检索结果-内蒙古大学图书馆

中国兽医学报 2000年第2期20卷 163-166页

作者：秦磊姚火春陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

将嗜水气单胞菌 ( Ah) J-1株的 HEC毒素和胞外蛋白酶 ( ECP)分别与迟缓爱德华氏菌 ( Et) 3 8株的脂多糖 ( LPS)及脱毒多糖 ( PS)偶联 ,制成 3种亚单位二联疫苗 :HEC-PS、ECP-PS、HEC-LPS。将它们与 Ah J-1和 Et3 8全菌灭活疫苗一同分别... 详细信息

将嗜水气单胞菌 ( Ah) J-1株的 HEC毒素和胞外蛋白酶 ( ECP)分别与迟缓爱德华氏菌 ( Et) 3 8株的脂多糖 ( LPS)及脱毒多糖 ( PS)偶联 ,制成 3种亚单位二联疫苗 :HEC-PS、ECP-PS、HEC-LPS。将它们与 Ah J-1和 Et3 8全菌灭活疫苗一同分别免疫小鼠 ,并设注射 PBS对照组 ,检测各组小鼠体液免疫及细胞免疫水平。结果显示 ,用间接 ELISA、溶血抑制和全菌凝集试验检出这 3种亚单位疫苗的抗体水平无明显差异 ,并且都对 Et3 8有凝集活性。用 MTT法检测脾淋巴细胞转化率和腹腔巨噬细胞吞噬活性 ,显示亚单位疫苗的细胞免疫指标均明显高于对照组 ,但略低于全菌苗免疫组。在第 2次免疫后的第 6周 ,分别用 1 0 0 LD5 0 Ah J-1和2 .3 7× 1 0 7CFU Et3 8攻击 ,Ah J-1攻击各组的保护率依次为 ,HEC-PS组 83 .3 %、ECP-PS组 80 %、HEC-LPS组 92 .3 %、Ah J-1全菌组 1 0 0 %、Et 3 8全菌组 2 5%、对照组无保护力 ;Et 3 8攻击各组的保护率依次为HEC-PS组 90 %、ECP-PS组 90 .9%、HEC-LPS组 85.7%、Ah J-1全菌组 62 .5%、Et3 8全菌组 1 0 0 %、对照组为 1 2 .5%。表明

关键词：嗜水气单胞菌迟缓爱德华氏菌二联亚单位疫苗

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嗜水气单胞菌J-1株粘附素及其受体分析

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南京农业大学学报 2002年第2期25卷 82-84页

作者：朱兴国范红结陆承平陈怀青南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

以EPC细胞和HEp 2细胞为细胞模型 ,用嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila ,Ah)J 1株进行粘附试验 ,同时以Ah4型菌毛的抗血清作粘附抑制试验 ,用以分析AhJ 1株的粘附素及其受体。EPC细胞粘附和粘附抑制试验证实 ,AhJ 1株粘附素受体具有... 详细信息

以EPC细胞和HEp 2细胞为细胞模型 ,用嗜水气单胞菌 (Aeromonashydrophila ,Ah)J 1株进行粘附试验 ,同时以Ah4型菌毛的抗血清作粘附抑制试验 ,用以分析AhJ 1株的粘附素及其受体。EPC细胞粘附和粘附抑制试验证实 ,AhJ 1株粘附素受体具有甘露糖、胆固醇成分 ,有少量半乳糖成分 ,无葡萄糖成分。HEp 2细胞粘附和粘附抑制试验证实 ,与其它非菌毛粘附素如S层及外膜蛋白相比 ,Ah 4型菌毛的粘附作用较为显著。抗 4型菌毛抗体抑制细菌的粘附力达 80 %以上。抗S层、外膜蛋白抗体也能使细菌的粘附力下降 ,表明Ah的粘附作用由菌毛粘附素与非菌毛粘附素共同参与。

关键词：嗜水气单胞菌J-1株 4型菌毛细胞粘附和粘附抑制试验粘附素受体

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鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测

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微生物学报 2008年第1期48卷 98-102页

作者：潘华奇曹瑞兵刘磊孙海亮姬向波陈勇军陈溥言南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室南京210095 甘肃农业大学动物医学院兰州730070

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培... 详细信息

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因。将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoRⅠ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1。将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPVgB蛋白主要抗原域的高效表达。免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性。应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPVgB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA。结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490>0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490>2。应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%。

关键词：鸭瘟病毒 gB蛋白原核表达抗原域间接ELISA

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PRRSV NSP2基因在重组杆状病毒中的表达与鉴定

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中国预防兽医学报 2009年第7期31卷 509-512页

作者：宋艳华王海燕李文良李军星李玉峰王先炜姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP2)之间的差异和生物学特性,本研究根据PRRSV、S1、SY0608株NSP2基因序列保守区设计引物,通过RT-PCR扩增出两毒株的NSP2基因,克隆到pFastBacTMHTB杆状病毒载体中,将筛选的阳性重组载... 详细信息

