多种肿瘤有预防和治疗作用。活性维生素D3能够抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管新生以及对某些抗肿瘤药物具有... 详细信息

1α,25-(OH)2D3是维生素D在体内发挥生理作用的活性形式。活性维生素D3除了具有调节钙磷代谢的功能外,还对多种肿瘤有预防和治疗作用。活性维生素D3能够抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤血管新生以及对某些抗肿瘤药物具有协同增强作用,而这些活性都与其对肿瘤信号转导的作用密切相关。活性维生素D3可以通过多种途径和机制干扰肿瘤细胞的信号转导。本文对活性维生素D3的抗肿瘤信号转导作用进行综述。

关键词： 1α,25-(OH)2D3 抗肿瘤凋亡抗血管新生信号转导通路

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多靶点酪氨酸激酶抑制剂AL3810实验治疗甲状腺癌及机制研究

多靶点酪氨酸激酶抑制剂AL3810实验治疗甲状腺癌及机制研究

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作者：谢琴南昌大学

学位级别：硕士

甲状腺癌(Thyroid Cancer,TC)是内分泌腺系统中最常见的恶性肿瘤,目前其治疗主要以手术治疗、手术后放射性碘(Radioactive Iodine,RAI)治疗以及促甲状腺激素(Thyroid Stimulating Hormone,TSH)释放抑制治疗为主。尽管在过去的几十年研... 详细信息

甲状腺癌(Thyroid Cancer,TC)是内分泌腺系统中最常见的恶性肿瘤,目前其治疗主要以手术治疗、手术后放射性碘(Radioactive Iodine,RAI)治疗以及促甲状腺激素(Thyroid Stimulating Hormone,TSH)释放抑制治疗为主。尽管在过去的几十年研究表明,恶性甲状腺癌的治疗有新突破,已经有新的有效的药物和制剂出现,目前大部分晚期甲状腺癌病人对常规的放射性碘131的治疗并不敏感,且可供选择的治疗有限。因此,积极寻找有效的、新的治疗药物和治疗策略对提高甲状腺癌的疗效、改善患者的生存率及提高他们的生活质量具有重大意义。本课题通过体内外不同模型系统评价了小分子多靶点酪氨酸激酶抑制剂AL3810对甲状腺癌的实验治疗效果。结果显示,该化合物能显著抑制多种甲状腺癌细胞的体内外增殖。AL3810作用72或120小时后,可以剂量依赖性的抑制甲状腺癌细胞TT、TPC-1和SW579的增殖,IC50值分别为2.56?M、7.03?M和590 nM。在体内实验中AL3810对细胞株来源的人源甲状腺癌SW579、TT等裸小鼠皮下移植瘤也均具有显著的抑制作用。SW579模型中,AL3810以5 mg/kg连续口服给药三周抑制率可达97.57%左右,与索拉菲尼60 mg/kg实验治疗效果相当。更令人欣喜的是,在该模型中连续实验治疗三周后,停药两周该组肿瘤仍未有明显生长。我们还尝试模拟肿瘤后期给药,即当肿瘤生长至2000 mm3左右开始实验治疗,AL3810在此方案下依然能发挥很好的抑制肿瘤生长的效果。