检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：郭予琦田曾元张佳夜席宇王智慧 450001 河南省郑州市科学大道100号

本发明公开了棘孢木霉ACC脱氨酶毕赤酵母表达载体、构建方法及其蛋白表达方法，该毕赤酵母表达载体是将棘孢木霉的ACC脱氨酶基因和质粒pPIC9K连接后，转化毕赤酵母构建而成。本发明克隆了棘孢木霉KpS的acdS基因，构建含有acdS基因的重... 详细信息

标准号: CN105543267A

本发明公开了棘孢木霉ACC脱氨酶毕赤酵母表达载体、构建方法及其蛋白表达方法，该毕赤酵母表达载体是将棘孢木霉的ACC脱氨酶基因和质粒pPIC9K连接后，转化毕赤酵母构建而成。本发明克隆了棘孢木霉KpS的acdS基因，构建含有acdS基因的重组质粒，并电转化毕赤酵母，最终在甲醇的诱导下利用毕赤酵母成功表达了ACC脱氨酶，为利用酵母作为生物反应器工业化生产ACC脱氨酶提供了技术支持。该技术通过生产ACC脱氨酶，利用ACC脱氨酶增强植物的抗旱性和耐盐性。

关键词：毕赤酵母棘孢木霉毕赤酵母表达载体构建基因生物反应器质粒pPIC9K 蛋白表达构建方法技术支持重组质粒电转化抗旱性耐盐性甲醇酵母诱导克隆连接表达转化公开成功增强生产

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一种优化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体

一种优化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体

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作者：聂金梅李阳源胡爱红钟开新周银华 519060 广东省珠海市南屏科技工业园屏北一路8号

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及优化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体。本申请对核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示的β-甘露聚糖酶基因进行改造，得到优化基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.3所示。构建了优化β-甘... 详细信息

标准号: CN103898133B

本发明涉及基因工程领域，具体地，本发明涉及优化的β-甘露聚糖酶基因MAN及其毕赤酵母表达载体。本申请对核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示的β-甘露聚糖酶基因进行改造，得到优化基因的核苷酸序列如SEQ？ID？NO.3所示。构建了优化β-甘露聚糖酶基因的重组毕赤酵母表达载体并将其转化到毕赤酵母感受态细胞X33中筛选得到高效表达β-甘露聚糖酶的转β-甘露聚糖酶毕赤酵母菌株；酶学性质测定表明，优化的β-甘露聚糖酶基因能在毕赤酵母中稳定、高效的表达及遗传，所表达的β-甘露聚糖酶酶活性以及稳定性显著高于原始β-甘露聚糖酶基因毕赤酵母中所表达的β-甘露聚糖酶的酶活性及稳定性。

关键词：甘露聚糖酶基因甘露聚糖酶毕赤酵母酶活性重组毕赤酵母表达载体表达毕赤酵母感受态细胞毕赤酵母表达载体优化毕赤酵母菌株的核苷酸序列核苷酸序列高效表达基因工程酶学性质优化基因构建测定涉及遗传筛选原始申请转化改造表明稳定进行

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一种采用生物技术利用毕赤酵母和酿酒酵母为表达载体的酶的生产方法

一种采用生物技术利用毕赤酵母和酿酒酵母为表达载体的酶的生产方...

引用

作者：不公告发明人 150040 黑龙江省哈尔滨市香坊区香滨路4号中北春城三期60栋

本发明公开了一种采用生物技术利用毕赤酵母和酿酒酵母为表达载体的酶的生产方法。所述的步骤是：1.克隆基因:从天然的产木质素过氧化物酶、产猛过氧化物酶、产漆酶的天然菌株中克隆过氧化物酶、猛过氧化物酶和漆酶基因；2.获得构建表... 详细信息

