检索结果-内蒙古大学图书馆

农业生物技术学报 2010年第1期18卷 18-23页

作者：张范张朝红徐炎王跃进西北农林科技大学园艺学院陕西省农业分子生物学重点实验室农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室

本研究以成年早酥梨(Pyrus bretschneideri ***)叶片为材料,通过RT-PCR克隆早酥梨病程相关基因非表达子1基因(NPR1)并获得其全长序列1771bp,开放阅读框为1761bp,编码586个氨基酸(GenBank登录号:FJ769372)。利用NCBI/Blastp和ClustalX软件进行相似性分析表明,目的基因编码蛋白质序列与日本梨(***)、秋子梨(***)、苹果(Malus×domestica)、烟草(Nicotiana tabacum)和拟南芥(Arabidopsis thaliana)的NPR1蛋白相似性分别为99%、98%、98%、67%和59%。将其连接pGEX-4T-1原核表达载体并转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21,经IPTG诱导表达获得大小约为91kD的目的融合蛋白,融合蛋白主要以包涵体形式表达,表达量约占总蛋白17%。

关键词：早酥梨病程相关基因非表达子1基因(NPR1) 克隆原核表达

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早酥梨抗黑星病相关新基因Vnp1的克隆及其表达分析

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农业生物技术学报 2010年第2期18卷 239-245页

作者：张洪磊张朝红王跃进农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室西北农林科技大学园艺学院

在前期已克隆得到的早酥梨(Pyrus ***)抗病基因同源类似物Pb-Zs3(GenBank登录号:EU939783)的基础上,通过RT-PCR获得Pb-Zs3的cDNA序列,并利用RACE技术获得该基因的全长cDNA序列,命名为早酥梨抗黑星病相关基因(Vnp1),提交至GenBank(GenBan... 详细信息

在前期已克隆得到的早酥梨(Pyrus ***)抗病基因同源类似物Pb-Zs3(GenBank登录号:EU939783)的基础上,通过RT-PCR获得Pb-Zs3的cDNA序列,并利用RACE技术获得该基因的全长cDNA序列,命名为早酥梨抗黑星病相关基因(Vnp1),提交至GenBank(GenBank登录号:FJ763188)。生物信息学分析表明,早酥梨Vnp1基因的全长cDNA序列为1200bp,包含一个完整的921bp的开放读码框架(ORF),编码306个氨基酸残基,预测其分子质量为34.6kD。同时,该基因含有与抗病相关的功能结构域核酸结合位点(NB-ARC),同源性比对显示其与苹果黑星病菌(Venturia inaequalis)诱导后的苹果EST序列ABEA004598(GenBank登录号:EB150292)同源性达71%。对早酥梨Vnp1基因进行半定量RT-PCR研究的结果表明,该基因在梨黑星病菌(Venturia nashicola)诱导后216h内的叶片中的表达水平呈明显上升趋势。

关键词：梨梨黑星病抗病基因同源类似物 RACE 半定量RT-PCR

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提高无核葡萄胚挽救中幼胚成苗率的研究

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中国农业科学 2010年第20期43卷 4238-4245页

作者：王爱玲王跃进唐冬梅张剑侠张朝红西北农林科技大学园艺学院/农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室/陕西省农业分子生物学重点实验室

【目的】提高无核葡萄胚挽救中幼胚的成苗率。【方法】以7个杂交组合的胚珠为试材,研究不同基因型、不同胚珠发育培养基、添加不同氨基酸及低温处理采后幼果对无核葡萄胚成苗率的影响。【结果】在无核葡萄胚离体发育中,母本和父本对胚... 详细信息