AL3810 10 mg/kg实验治疗组给药后小鼠所荷肿瘤明显缩小,五周时该组肿瘤平均体积已缩至300 mm3左右。同样,在另一个甲状腺癌TT模型中,AL3810 10mg/kg也能显著抑制TT裸小鼠皮下移植瘤的生长,给药处理28天后抑制百分数为66.15%,抑制作用优于Sorafenib 60 mg/kg和XL184 30 mg/kg。我们前期的研究结果表明AL3810是一个新生血管抑制剂,因此在以上甲状腺肿瘤的实验治疗中,我们以内皮细胞表面标记物CD34为检测指标,免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)考察其对肿瘤内新生血管生成的影响。结果显示AL3810能够显著降低瘤组织内微小血管的数目:当SW579裸小鼠移植瘤组织内AL3810给药剂量为5 mg/kg和10 mg/kg时,瘤组织CD34表达量分别下降了81.88%和92.83%;TT模型中结果类似,AL3810给药剂量为0.4、2和10 mg/kg时,瘤组织内CD34表达量分别下降了59.06%、63.78%和81.10%。这些结果显示该化合物的抗甲状腺肿瘤活性与其抗血管新生能力密切相关。流式细胞仪的检测结果展示,AL3810可浓度依赖和时间依赖地阻滞甲状腺癌细胞于G1期,并诱导细胞发生凋亡,最终导致甲状腺癌细胞死亡。0.5?M AL3810作用48小时即可诱导约20%的SW579细胞发生凋亡。我们进一步检测裸小鼠甲状腺癌皮下移植瘤在AL3810作用后的情况。免疫组化染色凋亡标记物TUNEL结果显示,无论是TT模型还是SW579模型中,AL3810作用后,瘤组织中TUNEL染色阳性率具有显著升高。在SW579模型中,当AL3810剂量为0.4、2和10 mg/kg时,凋亡率分别为4.66%、22.00%和36.00%;TT模型中,凋亡率则分别为6.66%、13.66%和22.66%。再次证实AL3810确实可引起甲状腺癌细胞发生凋亡。同样该化合物还可引起细胞周期阻滞的发生,AL3810 1?M作用24小时,64.2%的SW579细胞被阻滞处于G1期。相应的Western Blot结果则表明,在AL3810处理后,与G1期阻滞相关的周期调控蛋白如p21和p27的表达量显著上升,而蛋白CyclinD1、CDK2和P-Rb的表达量则显著下调,这与流式周期的结果一致。AL3810的前期研究结果提示,该化合物在分子水平可抑制RET磷酸化的发生。鉴于RET在甲状腺癌发生发展中的重要作用,我们进一步考察该化合物是否通过抑制RET信号通路而抑制RET依赖的人甲状腺癌细胞的体内外生长。我们首先选用转染RET的Ba F3工具细胞考察。结果表明,AL3810能显著抑制转染RET的BaF3的体外增殖,可阻滞细胞于G1期,并诱导细胞发生凋亡,但对亲本细胞BaF3的生长则无明显影响。Western Blot结果证实,该化合物能显著抑制BaF3-RET以及人源甲状腺癌细胞TT和TPC-1细胞内RET磷酸化的发生,同时下调其下游蛋白AKT、ERK1/2以及STAT3的磷酸化。以上结果表明,该化合物在分子水平和细胞水平对RET信号通路均有抑制作用。综上,AL3810能够

