检索结果-内蒙古大学图书馆

中国生物工程杂志 2011年第6期31卷 49-57页

作者：曹冠琳安新民龙萃薄文浩张志毅北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

为了解AGM3基因在异源植物中对开花及花器官发育的影响,采用农杆菌介导法将dominant negative mutation(DNM)结构基因35S-AGM3-E9导入烟草(Nicotianatabacum),经PCR和Southern检测获得了一批阳性转化植株。荧光定量分析结果显示,AGM3在... 详细信息

为了解AGM3基因在异源植物中对开花及花器官发育的影响,采用农杆菌介导法将dominant negative mutation(DNM)结构基因35S-AGM3-E9导入烟草(Nicotianatabacum),经PCR和Southern检测获得了一批阳性转化植株。荧光定量分析结果显示,AGM3在各个转基因株系中均有表达,且不同株系间表达量差异极显著。调查结果分析表明:与野生型植株相比,46.7%的转基因株系未成花,33.3%的转基因株系开花时间平均推迟29.7天,20%的转基因株系开花时期与野生型相同。对花器官形态的观察发现,转基因烟草出现花萼数目减少、花冠产生深裂、花瓣和雄蕊形状改变、雄蕊数目增多或减少等变异。这些研究结果表明35S-AGM3-E9有效地抑制了花的发育,为利用转基因手段获得不育材料的研究奠定了基础。

关键词： AGM3 Dominant negative mutation抑制开花花器官发育烟草

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杨树热激转录因子HsfAld的克隆、表达及单核苷酸多态性分析

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林业科学 2011年第7期47卷 82-90页

作者：赵杏郭琦陈清清李百炼张德强北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

利用RT-PCR方法,首次由小叶杨受热激胁迫后构建的cDNA文库中扩增获得一热激转录因子HsfAldcDNA克隆,测序结果表明克隆的PsHsfAld cDNA片段总长为2 036 bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为1 449 bp,可编码长度为482个氨基酸残基... 详细信息

利用RT-PCR方法,首次由小叶杨受热激胁迫后构建的cDNA文库中扩增获得一热激转录因子HsfAldcDNA克隆,测序结果表明克隆的PsHsfAld cDNA片段总长为2 036 bp,基因内部含有完整的开放阅读框架,大小为1 449 bp,可编码长度为482个氨基酸残基的蛋白质,所推导的蛋白质氨基酸序列在HSF DBD结构功能域与拟南芥AtHsfAld和水稻OsHsfAl蛋白的相似性分别为86.3%和87.4%.组织特异性Realtime-PCR结果显示,Ps HsfAld主要在杨树叶片和根部组织中高丰度表达.非生物胁迫、激素及糖诱导表达表明,PsHsfAld不仅受高温、干旱与盐诱导表达,还受到激素中GA3与ABA,及葡萄糖与蔗糖信号的上调表达.组合利用MEGA4.0和DnaSP4.50.7软件对小叶杨36株基因型个体的PsHsfAld序列进行比对和分析,共检测到207个单核苷酸多态性(SNP)位点,SNP频率为1/16 bp,多样性指数π为0.007 72.在编码区域,共检测到69个SNP位点,其中37个为同义突变,31个为错义突变,1个为无义突变；非同义突变与同义突变的比率0.132＜1,推测在小叶杨物种演化过程中,纯化选择是该基因内同义SNP位点主要的进化驱动力.

关键词：小叶杨 HsfAld基因热胁迫诱导表达单核苷酸多样性

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毛白杨labA-like1基因的克隆与表达特性及其表达载体的构建

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北京林业大学学报 2011年第4期33卷 55-62页

作者：刘军梅李昊崔东清叶梅霞张志毅安新民北京林业大学林木育种国家工程实验室、林木花卉遗传育种教育部重点实验室、国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京市100083

