检索结果-内蒙古大学图书馆

辅助性CD4^+ T细胞亚群失衡在实验性自身免疫性重症肌无力大鼠发病机制中的作用

中国生物制品学杂志 2010年第9期23卷 930-934页

作者：王小冬孙博王菁华孔庆飞谢晓丽周明言李娜李呼伦穆莉莉哈尔滨医科大学附属第二医院急诊科哈尔滨150086 哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省高校神经生物学重点实验室哈尔滨150081

目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初... 详细信息

目的研究实验性自身免疫性重症肌无力(Experimental autoimmune myasthenia gravis,EAMG)大鼠发病过程中辅助性CD4+T细胞亚型的变化。方法将Lewis大鼠分为完全弗氏佐剂(CFA)早、晚期发病时对照相和EAMG早期(初次免疫后13d)、高峰期(初次免疫后50d)发病时相4组,各组分别给予相应的药物后,于发病早期和高峰期分离淋巴细胞,采用流式细胞术检测各组大鼠淋巴细胞中Th1、Th2、Th17和Treg细胞的比例,ELISA法检测淋巴细胞培养上清中各种细胞因子水平。结果在EAMG发病的早期时相,与CFA组比较,EAMG组Th1、Th2、Th17细胞的比例下降,而Treg细胞比例上升;淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-4水平显著下降(P<0.05),IL-6水平显著升高(P<0.05),IL-17和TGF-β水平略升高,但差异无统计学意义(P>0.05)。在EAMG发病的高峰期,与CFA组比较,EAMG组Th1和Th17细胞的比例显著上升(P<0.05),而Th2和Treg细胞的比例显著下降(P<0.05),淋巴细胞培养上清中IFNγ和IL-17水平显著上升(P<0.05),IL-4和TGF-β水平显著下降(P<0.01),IL-6水平略上升,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论在EAMG发生过程中,4种辅助性CD4+T细胞亚型之间的平衡被打破,晚期时相中Th1和Th17细胞比例上升,而Th2和Treg细胞比例下降。

关键词：重症肌无力,自身免疫性,实验性 Th1细胞 Th2细胞 Th17细胞 Treg细胞

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骨髓间充质干细胞对大鼠胶质瘤细胞增殖的影响

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国际免疫学杂志 2010年第6期33卷 481-485页

作者：王菁华戢玉环穆莉莉孙博王广友王丹丹刘玉梅孔庆飞李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省普通高校神经生物重点实验室哈尔滨150081

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的影响，并且探讨其相关机制。方法提取SD大鼠BMSC，进行体外培养、扩增。应用MTt比色法检测不同浓度BMSC上清液对C6细胞系增殖的抑制作用。用Transwell小室将BMSC与C6细胞进... 详细信息

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠脑胶质瘤C6细胞增殖的影响，并且探讨其相关机制。方法提取SD大鼠BMSC，进行体外培养、扩增。应用MTt比色法检测不同浓度BMSC上清液对C6细胞系增殖的抑制作用。用Transwell小室将BMSC与C6细胞进行双层培养，以HE染色法检测C6细胞形态变化。用划痕实验检测细胞迁移情况。结果MTF结果显示BMSC上清液对C6细胞有抑制作用，120h后1：8、1：4、1：2的BMSC上清稀释液、BMSC上清原液培养组的生长抑率分别为17．1％、26．0％、39．9％、43．1％；与BMSC进行双层培养后的C6细胞其形态发生了明显改变，由圆形或多角形变为长梭形，细胞包体伸出长突起；划痕实验显示在36h时对照组迁移率为100％，划痕完全愈合，而BMSC上清组划痕未见全愈合，迁移率为82％。结论①BMSC上清液能抑制胶质瘤C6细胞的恶性增殖，而且抑制效应呈剂量依赖性；②BMSC对C6的运动和迁移产生了抑制作用，从而降低了其恶性侵袭程度。

关键词：骨髓间充质干细胞胶质瘤细胞增殖共培养

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系统性红斑狼疮患者血清特异性的噬菌体7肽的筛选、鉴定及其意义

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中华微生物学和免疫学杂志 2010年第7期30卷 665-669页

作者：王垚苏丽菊李辉刘彦虹翟爱霞考文萍吴静李文辉胡云龙钟照华张凤民哈尔滨医科大学微生物学教研室 150086 哈尔滨医科大学附属第二医院检验科黑龙江省感染与免疫重点实验室黑龙江省普通高校病原生物学重点实验室

目的筛选和鉴定与系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义.方法分别选取正常人及SLE患者血清各30例,先后用正常人混合血清及SLE患者混合血清作为筛选配基,对噬菌体随机7... 详细信息