关键词： AL3810 RET 抗血管新生甲状腺癌多靶点酪氨酸激酶抑制剂

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载有姜黄素之多功能脂质/PLGA复合型微米粒子与明胶支架于角膜内皮再生之应用

载有姜黄素之多功能脂质/PLGA复合型微米粒子与明胶支架于角膜内...

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作者：李佩蓁国立清华大学

学位级别：硕士

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关键词：角膜内皮角膜移植姜黄素抗氧化抗发炎抗血管新生

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新型2-甲氧基雌二醇衍生物抗肿瘤血管生成活性的研究

新型2-甲氧基雌二醇衍生物抗肿瘤血管生成活性的研究

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作者：杨腾蛟郑州大学

学位级别：硕士

目的研究2-ME及其衍生物的抗血管生成作用,从衍生物中,筛选具有抗血管生成活性好,并且毒性小的新型化合物,为临床上治疗癌症联合辅助用药提供研究依据。方法1.利用体内抗血管生成模型鸡胚尿囊膜法,筛选2-ME衍生物;2.采用MTT法检测筛选... 详细信息

目的研究2-ME及其衍生物的抗血管生成作用,从衍生物中,筛选具有抗血管生成活性好,并且毒性小的新型化合物,为临床上治疗癌症联合辅助用药提供研究依据。方法1.利用体内抗血管生成模型鸡胚尿囊膜法,筛选2-ME衍生物;2.采用MTT法检测筛选出的化合物GHY对多种细胞的细胞毒作用;3.采用划痕实验,检测化合物GHY在体外对HUVEC和MCF-7细胞的迁移的影响;4.运用Transwell小室迁移实验,检测化合物GHY对HUVEC和MCF-7细胞的迁移和侵袭的影响;5.采用Western blot法考察相关蛋白,确定化合物GHY抑制迁移侵袭作用的分子机制;6.利用裸鼠移植瘤实验,考察化合物体内抗肿瘤活性的研究,并检测血清中与肝功能相关的酶以及对内脏组织HE染色,评价化合物毒性。结果1.鸡胚尿囊膜实验结果显示,衍生物中GHY等化合物在血管数及血管面积上与对照组比较,具有统计学意义(P<0.05)。2.用2-ME和化合物GHY分别处理HUVEC细胞、GES细胞、MCF-7细胞、MGC-803细胞、PC-3细胞48h和72h,MTT结果显示,2-ME对多种细胞均有细胞毒作用,而化合物GHY则未表现出明显的细胞毒作用,其中GHY对HUVEC细胞72h的IC50为66μM,而2-ME的72h IC50为2.11μM。3.对HUVEC细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验结果显示,化合物GHY可以显著抑制血管内皮细胞的迁移,结果具有统计学差异(P<0.05)。*** blot实验检测HUVEC细胞中有关蛋白的表达,包括VEGF-R、FAK、p-FAK、和SHC等。化合物GHY处理后,VEGF-R的蛋白表达下降,相应的SHC蛋白也减少,而FAK总蛋白不变,但FAK的活性形式p-FAK表达下调,最终抑制内皮细胞的转移。对蛋白表达量进行统计学分析,与对照组比较,GHY组具有统计学差异。***-7细胞划痕实验和Transwell小室迁移实验结果显示,化合物GHY可以显著抑制肿瘤细胞的迁移,并且呈浓度依赖性,结果具有统计学差异(P<0.05)。6.在MCF-7细胞上,Western blot实验检测有关EMT标志蛋白的表达,结果显示,化合物GHY处理后,可以上调上皮表型标志物ZO-1和E-Cadherin蛋白的表达,同时下调间充质标志物N-Cadherin和Vimentin蛋白的表达。统计学分析蛋白量的表达,具有统计学差异(P<0.05)。说明化合物GHY抑制MCF-7细胞迁移的机制可能通过抑制EMT过程。***-7细胞的裸鼠移植瘤实验结果显示,化合物GHY高剂量组可以抑制肿瘤体积和瘤重的增加,与对照组比较,具有统计学差异。表明,化合物GHY具有较好的体内抑制肿瘤生长的作用。8.通过生化学实验评价肝脏毒性以及各脏器的HE染色的病理切片结果表明,化合物GHY对ALT和ALP的值没有显著影响,而阳性对照5-FU组则表现一定的肝毒性。对AST的值,与对照组比较,有一些影响,但是都属于正常值范围内。内脏HE染色的病理表明,化合物GHY对内脏组织无明显可见的损害。因此,化合物GHY在体内也不表现明显毒性。结论综上所述,2-ME衍生物GHY可以明显的抑制体内血管的新生,并且具有较低的细胞毒作用,GHY可以显著的抑制HUVEC细胞的迁移,抑制HUVEC细胞的迁移的机制可能是通过抑制VEGFR通路中相关转移蛋白的表达来实现的。对于肿瘤细胞的作用方面,化合物GHY可以抑制肿瘤细胞MCF-7细胞的转移与侵袭,其机制可能是通过抑制EMT相关蛋白的表达来实现的。体内试验,GHY作用于MCF-7细胞裸鼠移植瘤,可以显著抑制瘤组织的生长,且无明显的毒性。

关键词： 2-ME 抗血管新生细胞迁移毒副作用

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低浓度的长春花碱对血管内皮细胞的增殖、趋化和管样结构生成的作用

低浓度的长春花碱对血管内皮细胞的增殖、趋化和管样结构生成的作...

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作者：徐晋小浙江大学

学位级别：硕士

肿瘤的血管新生(angiogenesis)在肿瘤的生长、侵袭和转移中起着重要的作用。血管新生是一个复杂的多步骤的过程，包括血管内皮细胞的增殖(proliferation)、血管内皮细胞的趋化(chemotaxis)、血管内皮细胞在细胞外基质中管样结构的生成 (... 详细信息