利用滤纸吸附噬菌体--PCR法,从毛白杨花芽cDNA文库中分离克隆了PtlabA-like1基因cDNA全长序列。在ConservedDomainsDatabase(CDD)中对该基因氨基酸保守结构域进行分析,发现其包含一个LabA-likesuperfamily结构域,故将其命名为PtlabA-like1。经BLAST分析,在毛果杨基因组数据库中检索到含有该保守结构域的其他9个家族成员。运用BioEdit和MEGA3.1软件,绘制了该基因家族表达蛋白的系统进化树。通过RT-PCR分析,揭示了该基因及其他家族成员在毛白杨中的组织差异表达模式:PtlabA-like1、PtlabA-like6呈现相似的组织表达模式,在茎、幼叶、成熟叶和雌雄花芽组织中均表达,但PtlabA-like1表达丰度较高;PtlabA-like8只在根部表达,且表达丰度较低;其他成员在根、茎、成熟叶、幼叶和雌雄花芽组织中均有表达,但是不同成员的表达丰度存在一定的差异。为进一步研究该基因的功能,构建了该基因的正义表达载体。

关键词：毛白杨 labA—like 克隆表达

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苏打盐碱胁迫对西伯利亚白刺光合和生长的影响

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北京林业大学学报 2011年第3期33卷 31-37页

作者：陈志强李庆贱时瑞亭张建秋王国柱张玉玲李悦北京林业大学林木花卉遗传育种教育部重点实验室林木育种国家工程实验室吉林省白城市林业科学院

采用盆栽方法,对西伯利亚白刺进行苏打盐碱胁迫,并对其生长、气体交换参数、叶绿素荧光参数进行初步研究。结果表明:适中的土壤盐碱含量能促进西伯利亚白刺生物量、苗高绝对生长量的增加,在土壤盐碱含量为0.2%时,生物量达到最大,比对照... 详细信息

采用盆栽方法,对西伯利亚白刺进行苏打盐碱胁迫,并对其生长、气体交换参数、叶绿素荧光参数进行初步研究。结果表明:适中的土壤盐碱含量能促进西伯利亚白刺生物量、苗高绝对生长量的增加,在土壤盐碱含量为0.2%时,生物量达到最大,比对照提高27.3%;在高土壤盐碱含量下,净光合速率(Pn)下降主要是由非气孔限制因素造成的,叶片含水量(LWC)和叶绿素(Chl)含量下降是导致Pn下降的部分原因;胞间CO2浓度(Ci)上升的部分原因可能是气孔不均匀性开闭造成的;叶片类胡萝卜素(Car)含量随土壤盐碱含量提高,先降后升,非光化学猝灭系数(NPQ)变化不显著,表明西伯利亚白刺可以通过提高Car含量来保持较高的NPQ。生物量与Pn、表观光能利用效率(LUE)、表观CO2利用效率(CUE)、气孔限制值(Ls)、PSⅡ的潜在活性(Fv/F0)、PSⅡ原初反应的最大量子效率(Fv/Fm)呈显著正相关;生物量、Pn、LUE、CUE、Fv/F0、Fv/Fm为第一类能够有效评价西伯利亚白刺耐苏打盐碱土能力的指标,Ls、Fm为第二类能够有效评价西伯利亚白刺耐苏打盐碱土能力的指标;评价植物耐盐性指标的有效性会因盐类型的不同而改变。

关键词：西伯利亚白刺苏打盐碱土气体交换参数叶绿素荧光参数

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白杨杂种三倍体小孢子母细胞减数分裂及花粉形态观察

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西北植物学报 2011年第12期31卷 2454-2458页

作者：许重阳王君叶粟康向阳北京林业大学林木育种国家工程实验室北京100083 林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

通过醋酸洋红压片等方法观察毛新杨×银腺杨杂种三倍体小孢子母细胞减数分裂及花粉形态,以探讨杂种三倍体雄配子的育性及其细胞学机制。结果显示:(1)在小孢子母细胞减数分裂过程中可观察到部分染色体提前分向两极、落后染色体、微... 详细信息

通过醋酸洋红压片等方法观察毛新杨×银腺杨杂种三倍体小孢子母细胞减数分裂及花粉形态,以探讨杂种三倍体雄配子的育性及其细胞学机制。结果显示:(1)在小孢子母细胞减数分裂过程中可观察到部分染色体提前分向两极、落后染色体、微核等一系列染色体异常行为,表明该三倍体存在染色体的高度不平衡性。(2)在减数第二次分裂过程中存在大量胞质分裂提前现象;减数分裂产物中发现有少量二分体、三分体的存在,同时毛新杨×银腺杨杂种三倍体花粉粒的直径变化范围为22.6～62.6μm,呈现双峰分布,由此推测有一定数量的具可育性的未减数花粉产生。

