检索结果-内蒙古大学图书馆

东北农业大学学报 2014年第6期45卷 79-83页

作者：李继昌崔宁刘娇周泷张艳禾谢芳李刚牛惠王春来东北农业大学动物医学学院哈尔滨150030 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163000 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室哈尔滨150001

为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克... 详细信息

为筛选副猪嗜血杆菌(HPS)种特异性的基因,采用抑制消减杂交(SSH)技术,以HPS DNA为Tester,以猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)DNA为Driver,通过2轮消减杂交和2次PCR扩增,将第2次PCR产物连接pMD19-T载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,筛选阳性克隆后测序,经Southern Blot验证和BLAST分析,获得6个HPS特异基因片段。研究为建立副猪嗜血杆菌基因鉴别诊断方法及ELISA抗原靶标的鉴定奠定基础。

关键词：副猪嗜血杆菌抑制消减杂交种特异性基因鉴定

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牛支原体表面一种新的膜蛋白(P33)的鉴定及特性研究

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 679-683页

作者：吴金迪李媛白帆汪洋刘素丽周玉梅张秀英辛九庆东北农业大学动物医学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118

牛支原体(***)在感染和致病过程中其粘附蛋白起到关键的作用。为鉴定***膜表面粘附蛋白,本研究利用生物学软件对***全基因序列进行分析,预测其中一个891 bp的开放阅读框架编码一个约33 ku的具有粘附特征的假定蛋白,并将其命名为P33蛋白... 详细信息

牛支原体(***)在感染和致病过程中其粘附蛋白起到关键的作用。为鉴定***膜表面粘附蛋白,本研究利用生物学软件对***全基因序列进行分析,预测其中一个891 bp的开放阅读框架编码一个约33 ku的具有粘附特征的假定蛋白,并将其命名为P33蛋白。我们通过PCR扩增该基因并进行原核表达,获得了重组目的蛋白(rP33)。Western blot鉴定结果显示,P33蛋白定位于***菌体表面;激光共聚焦检测表明,rP33具有吸附胎牛肺细胞(EBL)的能力,其吸附作用可以被抗rP33血清特异性抑制。而且,以rP33为包被抗原的ELISA对EBL细胞膜成份的检测能够被抗rP33血清抑制,并呈抗体浓度依赖关系。本研究结果表明P33是一个新发现的具有粘附作用的***膜表面相关蛋白。

关键词：牛支原体原核表达粘附

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猪源肠球菌林克酰胺、截短侧耳素及链阳菌素A类耐药基因lsa(E)的检测及传播方式

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中国预防兽医学报 2014年第10期36卷 766-770页

作者：初胜波王秀梅张万江刘琪牟迪刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为研究lsa(E)在猪源肠球菌中的流行情况及传播方式,本研究从广西某猪场分离的56株肠球菌中检测到15株携带多重耐药外排泵基因lsa(E)的肠球菌,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对lsa(E)基因阳性的肠球菌进行亲缘关系分析,并对不同克隆型的菌株... 详细信息

为研究lsa(E)在猪源肠球菌中的流行情况及传播方式,本研究从广西某猪场分离的56株肠球菌中检测到15株携带多重耐药外排泵基因lsa(E)的肠球菌,利用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对lsa(E)基因阳性的肠球菌进行亲缘关系分析,并对不同克隆型的菌株进行耐药表型和相关耐药基因型检测,通过Southern杂交定位lsa(E)基因在不同菌株中的位置。PFGE结果显示15株lsa(E)基因阳性的肠球菌共有7种不同的PFGE谱型,表明携带lsa(E)基因的肠球菌在同一猪场存在垂直传播的现象。药物敏感性试验结果显示,7株分离株除对红霉素、四环素、庆大霉素和环丙沙星100%耐药外,对利奈唑胺、氟苯尼考、利福平和左氧氟沙星也具有较高的耐药率,分别为57.1%、85.7%、71.4%和85.7%。耐药基因erm(B),aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia和aph(3'')-IIIa的检出率分别为:100%、85.7%和72.4%;Southern杂交结果显示,lsa(E)基因在6株菌中定位于质粒22 kb^54 kb,而在1株菌中定位于染色体。本研究为临床制定合理措施控制lsa(E)快速传播提供依据。

关键词：肠球菌截短侧耳素耐药表型耐药基因

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东北地区奶牛源葡萄球菌耐药机制与分子流行病学研究

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中国预防兽医学报 2014年第9期36卷 692-695页

作者：刘琪张万江牟迪初胜波王秀梅刘思国吉林农业大学动物科学技术学院吉林长春130118 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