目的筛选和鉴定与系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus,SLE）患者血清特异性结合的噬菌体7肽,并分析其实际意义.方法分别选取正常人及SLE患者血清各30例,先后用正常人混合血清及SLE患者混合血清作为筛选配基,对噬菌体随机7肽库进行亲和筛选、扩增,获得SLE血清特异性结合的噬菌体克隆,并用患者混合血清进行Dot-ELISA实验鉴定获得的噬菌体克隆,进而分别用SLE患者及正常人血清各12例进一步鉴定阳性噬菌体的混合克隆,确定阳性噬菌体克隆与个体血清之间的结合情况;并对最终鉴定的噬菌体克隆进行测序与比对分析.结果筛选到与SLE患者混合血清特异性结合的阳性克隆12个;阳性噬菌体混合克隆与SLE患者个体血清反应阳性率明显高于其与正常人血清的反应率;序列分析显示阳性噬菌体克隆的抗原表位与大肠杆菌、沙门菌、人类免疫缺陷病毒（HIV）有一定的同源性,但与人类抗原表位无关.结论噬菌体随机7肽库筛选出的SLE特异性多肽可能用于制备SLE诊断试剂,同时SLE患者血清中存在与病原体抗原表位结合的抗体成分,提示SLE可能与病原体感染有关.

关键词：噬菌体随机肽库系统性红斑狼疮血清

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模拟微重力培养对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠淋巴细胞功能的影响

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国际免疫学杂志 2010年第2期33卷 157-162页

作者：白莎莎王菁华孔庆飞刘玉梅刘希君孙博王广友李娜李呼伦哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省普通高等学校神经生物重点实验室150081

目的观察模拟微重力条件下实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠淋巴细胞细胞功能的变化。方法尾根免疫MBP668-86建立EAE模型；12d时处死大鼠，分离培养淋巴结细胞；利用旋转式细胞培养系统进行模拟微重力培养；不同时间点，增殖实验检... 详细信息

目的观察模拟微重力条件下实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠淋巴细胞细胞功能的变化。方法尾根免疫MBP668-86建立EAE模型；12d时处死大鼠，分离培养淋巴结细胞；利用旋转式细胞培养系统进行模拟微重力培养；不同时间点，增殖实验检测细胞增殖、流式检测细胞凋亡、T细胞亚型、Th细胞亚群变化；酶联免疫吸附试验（ELISA）检测上清中细胞因子的变化。结果EAE淋巴细胞针对MBP68-86抗原特异性增殖，在培养20h，60h，80h时，增殖受到抑制（t=3．859，P〈0．01；t=5．933，P〈0．001；t=7．613，P〈0．001）；40h时，增殖受到促进（t=4．015，P〈0．01）。培养24h时，微重力组坏死及凋亡细胞增高（t=3．998，P〈0．01；t=3．705，P〈0．01），Th细胞降低（t=4．111，P〈0．01），Th1、Th17和调节性T细胞（Treg）亚群比例升高（t=2．743，P〈0．05；t=4．362，P〈0．01；t=2．945，P〈0．05）。微重力培养40h时，IFN-γ，TNF-α浓度明显升高（t=4．056，P〈0．01；t=4．666，P〈0．01），TGF-β、IL-6、IL4、IL-17浓度明显降低（t=2．855，P〈0．05；t=2．644，P〈0．05；t=3．154，P〈0．05；t=2．732，P〈0．05）。结论除40h外，MBP668-86。特异性淋巴细胞增殖在模拟微重力环境中被抑制；细胞死亡增多、Th细胞减少，对EAE起重要作用的细胞因子的浓度改变。

关键词：自身抗原反应性淋巴细胞微重力细胞增殖细胞凋亡 Th细胞细胞因子

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BDV核蛋白FQ RT-PCR试剂盒的评价与应用

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微生物学通报 2010年第2期37卷 239-245页

作者：徐鸣明展群岭张英英张亮宋武琦张凤鸣谢鹏重庆医科大学附属第一医院神经内科重庆400016 重庆医科大学神经科学中心重庆400016 哈尔滨医科大学微生物学教研室黑龙江省感染和免疫重点实验室黑龙江哈尔滨150081

为评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)核蛋白荧光定量PCR(FQRT-PCR)试剂盒的各项指标,比较分子信标探针相对普通探针的优势,并了解其实际检测效果,本课题组使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,... 详细信息