关键词：毛新杨×银腺杨杂种三倍体小孢子母细胞减数分裂可育性花粉

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甜杨低温响应microRNAs的克隆与分析

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基因组学与应用生物学 2011年第2期30卷 204-211页

作者：孙润泽侯琦章文乐钮俊张志毅林善枝北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083

MicroRNAs(miRNAs)作为一类21碱基左右的非编码小RNAs,参与植物生长发育的调控,并在植物对生物与非生物胁迫的应答过程中发挥重要作用。本研究依据miRNA高度保守特点,利用已公布的毛果杨(Populus trichocarpa)基因组序列设计引物,从甜杨... 详细信息

MicroRNAs(miRNAs)作为一类21碱基左右的非编码小RNAs,参与植物生长发育的调控,并在植物对生物与非生物胁迫的应答过程中发挥重要作用。本研究依据miRNA高度保守特点,利用已公布的毛果杨(Populus trichocarpa)基因组序列设计引物,从甜杨(Populus suaveolens)基因组中克隆获得了12个miRNA基因座序列。序列比对结果表明,这些miRNA基因均为毛果杨低温响应miRNA基因的同源序列。同时,以低温(0℃)处理0～48h的甜杨幼苗为试材,通过半定量RT-PCR法对miRNA基因的成熟体序列在不同处理时间下的表达谱进行分析,结果显示,大多数miRNA成熟体序列在甜杨低温胁迫下的表达模式与其在毛果杨中的表达极为相似,由此可推测这些保守性miRNAs可能在甜杨和毛果杨两物种对低温胁迫的应答反应中发挥相似的功能,而miR168a、miR168b和miR475a在两物种间表达现象的差异,表明它们可能通过调控多种靶基因而发挥不同作用。本文结果将为进一步研究甜杨基因功能提供基础。

关键词：甜杨 microRNA 低温胁迫表达谱

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植物多胺代谢途径研究进展

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生物工程学报 2011年第2期27卷 147-155页

作者：刘颖王莹龙萃张志毅庞晓明北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室北京100083 暨南大学生物工程学系广州510632

多胺是一类小分子生物活性物质,广泛存在于生物体内,与植物的生长发育、衰老及抗逆性都有着密切的联系。目前,在植物中的多胺合成途径已经基本揭示,其生理作用在分子水平上逐步得到阐明。对多胺合成突变体和各种转基因植物的研究也使得... 详细信息

多胺是一类小分子生物活性物质,广泛存在于生物体内,与植物的生长发育、衰老及抗逆性都有着密切的联系。目前,在植物中的多胺合成途径已经基本揭示,其生理作用在分子水平上逐步得到阐明。对多胺合成突变体和各种转基因植物的研究也使得人们更深入地了解了多胺以及其合成代谢相关酶在植物生长发育等生理过程中的重要作用。以下概述了植物多胺代谢途径,重点综述了代谢途径中各基因的功能及遗传操作的最新进展,并对将来的研究方向尤其是相关基因在植物抗逆境(包括生物和非生物逆境)基因工程方面的应用作了讨论。

关键词：多胺代谢途径生物合成途径抗病性亚精胺合成酶

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铅胁迫对毛白杨组培生根苗生理生化及根尖细胞微管骨架的影响

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核农学报 2011年第6期25卷 1268-1273页

作者：余洋安新民郝瑞芝武佳叶荆艳萍北京林业大学林木育种国家工程实验室/林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083

用50μmol/L硝酸铅对毛白杨组培生根苗进行不同时间的处理,测定叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)4种抗氧化酶活性水平和丙二醛(MDA)含量的变化;并通过间接免疫荧光染色法观察根尖... 详细信息

用50μmol/L硝酸铅对毛白杨组培生根苗进行不同时间的处理,测定叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、抗坏血酸过氧化物酶(APX)4种抗氧化酶活性水平和丙二醛(MDA)含量的变化;并通过间接免疫荧光染色法观察根尖分生区细胞的微管骨架。结果显示:铅能使毛白杨叶片APX和POD活性出现先增加后下降的变化趋势,但不能刺激CAT和SOD活性的显著增加;长时间的铅处理能抑制4种酶的活性并导致脂质过氧化程度加剧。铅胁迫导致毛白杨根尖细胞微管骨架发生异常,主要体现在周质微管发生扭曲倾斜分布,纺锤体极发生偏转,细胞分裂面的方向在毛白杨根尖细胞中发生改变。研究表明毛白杨组培生根苗抗氧化系统中APX和POD响应铅胁迫并起主要防御作用,其根尖细胞微管骨架参与了对铅胁迫的初始应答过程。