为调查东北三省地区奶牛源葡萄球菌耐药现状、耐药产生的分子机制和菌株流行情况,本研究对东北三省4个不同奶牛厂分离的107株不同种属葡萄球菌进行耐药表型测定,并采用PCR方法检测分离株中携带的相关耐药基因;通过脉冲凝胶电泳(PFGE)对... 详细信息

为调查东北三省地区奶牛源葡萄球菌耐药现状、耐药产生的分子机制和菌株流行情况,本研究对东北三省4个不同奶牛厂分离的107株不同种属葡萄球菌进行耐药表型测定,并采用PCR方法检测分离株中携带的相关耐药基因;通过脉冲凝胶电泳(PFGE)对分离株的亲缘关系进行分析,同时对金黄色葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST)。研究结果表明,同一奶牛场葡萄球菌克隆传播现象严重,PFGE分析后仅获得8株不同克隆的葡萄球菌。8株分离菌株对氨苄西林、克林霉素、红霉素、卡那霉素、和环丙沙星的耐药率分别为87.5%、87.5%、62.5%、50%和25%,对其余受试的6种药物(苯唑西林、四环素、氟苯尼考、利福平、万古霉素和利奈唑胺)均敏感。耐药基因检测结果显示,耐药基因blaZ/femB,lnuA/lnuB,erm(B),accA-aphD和gyrA基因Ser84(TCA)-I1e(TTA)的突变及grlA基因Ser80(CTC)-Phe(CTT)的突变是造成葡萄球菌对氨苄西林、克林霉素、红霉素、卡那霉素和环丙沙星耐药的主要原因。

关键词：葡萄球菌奶牛源脉冲凝胶电泳耐药基因

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抗马传染性贫血病毒Rev蛋白单克隆抗体的制备

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中国预防兽医学报 2014年第2期36卷 157-159页

作者：郭纪珂戈曼张泽力马建申之义王晓钧内蒙古农业大学兽医学院内蒙古呼和浩特010010 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030 东北林业大学野生动物资源学院黑龙江哈尔滨150040

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定... 详细信息

为制备马传染性贫血病毒(EIAV)蛋白表达调控因子Rev的单克隆抗体(MAb),本研究以原核表达并纯化的重组EIAV Rev为免疫原,免疫BALB/c小鼠,将其脾细胞与SP2/0细胞融合,采用间接ELISA方法筛选阳性克隆,经3次细胞克隆纯化后获得一株能够稳定分泌抗Rev的杂交瘤细胞株。MAb亚型鉴定为IgG2a/κ。Western blot与间接免疫荧光试验结果显示,获得的MAb与真核表达的Rev呈阳性反应。本研究首次制备了抗EIAV Rev的MAb,为Rev的功能研究奠定了基础。

关键词：马传染性贫血病毒 Rev 单克隆抗体

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口蹄疫病毒3C蛋白酶切割宿主蛋白PCBP2

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中国预防兽医学报 2014年第6期36卷 419-422页

作者：杨春梅黄丽王海伟于会彬李一经蔡雪辉于力唐丽杰翁长江东北农业大学生命科学学院黑龙江哈尔滨150030 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著... 详细信息

口蹄疫病毒(FMDV)3C蛋白酶(3Cpro)能够通过切割翻译起始因子4G(eIF4G)抑制宿主蛋白合成,而宿主多聚胞嘧啶结合蛋白2(PCBP2)的主要功能之一是参与蛋白质合成。本研究通过western blot检测显示,在FMDV感染BHK-21细胞中PCBP2蛋白水平显著降低。为鉴定FMDV 3Cpro是否具有切割PCBP2蛋白的功能,本研究采用免疫共沉淀试验和激光共聚焦检测显示,FMDV 3Cpro和PCBP2在细胞内存在相互作用,并且共定位于细胞质中。进一步研究显示,FMDV 3Cpro能够切割PCBP2,而且具有剂量依赖性。此外,FMDV 3Cpro活性位点突变(H46Y)试验结果表明,FMDV 3Cpro的蛋白酶活性是切割蛋白PCBP2所必需的。FMDV 3Cpro切割PCBP2靶位点序列的鉴定及FMDV 3Cpro切割PCBP2的生物学意义有待深入研究。

关键词：口蹄疫病毒 3C蛋白酶 PCBP2 切割

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猪脑心肌炎病毒2B蛋白与RACK1蛋白相互作用的鉴定

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中国预防兽医学报 2014年第5期36卷 339-342页

