检索结果-内蒙古大学图书馆

野生动物学报 2020年第2期41卷 447-450页

作者：曹霞郑秉武丁玉林甘迪刘淑英王金玲内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 呼和浩特市园林管理局动物园管理处呼和浩特010050

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种人畜共患性传染病,一直威胁着人类和动物生命。本研究采用病理学、直接免疫荧光法和免疫组织化学方法在内蒙古自治区确诊了3例美洲驼狂犬病自然病例。尸体剖检显示3只病死美洲驼表现角弓反张、心衰和脑... 详细信息

狂犬病是由狂犬病病毒引起的一种人畜共患性传染病,一直威胁着人类和动物生命。本研究采用病理学、直接免疫荧光法和免疫组织化学方法在内蒙古自治区确诊了3例美洲驼狂犬病自然病例。尸体剖检显示3只病死美洲驼表现角弓反张、心衰和脑水肿。病理组织学观察在小脑浦金野细胞、脑干多极神经元、大脑多形细胞和海马多形细胞胞浆内均可观察到大小不等的嗜酸性狂犬病病毒包涵体(Negri body),其中病程长的1只美洲驼的脑组织内观察到典型的病毒性脑炎。直接免疫荧光试验结果显示在3只美洲驼小脑组织内检测到亮绿色的狂犬病病毒抗原的特异性阳性信号。免疫组织化学结果显示在3只美洲驼小脑浦金野细胞的胞浆内检测到圆形、椭圆形的典型的棕色狂犬病病毒抗原的特异性阳性信号。本研究在国内首次报道了美洲驼狂犬病。

关键词：美洲驼狂犬病包涵体直接免疫荧光试验免疫组织化学

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乌审旗地区绵羊主要蠕虫病流行病学调查及驱虫效果比较试验

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内蒙古农业大学学报（自然科学版） 2021年第1期42卷 1-5页

作者：那日苏苏布登格日勒哈斯图雅王永平海鹰米其德哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 鄂尔多斯市乌审旗动物疫病预防控制中心鄂尔多斯017300

为研究乌审旗地区绵羊主要蠕虫病流行病学,以及进一步筛选对优势虫种具有较强驱虫效果的药物,本研究以乌审旗不同苏木镇为试验点,随机采集绵羊新鲜粪便,采用漂浮法、沉淀法和改良麦克马斯特计数法对消化道蠕虫虫卵进行定性与定量检查,... 详细信息

为研究乌审旗地区绵羊主要蠕虫病流行病学,以及进一步筛选对优势虫种具有较强驱虫效果的药物,本研究以乌审旗不同苏木镇为试验点,随机采集绵羊新鲜粪便,采用漂浮法、沉淀法和改良麦克马斯特计数法对消化道蠕虫虫卵进行定性与定量检查,从而掌握本地区绵羊蠕虫病流行情况和优势虫种。在此基础上,选取一定数量的捻转血矛线虫感染率较严重(EPG≥500)的绵羊,给予不同驱虫药,进行驱虫效果对比试验。结果表明,乌审旗地区绵羊消化道寄生虫总感染率为51.42%,其中线虫感染率为44.05%,绦虫感染率为10.76%。对比试验结果表明,氯氢碘柳氨钠注射液、阿维菌素氯氢碘柳氨钠片复方制剂和硝碘酚腈注射液均显示出强大的驱虫效果,尤其对胃捻转血矛线虫的驱杀作用更为突出,而盐酸左旋咪唑片的驱虫效果较差。因此,乌审旗地区绵羊消化道线虫感染率由以前的84%左右显著下降至44%左右,但仍比较严重。硝碘酚腈和氯氰碘柳胺钠能够彻底驱杀目前流行的优势虫种-胃捻转血矛线虫,而左旋咪唑的效果却较差。

关键词：乌审旗绵羊消化道蠕虫流行病学调查驱虫试验

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大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织而蓄积的PGE2与感染组织CXCLs mRNA表达的相关性

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中国兽医学报 2019年第10期39卷 2019-2025页

作者：李婷婷毛伟刘博曹金山内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

为研究大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织而蓄积的PGE2与感染组织表达趋化因子的相关性,本试验采用浓度为1×10^-6和1×10^-5 mol/L的COX-2和mPGES-1抑制剂处置体外培养的大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织12 h,用RT-qPCR法检测组织中... 详细信息