标准号: CN105400746A

本发明公开了一种采用生物技术利用毕赤酵母和酿酒酵母为表达载体的酶的生产方法。所述的步骤是：1.克隆基因:从天然的产木质素过氧化物酶、产猛过氧化物酶、产漆酶的天然菌株中克隆过氧化物酶、猛过氧化物酶和漆酶基因；2.获得构建表达载体的启动子，重组序列，信号肤，转录终止子序列和抗性基因序列；3.分别构建含这三种基因表达框架的毕赤酵母表达载体和酿酒酵母表达载体；4.通过电转化方法将以上构建的毕赤酵母表达载体转化毕赤酵母；5.分别发酵以上构建的毕赤酵母工程菌和酿酒酵母工程菌生产重组混合木质素过氧化物酶、猛过氧化物酶和漆酶。

关键词：过氧化物酶构建毕赤酵母表达载体木质素过氧化物酶毕赤酵母表达载体漆酶酿酒酵母表达载体毕赤酵母工程菌酿酒酵母工程菌抗性基因序列转录终止子分别发酵基因表达克隆基因酿酒酵母漆酶基因生产重组天然菌株重组序列电转化启动子天然的序列和一种生物技术克隆混合转化公开

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优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用

优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用

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作者：李阳源何小梅周银华钟开新黄江陈丽芝刘丹妮刘金山唐业 519060 广东省珠海市南屏科技工业园屏北一路8号

本发明涉及基因工程领域，具体涉及优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用。基于SEQ？ID？NO.2植酸酶的第10位，第70位，第142位，第159位和第255位中至少一个氨基酸被替换。本发明利用基因工程手段对大肠杆菌来源的植酸酶衍生体和... 详细信息

标准号: CN105219749A

本发明涉及基因工程领域，具体涉及优化改良的植酸酶突变体及其编码基因和应用。基于SEQ？ID？NO.2植酸酶的第10位，第70位，第142位，第159位和第255位中至少一个氨基酸被替换。本发明利用基因工程手段对大肠杆菌来源的植酸酶衍生体和毕赤酵母表达载体进行改良，以得到耐高温、高酶活植酸酶的毕赤酵母生产菌。本发明的经过改良的植酸酶在热稳定方面更优势。同时，该菌株生产植酸酶的产量也得到了大幅度的提高，其在180小时的发酵酶活达到25400U/mL，比改造前的植酸酶生产菌提高59.8％。因此，本发明的优化改良的植酸酶可在饲料工业中显示出巨大的应用潜力。

关键词：植酸酶改良基因工程生产菌毕赤酵母表达载体植酸酶突变体大肠杆菌毕赤酵母编码基因饲料工业发酵酶高酶活耐高温热稳定衍生体氨基酸菌株优化替换应用涉及改造显示生产进行

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生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法

生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法

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作者：张爱联张泽华张添元易国辉 571101 海南省海口市学院路4号中国热带农业科学院热带生物技术研究所

本发明公开了生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法。属生物技术领域。首先克隆木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β-葡萄糖苷酶基因；构建含这三种酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌表达载体和毕赤酵母表达载体... 详细信息

标准号: CN102719459B

本发明公开了生产葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的方法。属生物技术领域。首先克隆木霉的葡聚糖内切酶基因、葡聚糖外切酶基因和β-葡萄糖苷酶基因；构建含这三种酶基因表达框架的枯草芽孢杆菌表达载体和毕赤酵母表达载体；将表达载体转化相应的宿主菌；分别筛选高表达葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶的枯草芽孢杆菌重组子和毕赤酵母重组子作为工程菌。发酵枯草芽孢杆菌工程菌和毕赤酵母工程菌生产的重组混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶。本发明解决了用天然菌株生产混合葡聚糖内切酶、葡聚糖外切酶和β-葡萄糖苷酶中遗留的酶产量低的关键问题，有利于降低其酶产品的价格。

关键词：葡聚糖外切酶葡萄糖苷酶葡聚糖内切酶枯草芽孢杆菌表达载体工程菌毕赤酵母表达载体葡聚糖内切酶基因毕赤酵母工程菌毕赤酵母重组子酶基因表达天然菌株重组混合高表达克隆木酶产量酶产品宿主菌重组子基因构建生产发酵生物技术混合筛选遗留转化公开解决