关键词：毛白杨铅微管骨架抗氧化酶

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毛白杨PtSEP2基因启动子克隆和瞬时表达特性分析

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中国生物工程杂志 2011年第5期31卷 42-47页

作者：崔东清叶梅霞刘军梅李昊张志毅安新民北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083

利用PCR技术从毛白杨基因组DNA中扩增获得花器官发育相关的SEPALLATA2类似基因PtSEP2 5'侧翼约2.3kb的一段序列,经PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及多种光应答元件,初步推测其为PtSEP2基因启动子。进一步... 详细信息

利用PCR技术从毛白杨基因组DNA中扩增获得花器官发育相关的SEPALLATA2类似基因PtSEP2 5'侧翼约2.3kb的一段序列,经PlantCARE序列分析表明,该序列中含有启动子特征的保守序列及多种光应答元件,初步推测其为PtSEP2基因启动子。进一步以GUS为报告基因,构建了pPtSEP2 promoter∷GUS的植物表达载体,命名为PtSEP2p∷GUS。以烟草根、茎、叶、花芽为受体,通过农杆菌介导转化植物表达载体PtSEP2p∷GUS进行瞬时表达研究,结果表明该启动子能够驱动GUS报告基因在烟草花药中表达,而其表达活性弱于组成型表达的花椰菜花叶病毒(CaMV)35S启动子。该启动子的获得对于杨树及其他开花调控基因工程研究具有重要的应用价值。

关键词：毛白杨 SEPALLATA2启动子 GUS活性瞬时表达

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毛白杨PtFT1和PtFT2基因编码区克隆与表达模式分析

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中国生物工程杂志 2011年第12期31卷 63-71页

作者：陈仲李昊李英王佳叶梅霞郭斌季乐翔安新民北京林业大学林木育种国家工程实验室林木花卉遗传育种教育部重点实验室国家林业局树木花卉育种与生物工程重点开放实验室北京100083

以毛白杨为材料,采用同源基因克隆法从毛白杨中分离了FT(FLOWERING LOCUS T)同源基因PtFT1和PtFT2编码区序列。测序结果表明PtFT1和PtFT2编码区长度均为525bp,可编码174个氨基酸。蛋白序列比对发现这两个基因与拟南芥、葡萄等物种中FT... 详细信息

以毛白杨为材料,采用同源基因克隆法从毛白杨中分离了FT(FLOWERING LOCUS T)同源基因PtFT1和PtFT2编码区序列。测序结果表明PtFT1和PtFT2编码区长度均为525bp,可编码174个氨基酸。蛋白序列比对发现这两个基因与拟南芥、葡萄等物种中FT同源基因所编码的氨基酸同源性达到75%以上,PtFT1和PtFT2所推测的氨基酸序列包含FT类蛋白保守基序(LGRQTVYAPGWRQN)和两个关键性氨基酸残基Tyr84(Y),Gln139(Q)。系统进化分析进一步表明PtFT1和PtFT2属于FT亚家族成员。采用Real-time qRT-PCR技术检测PtFT1和PtFT2在各个组织部位中的表达模式,结果表明PtFT1和PtFT2在各个组织部位均有表达,但这两个基因的表达水平存在差异;两个基因在早期雌雄花芽(7月5日)表达量明显高于成熟雌雄花芽(翌年3月10日)表达量,进而推测在毛白杨中PtFT1和PtFT2的表达响应日照长短,长日照条件促进这两个基因的表达,它们可能在光周期调控的开花途径中促进花芽分化和开花发挥特定作用。这些研究对于阐明PtFT1和PtFT2在光周期开花调控途径中的作用机制具有重要意义,为进一步开展毛白杨开花调控基因工程研究奠定了工作基础。

关键词：毛白杨 FT 表达模式 qRT-PCR

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