检索结果-内蒙古大学图书馆

中国医学科学院学报 2001年第1期23卷 27-31页

作者：芦兴武殷际义崔莲仙中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

分离新的与 B细胞活化相关基因。方法采用差异显示反转录 PCR（ DDRT－ PCR）技术对人扁桃体活化和静止 B细胞 mRNA的差异表达进行分析，差异显示的片段经过 Northern杂交验证后，作为探针进行人活化 B细胞 cDNA文库的筛选。结果差异显... 详细信息

分离新的与 B细胞活化相关基因。方法采用差异显示反转录 PCR（ DDRT－ PCR）技术对人扁桃体活化和静止 B细胞 mRNA的差异表达进行分析，差异显示的片段经过 Northern杂交验证后，作为探针进行人活化 B细胞 cDNA文库的筛选。结果差异显示分析共获得明显的差异表达的标签序列（ expressed sequence tag, EST） 62条，其中主要在静止 B细胞表达的有 32条，在活化 B细胞表达的有 30条。经 Northern杂交验证，共获得阳性的片段 25条。以在活化 B细胞中高表达的 EST30为探针，经 3轮筛选人活化 B细胞文库后获得 1个新的全长为 2 048 bp的 cDNA克隆。该克隆含有 1个 630 bp的开放读码框。其推断的氨基酸序列 N端与酵母的动力蛋白 KAR3部分同源。结论克隆了 1条可能与 B细胞活化相关的新基因。

关键词：差异显示 B淋巴细胞酵母KAR3蛋白

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维生素D_3、9-顺式维甲酸及其相应核受体对hsp90β基因表达的调控

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中国医学科学院学报 2000年第4期22卷 322-326页

作者：张洪美吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 J... 详细信息

目的　研究维生素 D3(VD3)、9-顺式维甲酸 (9- cis- RA)及其相应核受体对 hsp90 β基因表达的调控作用。方法　采用 DEAE- Dextran方法将人 hsp90 β基因调控片段 (- 10 39bp/ +15 31bp)介导的荧光素酶 (L uc)报告基因质粒 β1.11转染 Jurkat细胞 ,并用 VD3和 9- cis- RA分别或同时刺激细胞 ,或将质粒 β1.11及野生型维生素D3受体 (VDR)或 /和维甲酸 X受体 α(RXRα)真核表达质粒共转染 Jurkat细胞 ,检测细胞裂解液中荧光素酶活性 ;用 Western印迹分析方法检测经 VDR真核表达质粒转染或用 VD3和 9- cis- RA刺激的 Jurkat细胞中内源性Hsp90β蛋白的改变 ;通过电泳迁移率变更分析 (EMSA)实验 ,检测 VDR和 RXR能否与含有 hsp90β基因第一内含子中维生素 D3应答元件 (i VDRE)的双链寡核苷酸片段发生特异结合。结果　 VD3和 9- cis- RA可分别低水平诱导hsp90β基因表达 ,而两种配体同时加入有协同作用。 VDR或 RXRα分别转染只能较弱地抑制 hsp90β基因表达 ,二者共转染能增强其抑制作用。 EMSA实验证实 ,VDR和 RXR都可特异结合于 i VDRE上。结论　 VD3和 9- cis- RA这两条信号途径共同参与 hsp90β基因的启动子活性调节。

关键词：维生素D3 9-顺式维甲酸维生素D3受体基因表达

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反转录病毒载体介导的人β-珠蛋白基因在小鼠体内整合和表达的实验研究

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中华医学杂志 1999年第2期79卷 121-124页

作者：翟锦彬刘德培王晶陈迪郑勇梁植权中国医学科学院基础医学研究所中国协和医科大学基础医学院医学分子生物学国家重点实验室

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用... 详细信息

目的探讨反转录病毒载体介导的携带小片段５′ＨＳ２增强子的β珠蛋白基因在小鼠体内整合与表达状态，对能否应用于临床地中海贫血基因治疗作出初步的评价。方法用“乒乓”超感染方法筛选具有较高病毒滴度的单向性产病毒细胞系，采用回体（ｅｘｖｉｖｏ）基因转移策略，分析人β珠蛋白基因在小鼠体内的整合及表达。结果病毒重组体的病毒滴度在“乒乓”超感染后有明显提高，最高病毒滴度约为１×１０６ＣＦＵ／ｍｌ；在小鼠ＣＦＵＳ１２（第１２天脾结节）中检测到２个重组体中人β珠蛋白基因的整合，表达水平约为内源性鼠α珠蛋白基因的０５％～５％。在２只长期造血重建小鼠的骨髓、脾、胸腺及另一只小鼠的骨髓及脾中整合有人β珠蛋白基因，在一只重建小鼠的骨髓和脾中有人β珠蛋白基因表达，约为鼠α珠蛋白基因的７％。结论反转录病毒载体介导的人β珠蛋白基因可稳定整合在小鼠骨髓造血干细胞中。

关键词：珠蛋白基因表达 β地中海贫血

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人M961全长cDNA及剪接异构体的分离与克隆

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中国医学科学院学报 2002年第3期24卷 254-258页