为研究大肠杆菌感染奶牛子宫内膜组织而蓄积的PGE2与感染组织表达趋化因子的相关性,本试验采用浓度为1×10^-6和1×10^-5 mol/L的COX-2和mPGES-1抑制剂处置体外培养的大肠杆菌感染的奶牛子宫内膜组织12 h,用RT-qPCR法检测组织中CXCL1、CXCL2、CXCL3和CXCL5 mRNA表达变化。结果显示:与对照组相比,大肠杆菌感染后12 h奶牛子宫内膜组织中趋化因子mRNA的表达量显著升高,而COX-2和mPGES-1抑制剂处置显著降低趋化因子mRNA的表达。结果表明:病理性蓄积的PGE2也许是大肠杆菌所致奶牛子宫内膜组织炎症反应过程中趋化因子等炎症介质表达的必要条件。

关键词：大肠杆菌奶牛子宫内膜组织 COX-2 mPGES-1 趋化因子炎症

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布鲁菌Rev.1株eryA基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

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畜牧与饲料科学 2020年第6期41卷 7-12,25页

作者：程家海宋前进郭昊侯丽娜杨超王凤雪关平原温永俊内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

通过对布鲁菌优势抗原eryA基因进行原核表达,在获得目的蛋白的基础上建立以该蛋白为包被抗原的间接ELISA方法。构建原核表达载体pET-30a-eryA,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱亲和纯化eryA重组蛋白,SDS-PAGE鉴定纯化蛋白... 详细信息

通过对布鲁菌优势抗原eryA基因进行原核表达,在获得目的蛋白的基础上建立以该蛋白为包被抗原的间接ELISA方法。构建原核表达载体pET-30a-eryA,并将其转入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,镍柱亲和纯化eryA重组蛋白,SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Western-Blotting检测反应原性后建立间接ELISA方法。反应条件优化后,抗原包被浓度为0.3125μg/mL,37℃包被2 h;封闭液为5%猪源明胶,37℃作用2 h;血清稀释度为1∶100,37℃作用1 h;酶标抗体稀释度为1∶8000,37℃作用45 min。血清稀释度为1∶1600时,仍然检测为阳性,证明建立的间接ELISA方法灵敏性良好;其他菌种及病毒经过特异性检测,均为阴性,证明建立的间接ELISA方法特异性良好;通过重复性检测,批间及批内变异系数均小于10%,证明建立的间接ELISA方法重复性良好。检测临床血清样品,建立的方法与试管凝集试验总符合率为95.7%,证明该方法可初步应用于临床诊断。

关键词：布鲁菌:eryA基因原核表达间接ELISA

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牛病毒性腹泻病毒E2基因生物信息学分析及可溶性表达

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中国动物传染病学报 2020年第1期28卷 63-67页

作者：赵洪哲李新培范峻豪宋前进张静关平原温永俊内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 中国农业科学院特产研究所长春130112

为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽... 详细信息

为了获得牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus,BVDV)E2基因的最佳可溶性蛋白,本试验根据GenBank已公布的BVDV E2基因序列,利用DNAStar等软件进行生物信息学分析,截取抗原性和亲水性较高的序列进行稀有密码子优化,串联信号肽序列后合成并连接到原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32a-Opti-E2;转化至*** BL21(DE3)宿主菌,经SDS-PAGE和Western blot分析,成功获得大小为43 kDa的BVDV E2基因的最佳可溶性蛋白,且该蛋白特异性较好。本试验E2蛋白的成功表达可为后续ELISA方法的建立和亚单位疫苗的开发奠定基础。

关键词：牛病毒性腹泻病毒囊膜结构蛋白E2 原核表达

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基于CRISPR/Cas9技术快速构建PRV gE基因缺失病毒

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中国动物检疫 2020年第5期37卷 87-93页

作者：金铭刘春羽张洪亮杭天宇孙雨茗赵洪哲乌冬高娃李伊铭张赫王凤雪温永俊内蒙古农业大学兽医学院农业农村部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

为快速、高效构建伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白E基因(gE)缺失病毒,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,首先将pSpCas9(BB)-2A-GFP荧光质粒转染至VERO细胞和PK-15细胞,选出转染效率较高的细胞系,同时于http://***/网站设计并合... 详细信息

为快速、高效构建伪狂犬病病毒(pseudorabies virus,PRV)糖蛋白E基因(gE)缺失病毒,基于CRISPR/Cas9基因编辑技术,首先将pSpCas9(BB)-2A-GFP荧光质粒转染至VERO细胞和PK-15细胞,选出转染效率较高的细胞系,同时于http://***/网站设计并合成3个高评分的小导向RNA(small guide RNA,sgRNA),通过噬斑形成试验,筛选出高效sgRNA。其次将筛选出的针对PRV gE基因的sgRNA转染于PK-15细胞,然后接种PRV-1病毒,经过5轮噬斑克隆纯化获得PRV-1-ΔgE。结果显示:VERO细胞比PK-15细胞具有更好的转染效果;gE-sgRNA1和gE-sgRNA2可作为针对gE基因的高效sgRNA;获得了1株PRV gE基因缺失291 bp的病毒,将其命名为PRV-1-ΔgE。研究表明,CRISPR/Cas9基因编辑技术可作为一种高效编辑PRV-1缺失病毒基因的方法,同时也为后续快速应对PRV变异株研究提供了新思路。