肿瘤的血管新生(angiogenesis)在肿瘤的生长、侵袭和转移中起着重要的作用。血管新生是一个复杂的多步骤的过程，包括血管内皮细胞的增殖(proliferation)、血管内皮细胞的趋化(chemotaxis)、血管内皮细胞在细胞外基质中管样结构的生成 (tubular morphogenesis)。研究证明阻断血管新生过程的一个或多个步骤，就有可能达到抑制血管生成的目的。通过抑制肿瘤内的血管新生，就可以抑制肿瘤的生长、侵袭和转移。由于这种治疗方案的靶目标定位在药物能够直接到达的血管内皮细胞上，所以药物用量较小，因此副作用也小。而且内皮细胞的基因较肿瘤细胞要稳定，不易产生耐药性。所以通过抗血管新生来治疗肿瘤是一个很有前途的治疗策略，它避免了传统化疗方案所导致的毒副作用大和肿瘤易耐药的问题，已经成为肿瘤治疗的新的研究热点。五十年代有细胞毒性的化疗药物被提出用于治疗肿瘤。本着尽可能多地杀死肿瘤细胞的原则，临床上用最大耐受剂量(MTD，Maximum Tolerance Dose)来治疗病人。然而几十年的临床实践证明由于化疗药物的毒副作用和肿瘤耐药的产生，这种旨在杀伤肿瘤细胞的治疗方案并没有达到人们预期的目的。最近研究发现长春花碱、环磷酰胺、博来霉素等一些传统的化疗药物在改变了治疗方案后有抑制血管新生的作用。实验证明传浙江大学硕士学位论文统化厅药物的抗血管新生方案能提高治疗肿瘤的效力。但这些药物的作用机理还不是恨清楚。本实验通过观察不同浓度的长春花碱对血管内皮细胞的增殖、血管内皮细胞的趋化、血管内皮细胞在细胞外基质中管样结构生成的作用，以此探索氏春花碱抑制血管新主的机理和合适的治疗剂量，为制定更完备的肿瘤治疗策略提供实验依据。实验方法： l 低浓度的长春花碱对血管内皮细胞增值的作用主长良好的 ECV－304稀释成密度为 IX 10‘／ml的细胞悬液，以每孔 200微升的量加入96孔培养扳中，放入细胞培养箱温育24小时后分组处理。实验共分5组，每组共6 个复孔。未加药组：正对照组：加药组：氏春花碱的浓度分别为of微克／升、2．5微克升、5微克／升、10微克／升。将 96孔培养扳放入细胞培养箱内温育 48小时。48小时后每孔加／＼5毫克’毫升的NITT20微升，放入细胞培养箱作用4小时后去上渭液，每孔加D卜ISO （二甲基亚矾）150微升，振荡10分钟，酶际仪490urn处读数。数据处理。二．低浓度的长春花碱对ECV－304趋化的影晌生氏良好的 ECV－304用浓度分别为 0月微克／升、2、5 微克／升、5微克／升、10微克．升的长春花碱处理24小时。Bo｝den ／J’至的下室加入条件培养基，盖上覆有Matrteel（人工基匣膜）的硝酸纤维滤膜，上室帕入经不同浓度的长春花碱处理过和未经药物处理的纸胞悬液 400微升。将装配好的 Bo｝den小室放入细胞培养箱。温育 IZ小时后将硝酸纤维滤膜叹出，去除膜上面的细胞，然后将膜固定、染色、计数穿过膜的细胞数。 3 低浓度的长春花碱对血管内皮细胞在Matrigel（人工基底膜）中管样结构生成的影响浓度为 17g／L MatFbeel以每孔 250微升的量加入 24孔培养扳中，放入 37oC细胞培养箱聚合30分钟。生长良好的ECV．304稀释成密度为IX 10’／ml的细胞悬液，以每孔1M 的量加入底部己铺有Matrigel的24孔培养扳中。实验分5组，每组共4个复孔：未加药组即正对照组：加药组：长春花碱的浓度分别为：***克／升、工5微克／升、5微克／升、．2－浙江大学硕士学位论文川微分升。随即将 24孔培养扳放入细胞培养箱温育 8小时。然后将 24孔培养饭拿出在倒宜显微镜下观察ECV－304管样结构生成的情况。结果： 1 长春花碱抑制ECV－304增殖的敏感浓度范围低浓度的长春花碱对EC＼／。304增值有影响，陋长春花碱的浓度的增加，其抑制

关键词：长春花碱血管新生血管生成抑制剂内皮血管抗血管新生

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重组人内皮抑素—恩度对裸鼠宫颈癌移植瘤生长、转移影响的研究

重组人内皮抑素—恩度对裸鼠宫颈癌移植瘤生长、转移影响的研究

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作者：刘敏河北医科大学

学位级别：硕士

目的1观察恩度、恩度与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤生长及转移的影响。2观察恩度对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤的血管新生、淋巴管新生的抑制作用及对肿瘤细胞超微结构的影响。3检测恩度对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤的... 详细信息