为评价博尔纳病病毒(Borna disease virus,BDV)核蛋白荧光定量PCR(FQRT-PCR)试剂盒的各项指标,比较分子信标探针相对普通探针的优势,并了解其实际检测效果,本课题组使用BDVOL持续感染细胞株、非BDV病毒序列转染的OL细胞、正常的OL细胞,对BDVRT-PCR试剂盒的敏感性、特异性、重复性和稳定性进行评估,同时检测部分临床病人和动物外周血液RNA。实验结果显示:试剂盒可以检测出的病毒RNA最低浓度为2.5×101,相当于1个病毒拷贝数,无非特异检出;不同批次的试剂盒的检测结果变异系数小于0.7;加速破坏的试剂盒和正常试剂盒检测结果之间变异系数在2以内;对临床病人检测阳性率为3.6%,对动物检测阳性率为4.2%(猪)和1.5%(马)。可见该试剂盒重复性和稳定性均好;敏感性、特异性优于普通探针试剂盒,是BDV基础研究、流行病学调查和临床检测的良好工具。

关键词：博尔纳病病毒实时荧光定量PCR 核蛋白

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白细胞介素17及其受体在脑缺血损伤中作用的初步研究

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中风与神经疾病杂志 2009年第6期26卷 653-656页

作者：张喆李国忠丁兆明王广友张瑶彭雷李瑶李呼伦王丹丹哈尔滨医科大学神经生物学教研室黑龙江省神经生物重点实验室黑龙江哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科黑龙江哈尔滨150001

目的在建立小鼠大脑中动脉永久性栓塞模型(permanent middle cerebral artery occlusion,pMCAO)的基础上,探讨白细胞介素17(Interleukin-17,IL-17)及其受体IL-17 Receptor(IL-17R)在缺血脑组织中的表达及对神经元的损伤作用。方法体内实验:通过线栓法建立小鼠永久性大脑中动脉栓塞模型,HE观察脑组织形态学改变,ELISA与免疫组织化学技术分别检测小鼠pMCAO血清及缺血脑组织中IL-17的表达。免疫荧光检测Th17及IL-17R的表达。体外实验:原代培养的神经元经氧糖剥夺(oxygen-glucose deprivation,OGD)处理2h,MTT检测不同剂量IL-17对神经元的损伤作用。结果体内实验:ELISA结果证实随着缺血时间延长,IL-17含量增加,与对照组相比,于24h出现差异(P24h<0.05,P2d、6d<0.001)。免疫组织化学结果显示,缺血侧脑皮质及血管周围存在IL-17的表达,经免疫荧光鉴定缺血脑组织中有Thelper 17细胞(Th17)的表达;同时脑血管内皮细胞表达IL-17R。体外实验:MTT结果显示IL-17加剧了神经元的厌氧损伤,与单纯神经元厌氧培养组相比有意义,P10ng/ml IL-17<0.05,P100ng/ml IL-17<0.01,且高浓度(100ng/ml)IL-17与低浓度(10ng/ml)IL-17对神经元的刺激干预相比较,高浓度的IL-17对神经元活性损伤大。结论(1)IL-17与IL-17R参与了脑缺血损伤过程;(2)缺血侧脑实质内存在Th17及IL-17R的表达;(3)IL-17加剧了缺血缺氧条件对神经元有损伤作用,且存在剂量依赖性。

关键词：脑缺血 IL-17 IL-17R Th17

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抗人羧酸酯酶-Ⅱ多克隆抗体的制备、鉴定及应用

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第2期25卷 158-160,163页

作者：吴春铃包红霞唐晓波朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在... 详细信息

目的:构建人羧酸酯酶-Ⅱ(hCE-Ⅱ)原核表达质粒并在大肠杆菌中表达,制备多克隆抗体(pAb),并对其特性进行初步鉴定。方法:以人正常肝cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-GST)和pET-32a-hCE-Ⅱ(即hCE-Ⅱ-His)。在宿主菌BL21内进行诱导表达,hCE-Ⅱ-GST融合蛋白作为免疫原免疫大耳白兔,用辛酸-硫酸铵分步沉淀法初步纯化抗血清,并用间接ELISA、West-ernblot及免疫组化检测抗体的灵敏度和特异性。结果:成功制备了抗hCE-Ⅱ的多克隆抗体。Westernblot鉴定表明该抗体可特异性识别重组蛋白以及天然的人肝微粒体蛋白。免疫组织化学鉴定显示该抗体可特异性结合肝包浆中的hCE-Ⅱ蛋白,而不与血管平滑肌细胞结合。结论:制备的pAb有较高的效价和较好的特异性,为肝癌诊断试剂盒的研究奠定了实验基础。

关键词： hCE-Ⅱ 原核表达融合蛋白多克隆抗体

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鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定

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细胞与分子免疫学杂志 2009年第5期25卷 454-456页

作者：包红霞吴春铃李淑珍唐晓波褚晓杰王爽张家宁朱大岭哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室黑龙江哈尔滨150081

