检索结果-内蒙古大学图书馆

医学研究生学报 2006年第3期19卷 202-204,209页

作者：杨湘越兰小鹏钟智强朱忠勇南京军区福州总医院解放军医学检验中心福建福州350025

目的:建立新的检测方法,克隆并表达人干燥综合征B抗原(SS-B)。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆SS-B全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG... 详细信息

目的:建立新的检测方法,克隆并表达人干燥综合征B抗原(SS-B)。方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆SS-B全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(W estern b lot)试验。结果:PCR产物约为1 200 bp,与预期1 224 bp接近,测序结果与Gen-Bank报道的完全一致。pGEX-5T-SS-B重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和W estern b lot结果显示融合蛋白相对分子质量为71 000,具有天然SS-B的免疫原性。结论:成功克隆表达SS-B,为下一步研究奠定了基础。

关键词：人干燥综合征B抗原基因克隆融合表达

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人干燥综合征B抗原在巴斯德毕赤酵母菌中的高效分泌表达研究

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医学研究生学报 2006年第11期19卷 976-979页

作者：杨湘越兰小鹏吴文冰冯福英廖剑朱忠勇南京军区福州总医院解放军医学检验中心福建福州350025

目的：通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B（SS—B）抗原。方法：PCR扩增SS—B基因，与酵母菌表达载体pPIC9k重组，构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选... 详细信息

目的：通过基因克隆在巴斯德毕赤酵母菌中表达人干燥综合征B（SS—B）抗原。方法：PCR扩增SS—B基因，与酵母菌表达载体pPIC9k重组，构建表达质粒pPIC9k—SS—B。用电穿孔法转化酵母菌SMD1168，在MD平板上筛选重组克隆，用G418快速筛选高拷贝转化子，阳性克隆经甲醇诱导表达后，培养上清用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）和免疫酶斑点法鉴定。结果：PCR产物约为1200bp，与预期1224bp接近；pPIC9k—SS-B重组阳性克隆测序结果与GenBank核酸数据库报道完全一致，双酶切鉴定正确。表达产物SS-B的相对分子质量约48000，高拷贝毕赤酵母菌转化菌显著高于低拷贝的表达水平，表达量占分泌总蛋白的60％以上，产物浓度为800～900mg／L。免疫酶斑点法证实表达产物具有天然SS—B分子的免疫原性。阴性对照菌未见目的表达条带。结论：SS—B存巴斯德毕赤酵母菌中获得高效分泌表达，为下一步研究打下了基础。

关键词：人干燥综合征B抗原克隆表达巴斯德毕赤酵母菌

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三种简易提取全血基因组DNA方法的比较

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中国实验诊断学 2006年第3期10卷 264-266页

作者：涂向东江清华兰风华南京军区福州总医院全军医学检验中心实验科福建福州350025 福建医科大学检验系

目的比较三种快速、简便、适用、低成本的从全血中提取基因组DNA的方法。方法选用快速氯仿-异戊醇法、简化盐析法、改良碘化钾法直接从全血中提取基因组DNA。结果改良碘化钾法提取的DNA纯度及含量最高,快速氯仿-异戊醇法次之,简化盐析... 详细信息

目的比较三种快速、简便、适用、低成本的从全血中提取基因组DNA的方法。方法选用快速氯仿-异戊醇法、简化盐析法、改良碘化钾法直接从全血中提取基因组DNA。结果改良碘化钾法提取的DNA纯度及含量最高,快速氯仿-异戊醇法次之,简化盐析法则相对较低。结论改良碘化钾法为较好的提取基因组DNA的方法。

关键词：基因组DNA 外周血提取

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人卵细胞ZP3蛋白在大肠杆菌中的表达与鉴定

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东南国防医药 2006年第4期8卷 243-244,255页

作者：李津谢飞涂向东郑德柱兰风华第二军医大学福州总医院临床医学院福建福州350025 南京军区福州总医院全军医学检验中心福建福州350025

目的构建人卵细胞ZP 3蛋白的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法提取人卵巢中总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增ZP 3蛋白编码序列,PCR产物经B amH I/N heⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-H is中,在*** li BL 21-DE 3中诱导ZP 3... 详细信息

目的构建人卵细胞ZP 3蛋白的原核重组载体并进行表达和鉴定。方法提取人卵巢中总RNA,逆转录合成cDNA,自行设计引物,PCR扩增ZP 3蛋白编码序列,PCR产物经B amH I/N heⅠ双酶切后,克隆至表达载体pET-H is中,在*** li BL 21-DE 3中诱导ZP 3融合蛋白的表达。结果在异丙基-β-硫代半乳糖苷(IPTG)的诱导下,重组菌高效表达出一个相对分子质量约为50 000的产物。结论人卵细胞ZP 3蛋白的全长编码序列已被克隆至ZP 3蛋白融合表达载体pET-H is,并在*** li BL 21-DE 3中获得高表达。

关键词：人卵细胞ZP3蛋白克隆基因表达

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抗精子抗体与免疫不育的研究进展

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福建医科大学学报 2006年第1期40卷 93-96页

作者：陈平苏东辉兰风华福建医科大学免疫系福州350004 南京军区福州总医院全军医学检验中心福州350025

大量研究表明,抗精子抗体(ASA)是导致免疫不育的主要原因之一,存在于男女不育患者的血清、精液、宫颈黏液、阴道分泌液及卵泡液中。不同实验室采取的ASA检测方法不同。其检出率也不一致,但总体上男女不育组的检出率(9%－36%)明显高于正... 详细信息