关键词：伪狂犬病毒变异毒株糖蛋白E基因 CRISPR/Cas9

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典型草原的轮牧方式对绵羊蠕虫病流行病学的影响

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黑龙江畜牧兽医 2020年第3期 70-74页

作者：其力木格何秀玲额尔登巴特尔哈斯苏荣内蒙古农业大学兽医学院/农村农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018 锡林郭勒盟阿巴嘎旗那仁宝拉格苏木畜牧兽医站内蒙古那仁宝拉格011400

为了初步了解内蒙古中部地区典型草原的轮牧方式对绵羊主要蠕虫病流行病学是否有影响以及常用抗蠕虫药的驱虫效果,试验在西乌珠穆沁旗巴彦花镇地区进行了绵羊群主要蠕虫病流行病学调查及驱虫效果比较试验。首先针对试验区域不同草场类... 详细信息

为了初步了解内蒙古中部地区典型草原的轮牧方式对绵羊主要蠕虫病流行病学是否有影响以及常用抗蠕虫药的驱虫效果,试验在西乌珠穆沁旗巴彦花镇地区进行了绵羊群主要蠕虫病流行病学调查及驱虫效果比较试验。首先针对试验区域不同草场类型和放牧方式划分采样点,随机采集一定数量绵羊新鲜粪样,采用寄生虫学粪便虫卵定性和定量检查法对各样品的虫卵种类和数量进行检测。在掌握该地区绵羊蠕虫病流行情况和优势虫种的基础上,选取一定数量的感染程度较强的绵羊,给予伊维菌素、阿苯达唑、双羟萘酸噻嘧啶、硝碘酚腈以及盐酸左旋咪唑等驱虫药进行驱虫效果比较试验。结果表明:该地区绵羊群消化系统蠕虫总感染率为73.5%,其中线虫感染率为70.9%,绦虫感染率为3.5%,吸虫感染率为0.6%。草场类型对该地区绵羊蠕虫感染率的影响不大,其线虫、绦虫和吸虫的感染率分别为40.3%~59.1%、1.5%~3.4%和0~1.7%。放牧方式对绵羊蠕虫感染率有明显影响,轮牧和定居放牧方式绵羊线虫的感染率分别为37.8%和72.5%,绦虫的感染率分别为1.5%和2.4%,吸虫的感染率分别为1.2%和0.6%。伊维菌素已完全失去对绵羊消化道线虫的驱虫作用,阿苯达唑和双羟萘酸噻嘧啶的驱虫效果亦很差,而硝碘酚腈和盐酸左旋咪唑对线虫具有较强的驱虫效果。说明西乌珠穆沁旗巴彦花镇地区绵羊消化道线虫感染比较严重,且所流行的优势虫种已对目前广泛应用的伊维菌素和阿苯达唑均产生了高度耐药性,轮牧方式对绵羊线虫病具有积极的预防作用。

关键词：绵羊蠕虫病流行病学调查轮牧方式驱虫试验

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肌旋毛虫标本5种染色方法的比较研究

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黑龙江畜牧兽医 2019年第20期 87-89,177页

作者：陆静杜哲轩李泽浩王文龙内蒙古农业大学兽医学院/农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室

为了探索建立一种有效、简便、快速、清晰、对比性强、识别度高的旋毛虫幼虫囊包标本制作方法,试验采用45%醋酸卡红原液稀释100倍染色、硼砂卡红染色、4%孔雀绿染色、苏木素染色、不染色共5种方法对肌旋毛虫进行染色对比。结果表明:45%... 详细信息

为了探索建立一种有效、简便、快速、清晰、对比性强、识别度高的旋毛虫幼虫囊包标本制作方法,试验采用45%醋酸卡红原液稀释100倍染色、硼砂卡红染色、4%孔雀绿染色、苏木素染色、不染色共5种方法对肌旋毛虫进行染色对比。结果表明:45%醋酸卡红原液稀释100倍染色法渗透作用快,染色后的虫体囊包轮廓明显,囊内幼虫结构清晰,但标本整体染色不均匀。硼砂卡红染色后标本染色较浅,染色后的虫体囊包轮廓明显,但囊内幼虫立体感差且难以观察。4%孔雀绿染色后囊内幼虫结构清晰,囊包轮廓明显,标本透明度高,便于观察。苏木素染色后标本整体颜色较深,囊内幼虫易于观察,囊包轮廓明显。说明肌旋毛虫染色标本的制作使用4%孔雀绿染色法和苏木素染色法较好,首先推荐使用4%孔雀绿染色法,其次推荐使用苏木素染色法。