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠... 详细信息

目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定。方法:以人单核细胞cD-NA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-CD20(即CD20-GST)和pET-32a-CD20(即CD20-His)。以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位。结果:CD20-GST和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20mAb与CD20蛋白具有良好的反应性。结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础。

关键词： CD20 原核表达融合蛋白抗体制备

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IL-17对髓鞘碱性蛋白诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎的影响

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中国生物制品学杂志 2008年第7期21卷 598-601页

作者：邓晓波孙博孔庆飞张瑶王菁华靳轶敏王秀云李呼伦王广友黑龙江省医院道外分院哈尔滨150020 哈尔滨医科大学神经生物学教研室哈尔滨医科大学神经生物省重点实验室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学附属第一医院哈尔滨150001

目的探讨IL-17对髓鞘碱性蛋白(MBP)68-86诱导鼻黏膜免疫耐受治疗实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的影响。方法将大鼠分为5组,分别经鼻黏膜滴注PBS、MBP68-86、MBP68-86+IL-17(0.01μg/d)、MBP68-86+IL-17(0.05μg/d)和MBP68-86+IL-17(0.1μg/d)诱导其发生免疫耐受,并在此基础上建立EAE动物模型,观察各组大鼠发病情况;通过3H掺入试验检测特异性抗原MBP68-86多肽诱导T淋巴细胞增殖活性;HE染色观察脊髓淋巴细胞浸润情况,免疫组化方法检测脊髓中单位面积IL-17+细胞数。结果PBS组和IL-170.1μg/d组与MBP组相比,大鼠免疫后出现进食减少、体重减轻、尾瘫、后肢瘫痪等临床症状,IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组大鼠临床症状较轻或无症状。淋巴细胞增殖试验结果显示,PBS组和IL-170.1μg/d组与MBP组相比,特异性淋巴细胞增殖反应显著增高,IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组与MBP组相比,差异无显著意义,与IL-170.1μg/d组相比差异有显著意义;PBS组、IL-170.1μg/d组与MBP组、IL-170.01μg/d组和0.05μg/d组相比,脊髓切片中淋巴细胞浸润面积较大且细胞数量较多,IL-17+细胞数也显著增多。结论MBP68-86特异性肽段可诱导EAE免疫耐受的形成,预防EAE的发生;鼻黏膜给予IL-17可以打破MBP诱导的特异性免疫耐受,且存在剂量依赖性。

关键词：实验性自身免疫性脑脊髓炎髓鞘碱性蛋白鼻黏膜免疫耐受白细胞介素-17

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NK1．1^＋细胞在实验性重症肌无力发病机制中的作用

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中国免疫学杂志 2008年第1期24卷 38-41,48页

作者：王菁华孙博李国忠王丹丹刘玉梅王琪穆莉莉金连弘李呼伦哈尔滨医科大学神经生物教研室哈尔滨医科大学神经生物学黑龙江省高校重点实验室哈尔滨150081 哈尔滨医科大学第一临床医学院神经内科哈尔滨150081

目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗TGF-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和TGF-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身... 详细信息

目的:探讨NK1.1+细胞在重症肌无力疾病进展中发挥的作用以及其调节机制。方法:(1)用腹腔注射抗NK1.1抗体和抗TGF-β抗体的方法制造NK1.1+细胞缺陷和TGF-β缺陷的小鼠模型;(2)通过肌无力评分标准来评价试验组和对照组小鼠之间实验性自身免疫性重症肌无力(EAMG)的发病情况和病情严重程度的区别;(3)观察淋巴细胞增殖以及应用ELISA方法检测细胞因子TGF-β、抗AchRIgG的各种亚型。结果:(1)NK1.1+细胞缺陷的小鼠同对照组小鼠相比EAMG发病时间延迟且病情严重程度明显降低,但在免疫后7天用抗NK1.1处理却不能改变EAMG的临床病程。(2)NK1.1+细胞缺陷没有明显改变由AchR刺激产生的T细胞增殖反应,但由AchR特异性T细胞所产生的TGF-β有明显的增高。(3)经TGF-β中和抗体处理的NK1.1+细胞缺陷的小鼠其EAMG的进展明显加快。(4)NK1.1+细胞缺陷鼠血清中抗AchRIgG、AchRIgG2b亚型的含量下降。结论:NK1.1+细胞在EAMG的起始时发挥重要的作用,并且NK1.1+细胞的缺失将导致AchR特异性T细胞产生TGF-β的增加,从而抑制了重症肌无力的进展。

关键词：实验性自身免疫性重症肌无力 NK1.1^+ 细胞细胞因子 TGF—β

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