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一种产鸡溶菌酶的基因工程菌及其构建与应用

一种产鸡溶菌酶的基因工程菌及其构建与应用

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作者：王向东宗臣林剑单守水 264000 山东省烟台市高新区科技大道39号山东国际生物科技园内

本发明公开了一种产鸡溶菌酶的基因工程菌及其建方法与应用，公开了一株产鸡溶菌酶的基因工程菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年5月5日，保藏号为CGMCC？No.10780。本发明采用重组DNA技术将鸡(Ga... 详细信息

标准号: CN105039189A

本发明公开了一种产鸡溶菌酶的基因工程菌及其建方法与应用，公开了一株产鸡溶菌酶的基因工程菌，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏日期为2015年5月5日，保藏号为CGMCC？No.10780。本发明采用重组DNA技术将鸡(Gallus？gallus)的溶菌酶(lysozyme)cDNA克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA，并转化毕赤酵母X-33，经筛选鉴定得到一株产高活性鸡溶菌酶的重组毕赤酵母x-33pPICZαA-α-lysozyme。该菌株表达的鸡溶菌酶在摇瓶中的酶活为5000-7000u/ml，为鸡溶菌酶的大规模生产奠定了良好的基础。

关键词：鸡溶菌酶基因工程菌保藏毕赤酵母表达载体微生物菌种保藏毕赤酵母X-33 重组毕赤酵母重组DNA技术菌株表达筛选鉴定保藏号高活性溶菌酶酶活摇瓶一种微生物公开连接转化普通应用管理中国

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一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其制备方法与应用

一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其制备方法与应用

引用

作者：陈新华汪玉华敖敬群 361005 福建省厦门市思明区大学路178号

一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其制备方法与应用，涉及大黄鱼抗菌肽基因。克隆基因全长cDNA序列，扩增出基因片段，再克隆到毕赤酵母表达载体，构建得重组表达载体；将经线性化的重组表达载体电击转化巴斯德毕赤酵母SMD1... 详细信息

标准号: CN103224893B

一种大黄鱼抗菌肽hepcidin基因酵母表达产物及其制备方法与应用，涉及大黄鱼抗菌肽基因。克隆基因全长cDNA序列，扩增出基因片段，再克隆到毕赤酵母表达载体，构建得重组表达载体；将经线性化的重组表达载体电击转化巴斯德毕赤酵母SMD1168菌株，经筛选及基因组PCR扩增鉴定得巴斯德毕赤酵母SMD1168/pPICZαA-hepcidin，将表达载体电击转化巴斯德毕赤酵母SMD1168菌株，作为对照菌株，在培养基中经诱导、培养，离心收集上清，在上清中得到分泌型表达；纯化该重组蛋白：在上清中加入NaCl至终浓度为0.2M，上清液过滤，上柱，过柱，再洗脱目的蛋白，纯化后的蛋白透析，即得。

关键词：巴斯德毕赤酵母上清大黄鱼抗菌肽重组表达载体电击转化菌株毕赤酵母表达载体经线全长cDNA序列分泌型表达表达载体基因片段酵母表达克隆基因离心收集目的蛋白制备方法重组蛋白培养基对照菌基因组上清液终浓度构建过柱扩增上柱透析洗脱一种中经过滤诱导蛋白克隆筛选基因鉴定应用涉及加入培养

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表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用

表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用

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作者：聂金梅李阳源周银华陈丽芝刘金山李天碧 519060 广东省珠海市南屏科技工业园屏北一路8号

本发明涉及基因工程领域，具体涉及表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus？niger？GIM？3.452(CICC？2377)的葡萄糖氧化酶(GOD)基因(Genebank... 详细信息