关键词：肌旋毛虫染色标本孔雀绿卡红苏木素

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酿酒酵母细胞壁可通过TLR2受体调控绵羊瘤胃上皮细胞表达SBD-1

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中国兽医学报 2019年第2期39卷 296-302页

作者：田巧珍金鑫张曼张召议王云鹤杨银凤内蒙古农业大学兽医学院农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室内蒙古呼和浩特010018

旨在研究酿酒酵母细胞壁对体外培养绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的影响及其调控途径,为揭示酿酒酵母细胞壁对机体免疫的调控机制提供理论依据。本研究将不同质量浓度的酿酒酵母细胞壁提取物(0,25,50,1... 详细信息

旨在研究酿酒酵母细胞壁对体外培养绵羊瘤胃上皮细胞β-防御素-1(sheep beta-defensin-1,SBD-1)表达的影响及其调控途径,为揭示酿酒酵母细胞壁对机体免疫的调控机制提供理论依据。本研究将不同质量浓度的酿酒酵母细胞壁提取物(0,25,50,100,200,400mg/L)作用于绵羊瘤胃上皮细胞不同时间(0,2,4,8,12,24h)后,检测上皮细胞SBD-1和Toll样受体-2(TLR2)mRNA表达水平,并进一步通过TLR2阻断试验来证实TLR2是否介导酵母细胞壁促进SBD-1表达。结果表明,不同浓度的酵母细胞壁刺激瘤胃上皮细胞时,随着细胞壁浓度的增加SBD-1mRNA表达量呈先升高后降低的趋势,且酿酒酵母细胞壁质量浓度为200mg/L刺激12h时,SBD-1 mRNA表达量达到峰值,与对照组和其他时间组相比差异显著(P<0.05);用质量浓度为200mg/L的酿酒酵母细胞壁刺激绵羊瘤胃上皮细胞不同时间,同样在12h时,TLR2的mRNA表达量达到最大;阻断试验表明TLR2可介导SBD-1的表达。本研究结果表明酿酒酵母细胞壁可促进绵羊瘤胃上皮细胞SBD-1的表达,且质量浓度200mg/L时,刺激瘤胃上皮细胞12h时SBD-1的表达量达到最高,而TLR2参与该调控过程。

关键词：酿酒酵母细胞壁 β-防御素-1 实时荧光定量PCR Toll样受体-2

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绵羊瘤胃上皮细胞的体外分离培养、冻存及复苏方法

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中国农业大学学报 2019年第5期24卷 57-66页

作者：金鑫张曼王云鹤魏方温婧怡杨银凤内蒙古农业大学兽医学院呼和浩特010018 农业部动物疾病临床诊疗技术重点实验室呼和浩特010018

本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃... 详细信息

本研究旨在建立绵羊瘤胃上皮细胞(Ovine rumen epithelial cells,ORECs)的分离培养、冻存和复苏方法,为反刍动物瘤胃功能的研究和相关瘤胃疾病的发病机制研究提供功能性的细胞模型。以绵羊瘤胃为研究对象,采用胰蛋白酶连续消化法对瘤胃组织进行不同时间(40、30、20、10、10、8和5 min)的消化,并对每次消化后的瘤胃组织和消化液分别进行H.E染色分析和显微镜观察,以确定细胞开始收集及终止消化的时间,最后将收集的瘤胃上皮细胞进行原代培养。在传代培养时,运用差时消化法和差速贴壁法对ORECs进行纯化,并从细胞形态学、细胞生长曲线、角蛋白18(CK-18)免疫荧光染色和上皮细胞标志物E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶基因表达等方面对ORECs进行鉴定。然后设置不同体积配方的冻存液,将传代细胞进行冻存,通过检测复苏后的细胞活力和24 h贴壁率确定最佳冻存液配方。结果表明:第4次消化后就基本消化到瘤胃组织的棘层,此时即可开始收集细胞;第7次消化完后瘤胃上皮的基底层细胞基本被消化掉,此时即可终止消化细胞。经纯化后传代的细胞呈现均一的"铺路石"形态,生长曲线明显呈"S"形,且经CK-18免疫荧光染色后鉴定为阳性,同时PCR检测到上皮细胞特异性标志蛋白E-钙黏蛋白和碱性磷酸酶均有表达。此外,ORECs经不同体积配方冻存液冻存复苏后发现,冻存液配方为V_(FBS)∶V_(DMEM)∶V_(DMSO)=9∶0∶1时ORECs的细胞活力及贴壁率最高,且传代后的细胞生长状况良好。因此本试验成功建立了ORECs的体外分离培养、冻存和复苏方法。

关键词：绵羊瘤胃上皮细胞原代培养传代培养冻存复苏

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