目的 1观察恩度、恩度与顺铂联合应用对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤生长及转移的影响。 2观察恩度对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤的血管新生、淋巴管新生的抑制作用及对肿瘤细胞超微结构的影响。 3检测恩度对宫颈癌Hela细胞裸鼠移植肿瘤的血管内皮生长因子-A,C,D(VEGF-A, VEGF-C, VEGF-D)表达情况的影响。方法 1荷瘤裸鼠模型的建立雌性5～6周龄的裸鼠饲养在清洁级环境中,常规收取表达荧光素酶的Hela细胞(精诺真公司惠赠),制备细胞悬液(2.5×107/ml)。抽取0.2ml细胞悬液(5×106)接种在裸鼠左侧肋腹部皮下,一般到接种后4天出现肉眼可见的肿瘤,模型建立成功。 2实验分组待皮下肿瘤生长到长径约0.7cm时,将裸鼠随机分为五组,每组8只。五组分别为:对照组(生理盐水组)、顺铂组、恩度组(10mg/kg)、小剂量恩度(10mg/kg)联合顺铂组、大剂量恩度(20mg/kg)联合顺铂组。恩度隔1日瘤周皮下给药一次,顺铂隔3日腹腔给药一次,疗程4周。 3移植肿瘤生长情况的检测应用“精诺真体内成像系统”测量肿瘤的发光光子总数。待裸鼠皮下肿瘤生长到长径约0.7cm时,开始照相。在照相前,每只裸鼠腹腔内注射荧光素(150mg/kg),注射15分钟以后,应用异氟烷麻醉。麻醉成功后,将裸鼠放入成像装置,调整好体位,照相。之后每周照相一次。 4治疗4周后,应用麻醉药水合氯醛处死裸鼠。取出肿瘤组织,称重后按照不同的用途处理肿瘤组织,一部分用作光镜标本应用4%多聚甲醛固定,一部分用作电镜标本应用4%戊二醛固定。 5分别用CD34作为血管标记物,LYVE-1作为淋巴管标记物,采用免疫组织化学法检测移植瘤的微血管密度和微淋巴管密度。免疫组织化学法分别检测移植瘤中VEGF-A, C, D的表达情况。 6透射电镜观察裸鼠肿瘤细胞超微结构的变化。结果 1恩度对裸鼠移植瘤生长情况的影响应用“精诺真体内成像系统”评价裸鼠肿瘤的活性,根据每次测量的光子数绘制肿瘤生长曲线,了解肿瘤的生长、变化情况。到实验结束时,我们发现恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组光子数比单用顺铂组和生理盐水组明显减少(P<0.05),但是恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间没有差异(P >0.05)。 2恩度对裸鼠一般情况的影响用药物后顺铂组裸鼠活动明显减少,饮食量下降,体重减轻,持续到实验结束。生理盐水组、恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组裸鼠体重一直持续增长至实验结束。 3恩度对裸鼠淋巴结转移的影响实验结束,解剖裸鼠时在肿瘤的附近可以发现淋巴结转移。石蜡切片HE染色证实为癌转移。大剂量恩度联合顺铂组、小剂量恩度联合顺铂组、恩度组、顺铂组、生理盐水组裸鼠肿瘤淋巴结转移率分别为0%(0/8)、12.5%(1/8)、12.5%(1/8)、62.5%(5/8)、75%(6/8)。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组淋巴结转移率比单用顺铂组和生理盐水组明显降低(P<0.05)。 4恩度对裸鼠肿瘤微血管密度(MVD)的影响以CD34作为血管内皮细胞的标志物,血管内皮细胞的胞浆被染成棕黄色。大剂量恩度联合顺铂组、小剂量恩度联合顺铂组、恩度组、顺铂组、生理盐水组裸鼠肿瘤MVD平均值分别为10.88±1.38、10.25±1.22、10.83±2.29、15.58±2.31、22.08±1.93。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组MVD与单用顺铂组和生理盐水组差异有统计学意义(P<0.05)。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间差异无统计学意义(P>0.05)。 5恩度对裸鼠肿瘤微淋巴管密度(MLD)的影响以LYVE-1作为淋巴管内皮细胞的标志物,淋巴管内皮细胞的胞浆被染成棕黄色。大剂量恩度联合顺铂组、小剂量恩度联合顺铂组、恩度组、顺铂组、生理盐水组裸鼠肿瘤MLD平均值依次为5.00±0.63、5.17±0.75、6.00±0.63、14.33±1.63、13.67±1.21。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组MLD与单用顺铂组和生理盐水组比较有统计学差异(P<0.05)。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组之间无统计学差异(P>0.05)。 6恩度对裸鼠肿瘤表达VEGF-A, C, D的影响VEGF-A, C, D均表达在肿瘤细胞的细胞质中,显示为棕黄色的颗粒。恩度组、小剂量恩度联合顺铂组和大剂量恩度联合顺铂组VEGF-A, C,