标准号: CN105002147A

本发明涉及基因工程领域，具体涉及表达量提高的突变葡萄糖氧化酶及其编码基因和应用，其氨基酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。本发明采用定点突变技术将黑曲霉Aspergillus？niger？GIM？3.452(CICC？2377)的葡萄糖氧化酶(GOD)基因(Genebank:FJ979866.1)进行定点突变，使其氨基酸序列突变位点为Y76C和Q279K；将突变基因克隆连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA，转化Pichia？pastoris？X33，筛选得到表达量提高的葡萄糖氧化酶毕赤酵母菌株***？X33-pPICZαA-GODmut；酶学性质测定表明，突变的葡萄糖氧化酶基因能在毕赤酵母中稳定、高效的表达及遗传，突变菌株所表达的葡萄糖氧化酶的酶活性以及稳定性显著高于出发菌株。这为葡萄糖氧化酶的大规模生产奠定了良好的基础。

关键词：葡萄糖氧化酶氨基酸序列表达量提高定点突变突变毕赤酵母表达载体葡萄糖氧化酶基因毕赤酵母菌株毕赤酵母编码基因出发菌株基因工程酶学性质突变基因突变菌株突变位点黑曲霉酶活性表达测定克隆涉及遗传筛选基因连接转化应用表明稳定进行

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大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体的构建

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安徽农业科学 2009年第19期37卷 8895-8897页

作者：孙文秀长江大学生命科学学院湖北荆州434025

[目的]构建大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体。[方法]利用PCR方法从大豆疫霉菌cDNA中扩增多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因,用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ分别酶切此基因和毕赤酵母表达载体pPIC9K,然后用T4连接酶将目的基因... 详细信息

[目的]构建大豆疫霉多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因毕赤酵母表达载体。[方法]利用PCR方法从大豆疫霉菌cDNA中扩增多聚半乳糖醛酸酶pspg1基因,用限制性内切酶EcoRⅠ和NotⅠ分别酶切此基因和毕赤酵母表达载体pPIC9K,然后用T4连接酶将目的基因克隆到pPIC9K载体中构建此载体。[结果]扩增的大豆疫霉菌pspg1基因成熟肽片段大小为1 250 bp。用基因特异性引物扩增阳性重组子,可得到大小为1 200 bp的片段。而用载体特异性引物扩增阳性重组子,可得到大小为1 200和1 700 bp两条带,多出来的400 bp恰好符合载体部分的大小。将此特异性片段PCR扩增回收,序列测定发现大豆疫霉pspg1基因已经成功地插入到表达载体中。[结论]该研究为进一步研究大豆疫霉菌pspg1基因在毕赤酵母中高效表达奠定了基础。

关键词：大豆疫霉菌多聚半乳糖醛酸酶毕赤酵母表达载体构建

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猪传染性胃肠炎S蛋白毕赤酵母表达载体的构建

猪传染性胃肠炎S蛋白毕赤酵母表达载体的构建

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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会

作者：康雪燕张莉张培君北京市农林科学院畜牧兽医研究所

根据GenBank TGEV S基因设计一对引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoRI、NotI酶切位点,经PCR扩增后克隆于pBS-T载体,转化TOP10感受态,提取质粒酶切鉴定后,与pPIC9K载体连接,转化TOP10感受态,鉴定阳性克隆,线性化重组穿梭质粒,电... 详细信息

根据GenBank TGEV S基因设计一对引物,并在5'引物和3'引物中引入EcoRI、NotI酶切位点,经PCR扩增后克隆于pBS-T载体,转化TOP10感受态,提取质粒酶切鉴定后,与pPIC9K载体连接,转化TOP10感受态,鉴定阳性克隆,线性化重组穿梭质粒,电转GS115感受态,G418筛选克隆子。利用酵母Pichia pastoris真核表达系统,表达TGEV S蛋白。

关键词：猪传染性胃肠炎感受态酶切位点真核表达系统 EcoRI 液体培养基双酶切酵母基因组毕赤酵母表达载体

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