【目的】提高无核葡萄胚挽救中幼胚的成苗率。【方法】以7个杂交组合的胚珠为试材,研究不同基因型、不同胚珠发育培养基、添加不同氨基酸及低温处理采后幼果对无核葡萄胚成苗率的影响。【结果】在无核葡萄胚离体发育中,母本和父本对胚的成苗均有影响;在二倍体无核葡萄作母本的杂交组合中,以二倍体无核葡萄作父本比以四倍体有核葡萄作父本更有利于胚的成苗。在3种不同配方的培养基中,适宜于无核葡萄离体幼胚发育和成苗的培养基是MM4。ER添加4mmol·L-1脯氨酸培养基最有利于无核葡萄胚的发育。低温处理3d对红宝石无核×森田尼无核和红宝石无核×黑奥林胚的成苗促进最大。【结论】无核葡萄胚挽救的适宜培养基是ER+4mmol·L-1脯氨酸或MM4培养基,低温处理幼果3d能有效提高二倍体无核葡萄×二倍体无核葡萄胚挽救中胚的成苗率。

关键词：无核葡萄胚挽救成苗率

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百合花药和雌蕊特异启动子功能分析

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西北农林科技大学学报（自然科学版） 2010年第10期38卷 138-144页

作者：娄倩刘雅莉辛轶李莉西北农林科技大学农业部西北园艺植物种质资源与遗传改良重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

【目的】从"索邦"百合(Lilium orential"Sorbonne")中克隆查尔酮合成酶基因启动子相似序列PCHS2,并对其进行表达模式分析。【方法】从"索邦"百合中PCR扩增PCHS2启动子序列,与GUS报告基因融合,构建植物表... 详细信息

【目的】从"索邦"百合(Lilium orential"Sorbonne")中克隆查尔酮合成酶基因启动子相似序列PCHS2,并对其进行表达模式分析。【方法】从"索邦"百合中PCR扩增PCHS2启动子序列,与GUS报告基因融合,构建植物表达载体,通过农杆菌介导法转化模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana ***)和矮牵牛(Petuniahybrida "Dreams Midnight"),抗性筛选和PCR检测鉴定转基因植株,GUS组织化学检测分析启动子在转基因植株中的表达模式。【结果】转基因拟南芥和矮牵牛的抗性筛选和PCR检测结果显示,成功地获得了转基因阳性植株。GUS活性分析表明,在PCHS2的驱动下,仅能在花药和雌蕊中检测到GUS活性,茎、叶和其他花组织中都没有发现GUS活性的表达。【结论】PCHS2启动子具有花药专一性。

关键词： “索邦”百合查尔酮合成酶基因花药和雌蕊特异性启动子矮牵牛拟南芥

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利用分子标记对无核抗病葡萄杂交后代的辅助选择

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东北农业大学学报 2010年第6期41卷 55-63页

作者：张剑侠王勇王跃进张艳艳农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西省农业分子生物学实验室西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100

利用葡萄无核基因SCAR标记GSLP1-569,葡萄抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354和抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224,对欧洲葡萄无核品种×中国野生葡萄、无核品种自交共6个组合的127株胚挽救苗进行了无核、抗病的分子标记辅助选择。结果表... 详细信息

利用葡萄无核基因SCAR标记GSLP1-569,葡萄抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354和抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224,对欧洲葡萄无核品种×中国野生葡萄、无核品种自交共6个组合的127株胚挽救苗进行了无核、抗病的分子标记辅助选择。结果表明,在127株胚挽救苗中,检测出拥有无核基因SCAR标记GSLP1-569的杂种27株,其中4株杂种同时拥有无核基因SCAR标记GSLP1-569和抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354;拥有抗黑痘病基因RAPD标记OPS03-1354的杂种28株,拥有抗霜霉病基因RAPD标记S416-1224的杂种19株,其中10株杂种同时拥有OPS03-1354和S416-1224。获得的无核、抗病葡萄杂种将为进一步选育出新品系奠定基础。

关键词：无核葡萄抗黑痘病抗霜霉病标记辅助选择胚挽救杂种

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美国优质抗病制汁葡萄品种引种及加工性能研究试验初报

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中国农学通报 2010年第11期26卷 245-249页

作者：陆平波高奇超王跃进刘楠吴行昶西北农林科技大学园艺学院/农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室/陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100