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)非结构蛋白2(NSP2)之间的差异和生物学特性,本研究根据PRRSV、S1、SY0608株NSP2基因序列保守区设计引物,通过RT-PCR扩增出两毒株的NSP2基因,克隆到pFastBacTMHTB杆状病毒载体中,将筛选的阳性重组载体pF-S1-NSP2和pF-SY-NSP2,分别转化至含有杆状病毒穿梭载体的DH10Bac感受态大肠杆菌中,经蓝白菌落筛选和PCR鉴定,获得重组表达载体rBac-S1-NSP2和rBac-SY-NSP2。在脂质体介导下转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒rAc-S1-NSP2和rAc-SY-NSP2,Westernblot和间接免疫荧光实验结果表明,本研究成功构建了表达PRRSVS1和SY0608株NSP2蛋白的重组杆状病毒,表达的蛋白与自然感染PRRSV的猪血清均具有良好的反应原性,为进一步研究NSP2蛋白的功能及生物学和免疫学特性奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 NSP2 杆状病毒

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鲍氏不动杆菌鳜鱼分离株的侵袭特性

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中国兽医学报 2000年第5期20卷 468-470页

作者：顾天钊陆承平陈怀青南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

取从发病鳜鱼体内分离到的鲍氏不动杆菌 ( Acinetobacterbaumannii) MF1株 ,以 HEp-2细胞为指示细胞 ,用庆大霉素清洗裂解培养法和细胞超薄切片电镜观察 ,研究了 MF1株对 HEp-2细胞的侵袭力 ,同时用庆大霉素清洗裂解培养法比较了细菌在 ... 详细信息

取从发病鳜鱼体内分离到的鲍氏不动杆菌 ( Acinetobacterbaumannii) MF1株 ,以 HEp-2细胞为指示细胞 ,用庆大霉素清洗裂解培养法和细胞超薄切片电镜观察 ,研究了 MF1株对 HEp-2细胞的侵袭力 ,同时用庆大霉素清洗裂解培养法比较了细菌在 4、1 0、2 8、37℃的侵袭力。结果显示 ,MF1株在 2 8、37℃时侵袭 HEp-2细胞 ,侵袭率达 0 .2 % ,细菌入胞后能增殖。MFl株在侵袭 HEp-2细胞 1 0～ 1 2 h时 ,胞内细菌数最多。电镜观察 ,可见胞内有内化的 MF1菌株。 MF1株在 4、1 0℃下不具侵袭力。

关键词：鲍氏不动杆菌侵袭性庆大霉素清洗裂解增养法

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副猪嗜血杆菌人工感染猪的病理学观察

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中国兽医学报 2007年第1期27卷 91-94页

作者：尹秀凤张书霞王艳姜平汤景元南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏... 详细信息

用副猪嗜血杆菌分离株感染断奶仔猪,发病仔猪临床表现为体温中度升高、精神不振、被毛粗乱、站立不稳、厌食、呼吸困难。尸体剖检,可见胸腹腔纤维素渗出严重,有大量的渗出液、肺出血及脑充血等;病理组织学表现为,肺脏、心脏、脾脏等脏器含有大量的中性粒细胞的纤维蛋白性多发性浆膜炎、脑膜炎及支气管肺炎。结果表明,此分离株为一高致病潜力的菌株。

关键词：副猪嗜血杆菌感染病理学仔猪

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猪脑心肌炎病毒NJ08株基因组序列测定与分析

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中国预防兽医学报 2011年第5期33卷 402-404页

作者：白娟蒋康富李玉峰王先炜姜平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

为测定猪源脑心肌炎病毒(EMCV)NJ08分离株全基因序列,本研究应用RT-PCR方法分5个基因片段扩增NJ08分离株的基因组,同时应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增3'-UTR和5'-UTR,分别克隆于pMD18-T载体中进行测序,获得EMCVNJ08株全... 详细信息

为测定猪源脑心肌炎病毒(EMCV)NJ08分离株全基因序列,本研究应用RT-PCR方法分5个基因片段扩增NJ08分离株的基因组,同时应用3'-RACE和5'-RACE技术扩增3'-UTR和5'-UTR,分别克隆于pMD18-T载体中进行测序,获得EMCVNJ08株全基因组cDNA序列,并将全基因组及其推导的氨基酸序列与GenBank中登录的国内外参考病毒株进行同源性比较及系统进化分析。结果表明:EMCVNJ08分离株基因组全长7724bp;属于Ia亚群;与GXLC、GX0602、BJC3、HB1等国内分离株以及BEL-2887A、CBNU、K3、K11、EMCV-R、PV21等国外分离株同源性达99%以上;EMCV流行株的非结构蛋白中3D最为保守,2A变异最大,结构蛋白中VP2最为保守,VP1变异最大。本研究丰富了我国EMCV分子流行病学资料。