大量研究表明,抗精子抗体(ASA)是导致免疫不育的主要原因之一,存在于男女不育患者的血清、精液、宫颈黏液、阴道分泌液及卵泡液中。不同实验室采取的ASA检测方法不同。其检出率也不一致,但总体上男女不育组的检出率(9%－36%)明显高于正常生育组(0.9%－4%)。笔者就ASA相关的精子靶抗原、ASA的产生、ASA对生育的影响、ASA的检测与治疗等研究进展作一综述。[第一段]

关键词： IgA IgG IgM 不育自身抗体

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诱骗受体3的研究进展

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医学研究生学报 2006年第9期19卷 833-837页

作者：钟智强兰小鹏福建医科大学临床学院(南京军区福州总医院)解放军医学检验中心福建福州350025

诱骗受体3(D cR3)又称肿瘤坏死因子受体-6B(TNFR-6B或TR6),也有人称之为TR6,是新近发现的TNFR超家族成员,它具有调节细胞凋亡和免疫细胞活性及分化的生物学特性,D cR3在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫及抗感染免疫中发挥着重要作用。该... 详细信息

诱骗受体3(D cR3)又称肿瘤坏死因子受体-6B(TNFR-6B或TR6),也有人称之为TR6,是新近发现的TNFR超家族成员,它具有调节细胞凋亡和免疫细胞活性及分化的生物学特性,D cR3在肿瘤免疫、自身免疫、移植免疫及抗感染免疫中发挥着重要作用。该文作者就D cR3在分子免疫学方面的研究进展进行综述。

关键词：诱骗受体3 受体肿瘤坏死因子凋亡

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不明原因胆碱酯酶缺乏2例

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军医进修学院学报 2006年第5期27卷 370-370页

作者：张丽君徐振明林宝顺叶新德解放军第十一医院检验科新疆伊宁835000 南京军区福州总医院全军医学检验中心福建福州350025

1 临床病例1.1 方法空腹抽取患者静脉血 3 ml, 2 h 内采用酶速率法在Olympus AU 400全自动生化分析仪(日本)上检测拟胆碱酯酶(PCHE),我院PCHE测定正常参考值为 4 035～10 733 U/L.

关键词：胆碱酯酶类

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战时基层医院输血工作中存在的若干问题

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军医进修学院学报 2005年第3期26卷 169-169,207页

作者：张丽君林宝顺徐振明祁文解放军第十一医院检验科新疆伊宁835000 南京军区福州总医院全军医学检验中心福建福州350025

我院地处西北边陲,2003年8月,上海经合组织'联合–2003'中亚五国武装反恐军事演习在此举行,我院成功地完成参演部队的卫勤保障任务.今年又被指定为机动力量卫勤保障分队,担负北疆地区反恐部队的卫勤保障任务.如何做好战时血液... 详细信息

我院地处西北边陲,2003年8月,上海经合组织'联合–2003'中亚五国武装反恐军事演习在此举行,我院成功地完成参演部队的卫勤保障任务.今年又被指定为机动力量卫勤保障分队,担负北疆地区反恐部队的卫勤保障任务.如何做好战时血液采、供、贮、运输工作,便摆在了我们的面前.

关键词：医院管理军队工作输血工作血液供应

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体外定点突变法构建凝血因子ⅦC329G突变型真核表达载体

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生物技术通讯 2005年第4期16卷 409-410页

作者：李极品连云宗吴玉水程烽朱忠勇南京军区福州总医院全军医学检验中心福建福州350025

以野生型凝血因子Ⅶ(FⅦ)真核表达载体为模板,通过定点突变方法构建FⅦC329G突变型表达载体;序列分析鉴定C329G突变重组子。重组子目的基因的序列分析结果显示FⅦ基因编码的第329个半胱氨酸残基被甘氨酸残基替换(C329G),即成功构建了FⅦ... 详细信息

以野生型凝血因子Ⅶ(FⅦ)真核表达载体为模板,通过定点突变方法构建FⅦC329G突变型表达载体;序列分析鉴定C329G突变重组子。重组子目的基因的序列分析结果显示FⅦ基因编码的第329个半胱氨酸残基被甘氨酸残基替换(C329G),即成功构建了FⅦC329G突变型真核表达载体,为下一步在哺乳类细胞中表达该突变型FⅦ,并对其进行功能性研究提供了条件。

关键词：凝血因子Ⅶ 定点突变真核表达载体

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EB病毒包膜糖蛋白gp85真核表达载体的构建

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生物技术通讯 2005年第3期16卷 276-277页

作者：连云宗李极品吴玉水程烽朱忠勇南京军区福州总医院全军医学检验中心福建福州350025

用基因工程技术克隆EB病毒中抗原性较强的膜蛋白gp85的编码基因BXLF2,构建真核表达载体。以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增出BXLF2基因。PCR产物经SnaBⅠ和NotⅠ双酶切后克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,用双酶切和DNA测序鉴定重... 详细信息

用基因工程技术克隆EB病毒中抗原性较强的膜蛋白gp85的编码基因BXLF2,构建真核表达载体。以EB病毒B95-8细胞培养上清为模板,PCR扩增出BXLF2基因。PCR产物经SnaBⅠ和NotⅠ双酶切后克隆至毕赤酵母表达载体pPIC9K,用双酶切和DNA测序鉴定重组质粒。重组质粒双酶切的片段大小与预期符合,重组克隆外源基因的测序结果与文献报道一致。结果表明,EB病毒gp85的编码基因BXLF2被成功地克隆入真核表达载体pPIC9K,为下一步在毕赤酵母中表达EB病毒gp85蛋白建立了基础。

关键词：真核表达载体 EB病毒包膜糖蛋白构建基因工程技术酵母表达载体编码基因重组质粒 PCR扩增 PCR产物 DNA测序双酶切细胞培养文献报道外源基因重组克隆毕赤酵母膜蛋白抗原性

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