为丰富中国的葡萄制汁品种,以在陕西杨凌种植的从美国引进的5个优质抗病制汁葡萄品种为研究对象,采用田间调查、果实品质测定、抗病性鉴定、加工性能分析等方法对康可(Concord)、康拜尔(Campbell)、玫瑰露(Delaware)、卡托巴(Catawba)... 详细信息

为丰富中国的葡萄制汁品种,以在陕西杨凌种植的从美国引进的5个优质抗病制汁葡萄品种为研究对象,采用田间调查、果实品质测定、抗病性鉴定、加工性能分析等方法对康可(Concord)、康拜尔(Campbell)、玫瑰露(Delaware)、卡托巴(Catawba)、黄金玫瑰(GoldenMuscat)等5个引进制汁葡萄品种的引种表现及加工性能进行了一年的研究。结果表明:引进的制汁葡萄品种都表现出很强的抗病性。康可、康拜尔及黄金玫瑰的果实及果汁品质优良,具有较好的加工性能,其中黄金玫瑰的产量较高,初次结果平均单株产量为4.5kg;康拜尔的出汁率较高;康可的Vc含量、糖酸比、总酚含量均较高。

关键词：葡萄制汁品种引种加工性能

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抗病基因VpPR10转化‘砀山酥梨’及转化条件的优化

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园艺学报 2010年第10期37卷 1567-1574页

作者：孟颢光张朝红王跃进西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100 农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西杨凌712100 陕西省农业分子生物学重点实验室陕西杨凌712100 河南农业大学植物保护学院郑州450002

将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’,并对转化系统条件进行优化。首先将VpPR10基因重组于中间表达载体pWR-Ⅱ,得到重组质粒pWR-Ⅱ-VpPR10;继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,再利用根癌农... 详细信息

将源自中国野生华东葡萄的抗病基因——病程相关蛋白基因导入‘砀山酥梨’,并对转化系统条件进行优化。首先将VpPR10基因重组于中间表达载体pWR-Ⅱ,得到重组质粒pWR-Ⅱ-VpPR10;继而以改进冻融法将其导入根癌农杆菌EHA105,再利用根癌农杆菌介导的叶盘转化法进行遗传转化。根癌农杆菌浓度OD600=0.5,离体叶片侵染5min,在含有100μmol·L-1乙酰丁香酮的培养基中暗处共培养48h有利于砀山酥梨的遗传转化;经PCR分析、Southern blot和RT-PCR检测,证明目的基因VpPR10已导入并整合到砀山酥梨基因组中;转化率为1.08%。

关键词：梨抗病基因农杆菌介导病程相关蛋白基因(VpPR10) 条件优化

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亚洲百合试管苗生根移栽的研究

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西北林学院学报 2010年第2期25卷 76-79,118页

作者：郭美刘雅莉王跃进张宗勤刘娜农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室西北农林科技大学园艺学院陕西杨陵712100

以亚洲百合‘精粹’（Lilium Asiatic hybrid cv．‘Elite’）试管苗为试验材料，通过不同浓度激素、活性碳与大量元素处理，建立亚洲百合生根移载体系。结果显示，低浓度的NAA（0．1～0．2mg·L-1）有利于根的诱导，生根率均达100... 详细信息

以亚洲百合‘精粹’（Lilium Asiatic hybrid cv．‘Elite’）试管苗为试验材料，通过不同浓度激素、活性碳与大量元素处理，建立亚洲百合生根移载体系。结果显示，低浓度的NAA（0．1～0．2mg·L-1）有利于根的诱导，生根率均达100％；大量元素1／4MS处理更适合试管苗的生根和小鳞茎形成；“IBA＋AC”处理最佳组合是2．0mg·L-1 IBA＋0．1％AC；鳞茎直径≥9mm的试管苗去顶4℃低温冷藏4周，移栽后喷施1／2MS营养液，长势最好，成活率达到100％。本试验获得适宜亚洲百合的生根移栽技术体系：生根最佳配方为1／4MS＋0．1～0．2mg·L1NAA或1／4MS＋2．0mg·L-1IBA＋0．1％AC；最佳移栽技术为选取鳞茎直径5～7mm的试管苗去顶，4℃低温冷藏4周后移栽，栽后喷施1／2MS或MS营养液。