关键词：恩度宫颈癌抗血管新生抗淋巴管新生凋亡血管内皮生长因子-A 血管内皮生长因子-C 血管内皮生长因子-D

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uPAR系统与肿瘤细胞转系关系的机理探讨以及相关抗肿瘤策略研究

uPAR系统与肿瘤细胞转系关系的机理探讨以及相关抗肿瘤策略研究

引用

作者：林玉丽南京大学

学位级别：硕士

尿激酶受体(uPAR)在体内多种细胞表达，是细胞表面的一个多功能受体，介导尿激酶催化的纤溶酶原活化与纤溶过程，在肿瘤侵润和转移、炎症与血栓形成中具有重要作用。本实验主要研究其胞内信号传导与肿瘤转移的关系。我们通过Co-IP实验发... 详细信息

尿激酶受体(uPAR)在体内多种细胞表达，是细胞表面的一个多功能受体，介导尿激酶催化的纤溶酶原活化与纤溶过程，在肿瘤侵润和转移、炎症与血栓形成中具有重要作用。本实验主要研究其胞内信号传导与肿瘤转移的关系。我们通过Co-IP实验发现uPAR与热休克蛋白70(HSP70)有相互作用，并能与热休克蛋白(HSP40)形成一个复合物。我们发现:干扰HSP40，HSP70表达能抑制uPAR基因及蛋白的表达，并进而抑制uPAR介导的细胞迁移与粘附作用。\n ATF（uPA的N端片段）即不影响肿瘤细胞生长，也不能诱导肿瘤细胞凋亡，在uPAR高表达的细胞株中，它能提供准确的肿瘤及微血管靶向性，从而特异性抑制uPA-uPAR介导的细胞迁移、胞外基质水解、信号传导及粘附。由于ATF抗肿瘤活性有限，本文中，我们将ATF与抗肿瘤中药化合物雷公藤内酯醇(Trip)联用治疗肿瘤。雷公藤内酯醇(Trip)是雷公藤(Tripterginum WilfordiiHook.F)中的二萜类三环氧内酯化合物，具有抗炎、抗肿瘤、抗生育等多种活性。雷公藤内酯醇能抑制肿瘤细胞生长，诱导肿瘤细胞凋亡的活性。考虑到雷公藤内酯醇的生理毒性，本研究采用了较低的剂量雷公藤内酯醇与ATF联合使用。本论文通过MTT、流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡实验发现:两种药物联用以后，雷公藤内酯醇依然保持其抑制肿瘤生长及诱导凋亡的能力。Transwell实验显示:ATF，Trip都能抑制内皮细胞迁移，二者联用以后抑制效果更为显著。同时我们对二者联用后抑制迁移的信号通路进行了初步研究，发现主要通过抑制FAK磷酸化从而抑制细胞迁移。通过建立裸鼠结肠癌动物模型中，我们发现ATF，Trip联用治疗可以极显著抑制肿瘤生长，并且其肿瘤倍增时间显著延长。\n 另外，论文还在酵母中表达和纯化了内皮血管抑制剂Vasostatin，对其生物学活性进行了研究。本论文实现了Vasostatin在毕赤酵母中的诱导型胞外分泌表达，其纯度超过90％，产量达12 mg·L-1。MTT实验表明:重组Vasostatin能够抑制内皮细胞增殖，其IC50为20 nM，并在肿瘤动物实验中显著抑制人A549肿瘤的生长，21天时的抑瘤率达到67.6±12.5％，肿瘤倍增时间约延长了36.7±3.3％，并且表现出很好的抑制微血管生成的生物活性。

关键词：尿激酶受体雷公藤内酯醇抗血管新生肿瘤细胞生物学活性

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