作者：张斌汪俊华陶波李光涛周严彭小忠袁建刚强伯勤中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂... 详细信息

目的分离、克隆人M96基因,并初步探索其在不同血细胞系中的表达。方法根据与鼠M96基因有较高同源性的人表达序列标签(EST)设计筛库引物,筛选成人睾丸及胎脑cDNA文库,采用BLAST及CLUSTALW等程序比较分析筛选到的阳性克隆;应用多细胞系杂交膜分析该基因在各细胞系的表达;用氯化血红素诱导K562细胞向红系分化,探讨该基因在此过程中的表达变化。结果从文库中筛出长度分别为1878和1382bp的M96cDNA克隆,二者为剪接异构体,其开放阅读框分别编码491及262个氨基酸,分别命名为M961和M962(GenBank接受号分别为AF072814和AF073293)。Northern杂交结果表明,在所检测的10种血细胞系中,人淋巴细胞白血病细胞系CEM的M961基因表达量最高,在有巨核及红系特点的Hel、Dami及K562白血病细胞系中M961的表达量也较高。在K562细胞分化过程中,M961基因表达略有升高。结论M961基因在某些白血病细胞系中表达量较高。

关键词：剪接异构体 M96基因 M961基因 M962基因 PHD锌指结构基因克隆基因分离白血病

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脆性X智力低下蛋白与NDK/Nm23-H2的相互作用

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中国医学科学院学报 2001年第6期23卷 580-584页

作者：楼蓉梅品超贡金英朱宁寇朝辉吴冠芸沈岩中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对... 详细信息

目的筛选与脆性X智力低下蛋白(FMRP)相互作用的蛋白,为FMRP生理功能的阐释提供新线索。方法以5月龄人胚海马mRNA为模板制备cDNA,重组于DNA激活结构域载体pGAD10,构建酵母双杂交文库,从中筛选与FMRP相互作用的蛋白。应用酵母双杂交体系对FMRP的相互作用区域进行定位。结果(1)所构建的5月龄人胚海马cDNA酵母双杂交文库含1×106克隆,插入片段平均长度约1.5kb,有效克隆90%;(2)在该文库中筛选到一个与FMRP相互作用的阳性克隆。序列分析表明:该克隆为人的核苷酸二磷酸激酶亚基B(NDK/Nm23-H2)cDNA;(3)NDK/Nm23-H2与缺少外显子12、14-17的FMRP异构体,以及含FMRP外显子1-12的克隆相互作用,而与FMRP外显子1-6、外显子2-7不能直接结合。结论人Nm23-H2在酵母细胞内能与FMRP结合,其相互作用区域定位于FMRP的前1-11个外显子。Nm23-H2具反式调控因子特性,FMRP与Nm23-H2的相互作用提示FMRP参与基因表达调控。这一发现有助于进一步研究FMRP在细胞核内的生物学功能。

关键词：酵母双杂交体系脆性X智力低下蛋白人胚海马文库脆性X综合征遗传性疾病

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人乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立

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中国医学科学院学报 2000年第3期22卷 263-265页

作者：屠亚军琦祖和杨鹏潘燕于树玉杜淼李光三中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　建立人乙型肝炎病毒 x(HBx)基因转基因小鼠模型。方法　用显微注射法制备转基因小鼠 ,用分子杂交法鉴定转基因小鼠 HBx的整合与表达。结果　建立了人 HBx基因转基因小鼠模型。经 Southern杂交鉴定得到 17只转基因首建鼠。自肝脏... 详细信息

目的　建立人乙型肝炎病毒 x(HBx)基因转基因小鼠模型。方法　用显微注射法制备转基因小鼠 ,用分子杂交法鉴定转基因小鼠 HBx的整合与表达。结果　建立了人 HBx基因转基因小鼠模型。经 Southern杂交鉴定得到 17只转基因首建鼠。自肝脏提取总 RNA进行 Northern杂交 ,结果显示 17只首建鼠肝脏中均有 HBx表达。结论　为从整体水平研究慢性乙型肝炎患者诱发肝癌的作用机制及 HBx的反式激活作用机制提供了理想的动物模型。

关键词：乙型肝炎病毒转基因小鼠模型

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树胆固醇酯转运蛋白的cDNA和蛋白质结构分析

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中华医学杂志 2001年第21期81卷 1316-1320页

作者：曾武威张坚陈保生吴钢薛红中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的... 详细信息

目的　获得不易感动脉粥样硬化动物树胆固醇酯转运蛋白 (CETP)的cDNA和蛋白质序列 ,分析其结构特点 ,寻找其可能的抗动脉粥样硬化分子机制。方法　以从树肝脏mRNA反转录获得的cDNA一链为模板 ,应用SMART RACE技术 ,获得了树CETP的cDNA序列 ,并推导出其蛋白质氨基酸序列 ,应用分子生物学软件对该蛋白的一级、二级结构进行分析和比较。结果　获得的树CETPcDNA(在GenBank中的注册号为AF334 0 33)长 16 36bp ,编码 485个氨基酸 ,其成熟蛋白由 477个氨基酸组成 ,比人多一个氨基酸 (Gly318) ,该蛋白与人、家兔的同源性分别为 88%和 82 %。序列中与CETP结合和转运中性脂质功能相关的区域均非常保守 ,但在Asn34 2位的N 糖基化位点缺失 ,可能使其转运胆固醇酯的活性增加 ,利于外周组织和血浆中的胆固醇及其酯的清除。通过对不同种属蛋白序列的比较 ,初步分析了树CETP蛋白与功能相关的结构特点。