关键词：亚洲百合试管苗生根移栽

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温宿红葡萄生物学特性及果实性状多样性研究

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中国农学通报 2010年第5期26卷 146-151页

作者：张宗勤王跃进张剑侠王晶晶田贝贝于建娜高疆生农业部西北园艺植物种质资源利用重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室西北农林科技大学陕西杨凌712100 塔里木大学新疆阿拉尔843300

【研究目的】温宿红是新疆温宿县地方优异葡萄品种,当地长期栽培中形成了丰富的葡萄种质资源多样性,该文通过对温宿红葡萄果实与形态性状多样性的研究,以期为筛选出适合当地条件的温宿红葡萄系列新品种(系)提供材料基础。【方法】通过... 详细信息

【研究目的】温宿红是新疆温宿县地方优异葡萄品种,当地长期栽培中形成了丰富的葡萄种质资源多样性,该文通过对温宿红葡萄果实与形态性状多样性的研究,以期为筛选出适合当地条件的温宿红葡萄系列新品种(系)提供材料基础。【方法】通过田间观察,以果实特性为主要指标,植株形态特征为辅,研究温宿红葡萄品种多样性。【结果】温宿红葡萄植株生长势强,晚熟、丰产,果穗松紧适中、穗梗粗壮,果粒圆、大小一致,果肉硬脆,味甜,果皮红色鲜丽,符合人们的消费习惯,有一定的耐贮运性,是较为理想的鲜食品种。温宿红自然群体中存在诸多变异类型,初步筛选出的7个形态与果实性状多样性植株在果穗、果粒形态,果实耐压力、耐拉力、可溶性固形物含量和种子数等方面均存在显著性差异。【结论】温宿红葡萄自然群体中存在变异类型,对该品种的深入研究及初选的多样性植株具有一定育种及利用价值。

关键词：葡萄温宿红多样性物候期新疆

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同源重组快速构建百合LCHS2基因RNAi表达载体及其鉴定

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中国农学通报 2010年第2期26卷 38-44页

作者：化占勇刘雅莉徐伟荣王跃进张雄飞农业部西北园艺植物种质资源与遗传改良重点开放实验室陕西省农业分子生物学重点实验室西北农林科技大学园艺学院陕西杨凌712100

为探讨CHS基因的下调表达对花朵着色的影响以及为百合观赏性状遗传改良提供技术支持,利用基于同源重组原理的Gateway技术,根据课题组从东方百合‘索邦’分离的LCHS2基因序列(Genbank登录号:GQ483376)和pENTR/D-TOPO载体要求,设计上游5&#... 详细信息

为探讨CHS基因的下调表达对花朵着色的影响以及为百合观赏性状遗传改良提供技术支持,利用基于同源重组原理的Gateway技术,根据课题组从东方百合‘索邦’分离的LCHS2基因序列(Genbank登录号:GQ483376)和pENTR/D-TOPO载体要求,设计上游5'端添加'CACC'的一对特异引物,PCR扩增获得636 bp的干扰片段。通过TOPO克隆,将该片段克隆入载体pENTR/D-TOPO构建入门克隆载体pENTR/D-CHS,测序结果显示,与原序列同源性为100%。再经过LR反应使pENTR/D-CHS上的干扰片段替换掉目标载体pHellsgate12上的ccdB片段,快速构建了包含LCHS2基因干扰片段的RNAi表达载体pH12-CHSi,经限制性内切酶XhoI、XbaI酶切鉴定获得724 bp和722 bp的片段,与预期结果一致。pH12-CHSi电击法转化农杆菌GV3101,菌液PCR鉴定,出现636 bp的目的条带,表明RNAi表达载体pH12-CHSi已成功转入农杆菌。

关键词：同源重组快速构建 LCHS2基因 RNAi 表达载体酶切连接

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