关键词：脑心肌炎病毒基因组序列分析

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2种猪源链球菌菌体细胞表面疏水性及体外结合纤连蛋白的检测

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中国兽医学报 2006年第3期26卷 278-280页

作者：孙理云陆承平南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

采用盐析法测定了马链球菌兽疫亚种ATCC35246株(简称35246)和猪链球菌2型9801株(简称HA9801)的表面疏水性。35246在浓度为1.0mol/L的硫酸铵中2min内析出,HA9801在0.6mol/L的硫酸铵中析出。用不同浓度的人纤连蛋白(Fn)包被ELISA板,采用EL... 详细信息

采用盐析法测定了马链球菌兽疫亚种ATCC35246株(简称35246)和猪链球菌2型9801株(简称HA9801)的表面疏水性。35246在浓度为1.0mol/L的硫酸铵中2min内析出,HA9801在0.6mol/L的硫酸铵中析出。用不同浓度的人纤连蛋白(Fn)包被ELISA板,采用ELISA方法检测了对数生长后期的35246和HA9801体外结合固定Fn的情况。35246的D415随细菌浓度的升高而增大,而9801的D415与对照相比,经t检验差异不显著(P>0.05)。采用间接免疫荧光试验,对二者体外结合游离的人Fn的情况进行了检测,结果在2种细菌周围均见绿色荧光。结果表明,二菌均为表面疏水菌;35246株既可结合固定的Fn,又可结合游离的Fn;而HA9801株仅与游离的Fn结合。

关键词：马链球菌兽疫亚种猪链球菌2型表面疏水性纤连蛋白结舍

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米非司酮的抗伪狂犬病毒作用及其与氢醌的协同效应

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南京农业大学学报 2023年第2期46卷 316-323页

作者：李紫彤赵晨遥朱慧欣蓝培如王先炜南京农业大学动物医学院/农业农村部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

[目的]本试验探究药物米非司酮的抗伪狂犬病毒(PRV)作用及其与另一种抗伪狂犬病毒药物氢醌的协同作用,为抗PRV药物的研究和临床应用奠定基础。[方法]用Western blot和qPCR等方法检测米非司酮及其与氢醌联用在体外对伪狂犬病毒复制的影... 详细信息

[目的]本试验探究药物米非司酮的抗伪狂犬病毒(PRV)作用及其与另一种抗伪狂犬病毒药物氢醌的协同作用,为抗PRV药物的研究和临床应用奠定基础。[方法]用Western blot和qPCR等方法检测米非司酮及其与氢醌联用在体外对伪狂犬病毒复制的影响及其影响的作用阶段,再通过小鼠攻毒保护试验进一步确认其抗病毒作用及与氢醌联用的协同作用。[结果]15μmol·L^(-1)米非司酮具有抗病毒作用,且随着浓度升高而增强,此作用发生于伪狂犬病毒复制早期。体内、体外试验结果表明,米非司酮(体内5μmol·L^(-1)、体外40 mg·kg^(-1))单独或与氢醌(体内5μmol·L^(-1)、体外50 mg·kg^(-1))联用均具有抗病毒作用,与氢醌具有协同抗病毒作用,同时能减轻单独用药对肝脏的损伤。[结论]米非司酮在病毒复制早期发挥抗病毒作用,与氢醌的联用具有更好的抗病毒效果,既减轻氢醌对肝脏的损伤,又弥补米非司酮药效上的不足。

关键词：猪伪狂犬病毒米非司酮抗病毒氢醌协同效应

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人工合成的脑心肌炎病毒VP1表位基因在大肠杆菌中的表达与抗原性测定

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南京农业大学学报 2005年第4期28卷 100-103页

作者：韩研妍姜平顾小雪李玉峰南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室江苏南京210095

在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列(150 bp),克隆于原核表达载体pGEX-6p-1,经酶切鉴定后转化大肠杆菌(***)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。经过GSTrap... 详细信息

在分析脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位基础上人工合成一段含VP1抗原表位双链DNA序列(150 bp),克隆于原核表达载体pGEX-6p-1,经酶切鉴定后转化大肠杆菌(***)BL21感受态细胞,以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白。经过GSTrap FF亲和层析柱获得纯化蛋白,经SDS-PAGE电泳显示相对分子质量为30 800。以该纯化蛋白免疫家兔,获得效价分别为1∶25 600和1∶1 600的抗血清。W estern-b lot结果显示该融合蛋白与经过空载体pGEX-6p-1表达的GST蛋白孵育的抗血清反应后有明显的特异性条带。结果表明:脑心肌炎病毒VP1蛋白抗原表位区150 bp编码基因在***中获得正确表达,纯化后的蛋白具有抗原性。

关键词：脑心肌炎病毒 VP1蛋白抗原表位原核表达抗原性

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