关键词：树Qu 动脉硬化胆固醇酯类序列分析 DNA 转运蛋白蛋白质结构分析

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人干细胞因子受体膜外区1～3免疫球蛋白样结构域的表达、纯化及活性

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中国医学科学院学报 2006年第2期28卷 154-158页

作者：苏林刘长征邓艳春杨克恭梁植权陈松森中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体（c-Kit）配体结合区膜外N端1～3免疫球蛋白样结构域（c-Kit/Ig1～3）,研究其配体结合活性.方法采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1～3双突变片段（c-Kit/Ig1～3DM）,构建pET16b-c-Ki... 详细信息

目的在原核和真核细胞中表达人干细胞因子受体（c-Kit）配体结合区膜外N端1～3免疫球蛋白样结构域（c-Kit/Ig1～3）,研究其配体结合活性.方法采用重叠延伸PCR定点诱变法合成c-Kit/Ig1～3双突变片段（c-Kit/Ig1～3DM）,构建pET16b-c-Kit/Ig1～3DM表达质粒,转化*** BL21（DE3）诱导表达,稀释复性,镍柱纯化.将C端添加组氨酸标签的c-Kit/Ig1～3基因克隆入真核表达载体pEAK12中,转染HEK293 ET细胞构建c-kit/Ig1～3高效表达细胞株,从细胞培养上清中使用镍金属螯合柱收集纯化蛋白.His-tag pull-down和酶联免疫结合实验检测融合蛋白配体结合活性.结果在大肠杆菌中c-Kit/Ig1～3^DM以包涵体形式表达,复性后配体结合活性很低.在HEK293 ET细胞中筛选到2个高效表达c-Kit/Ig1～3的细胞株,上清表达量为2μg/ml,融合蛋白相对分子质量为58 000;受体配体结合实验显示真核表达的c-Kit/Ig1～3有明显的干细胞因子特异结合活性,解离常数Kd值为9.39 nmol/L.结论获得了具有较高配体结合活性的c-Kit/Ig1～3融合蛋白.

关键词：人干细胞因子受体免疫球蛋白样结构域 his-tag pull-down 酶联免疫结合实验

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睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopher in beta2)结合区域的确定以及体外结合的证明

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中国医学科学院学报 2001年第5期23卷 462-466页

作者：才迎缪时英王琳芳中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的确定睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherinbeta2)的结合区域,体外验证BS-63与transportin的结合作用。方法将BS-63C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结合区域。分别于大肠杆菌中表... 详细信息

目的确定睾丸特异的核孔蛋白BS-63与transportin(karopherinbeta2)的结合区域,体外验证BS-63与transportin的结合作用。方法将BS-63C端分成不同长度的片段,采用酵母双杂交技术确定与transportin阳性克隆的结合区域。分别于大肠杆菌中表达上述相互作用片段,并进一步运用pulldown实验在体外验证BS-63与transportin的结合作用。结果BS-63C端与transportin相结合的区域从起始的1.6kb确定至包括一个Ranbindingdomain(RanBD)在内0.6kb的范围内。Pulldown以及Westernblot证实此区域在体外可与transportin相结合。结论在生精细胞中,位于胞质侧的睾丸特异的核孔蛋白BS-63将被转运物向核内的转运过程可能是由transportin协助完成的。

关键词：核孔蛋白 BS-63 transportin 结合区域确定体外结合

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hsp90α基因在染色质模板上的热诱导转录

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中国医学科学院学报 2004年第5期26卷 533-536页

作者：李兆勇代辉杨珺张业吴宁华沈珝琲中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室北京100005

目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录。方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因... 详细信息

目的在体外将带有hsp90α基因启动子的报告基因质粒pBLCAT3α1组装为染色质模板,用于研究hsp90α基因的热诱导转录。方法采用竞争性RT-PCR定量检测基因启动子活性的方法,研究染色质模板的体外组装,并比较染色质模板与裸露DNA模板上基因的转录活性。结果优化了热休克处理的HeLa全细胞抽提物在基因转录活性研究中的实验条件:用体外重组表达的染色质组装相关因子与核心组蛋白在体外与hsp90α基因启动子质粒组装成染色质;证明染色质模板的hsp90α基因体外转录水平低于裸露DNA模板,而其热诱导效率显著高于对照组。结论在体外组装的染色质模板具有阻遏hsp90α基因转录的活性,但明显提高了该基因的热诱导表达效率。

关键词：全细胞抽提物体外转录 RT-PCR 染色质组装

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