作者：王岩黄丽崔尚金李江南杨春梅于会彬郭东伟张元峰夏雪山翁长江昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001

为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV)2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白。酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合,激光共聚焦试验表明... 详细信息

为筛选与猪脑心肌炎病毒(EMCV)2B蛋白相互作用的宿主蛋白,本实验利用酵母双杂交方法筛选BHK-21细胞表达文库制备与EMCV 2B蛋白相互作用的宿主蛋白RACK1蛋白。酵母共转化试验和免疫共沉淀试验表明两者可以特异性结合,激光共聚焦试验表明两者共定位于细胞质中。为定位RACK1与2B蛋白相互作用区域,本研究构建了RACK1截短表达重组质粒,并将其与pCAGGS-Flag-2B共转染HEK293细胞,利用免疫共沉淀试验验证其相互作用区域。结果显示2B蛋白与宿主细胞RACK1蛋白存在相互作用,并且证明相互作用区域位于RACK1蛋白的N端。

关键词：猪脑心肌炎病毒酵母双杂交 2B蛋白 RACK1蛋白相互作用

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鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性及受体研究现状

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中国家禽 2014年第20期36卷 2-5页

作者：张礼洲祁小乐王笑梅中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室禽免疫抑制病研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 江苏省动物重要疫病与人畜共患病协同创新中心江苏扬州225009

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白... 详细信息

鸡传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)强、弱毒株在侵染宿主细胞上存在着明显的细胞嗜性差异,普遍认为,这种细胞嗜性差异主要由宿主细胞的不同受体所介导。迄今为止,已报道4种IBDV受体相关分子:SIg M免疫球蛋白、热休克蛋白90(c Hsp90)、整合素α4β1、Toll样受体(TLR)。本文对IBDV细胞嗜性及细胞受体相关研究进行了综述。

关键词：鸡传染性法氏囊病病毒细胞嗜性受体

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割天然免疫分子NEMO抑制I型干扰素的产生

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中国预防兽医学报 2014年第3期36卷 169-173页

作者：张利杰李江南胡亮张泉王岩于会彬黄丽李曦蔡雪辉翁长江中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/动物病原监测与流行病学研究创新团队黑龙江哈尔滨150001 长江大学生命科学学院湖北荆州434023 昆明理工大学生命科学与技术学院云南昆明650500

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV 4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV 4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)导致宿主蛋白NEMO(NF-κB essential modulator)被切割,产生一条约40 ku的蛋白条带。通过检测PRRSV编码蛋白酶的切割功能,进一步表明其NSP4是切割NEMO的关键蛋白酶。免疫共沉淀试验表明NSP4与NEMO具有特异性相互作用;激光共聚焦试验结果表明两者在细胞浆中共定位。通过双荧光素酶报告基因试验显示,NSP4过表达可以显著抑制仙台病毒(SeV)和NEMO诱导的IFNβ启动子的激活,导致IFNβ表达量显著下降(p<0.01)。本研究结果表明,PRRSV NSP4可以切割宿主蛋白NEMO,从而显著抑制IFNβ启动子的激活,从分子水平解释了PRRSV NSP4抑制IFNβ产生的机理。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP4蛋白 NEMO蛋白 IFNβ

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基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

基于单核细胞增生李斯特菌prfA基因新型原核温控表达载体的构建

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中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第十次学术研讨会

作者：田秋丰于申业衣菲吕雪莲倪宏波刘思国中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室动物细菌病研究室黑龙江哈尔滨150001 黑龙江八一农垦大学动物科技学院黑龙江大庆163319

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-p... 详细信息

单核细胞增生李斯特茵的prfA基因编码一个温度控制启动蛋白,具有在37℃条件下启动下游基因表达的功能.为构建新型原核温控诱导表达载体,本研究利用PCR方法扩增prfA基因,并将其与EGFP或DsRed基因分别插入到pET28a和pUC19载体中,构建pET-prfA-EGFP和pUC-prfA-DsRed重组质粒.将重组质粒转化大肠杆菌DH5α,在37℃条件下培养,利用激光共聚焦显微镜观测细菌中荧光蛋白的表达情况.结果表明,构建的两种重组质粒的荧光蛋白基因于37℃条件下,在受体茵中均获得有效表达,而30℃时则仅有微弱的本底荧光蛋白表达.本研究成功构建了以最适生理温度为单一诱导条件的温控表达的新型表达载体,为蛋白的表达与功能研究提供了新的平台.

关键词：单核细胞增生李斯特茵调控基因温控表达荧光蛋白载体构建

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