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山东大学学报（医学版） 2009年第10期47卷 28-31页

作者：李志会岳盈盈李鹏宋楠楠沈琮赵元昊孟红山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062

目的构建金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)基因片段的表达载体,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,探讨该重组蛋白与不同来源IgG结合的生物学特性。方法利用PCR法扩增SPA基因片段,将该段基因克隆到pET30a(+)表达载体,转化感受态BL21大肠杆菌细胞,... 详细信息

目的构建金黄色葡萄球菌蛋白A(SPA)基因片段的表达载体,并在大肠杆菌表达系统中进行表达,探讨该重组蛋白与不同来源IgG结合的生物学特性。方法利用PCR法扩增SPA基因片段,将该段基因克隆到pET30a(+)表达载体,转化感受态BL21大肠杆菌细胞,IPTG诱导表达,利用SDS-PAGE及Westen-blot鉴定目的蛋白。His亲和层析纯化后分别与人、小鼠、兔、猪及山羊血清反应,分析其与不同来源IgG的亲和关系。结果构建的pET30a(+)-SPA表达载体在大肠杆菌BL21中可表达SPA蛋白,且发现其与人及小鼠源IgG具有较高亲和性,与兔及猪源IgG亲和性较低。结论该重组蛋白SPA与人及小鼠源免疫球蛋白IgG具有较高亲和性,为下一步应用于SPA-ELISA打下基础。

关键词：葡萄球菌蛋白A 原核表达亲和性

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重组腺病毒HBV preS2/S-AD5的构建及生物安全性初步研究

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山东大学学报（医学版） 2009年第5期47卷 27-30页

作者：李志会岳盈盈邢来田张凤丽李妍刘菊华李鹏万言珍孟红山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062

目的构建重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5，并对其生物安全性进行初步评价。方法应用clontech公司的第一代腺病毒载体构建重组腺病毒质粒HBVpreS2／S-AD5，酶切线性化后分4次用脂质体方法转染HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒HBYpreS2／S-AD... 详细信息

目的构建重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5，并对其生物安全性进行初步评价。方法应用clontech公司的第一代腺病毒载体构建重组腺病毒质粒HBVpreS2／S-AD5，酶切线性化后分4次用脂质体方法转染HEK293细胞包装成复制缺陷型腺病毒HBYpreS2／S-AD5，分别命名为N1～4。扩增并滴定毒力后，接种Hep2、Hela和A549细胞，观察HBVpreS2／S-AD5在非容许细胞的增殖情况；同时，用N1～4分别鼻腔接种SPF级BALB／C小鼠，每日观察小鼠一般情况，第10d取小鼠重要组织并用福尔马林固定，做病理学检查。结果4株重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5第1代N1、第4代N2、第6代N3、第8代N4株接种的细胞未见病变，接种的小鼠无一般状况改变，组织病理也未见任何改变；而第11代N1株重组腺病毒能在非容许细胞增殖并致细胞病变，接种的小鼠出现严重腹泻，并且小鼠肠、肺组织有明显的病理改变。结论本实验室构建的重组腺病毒HBVpreS2／S-AD5有突变为复制型腺病毒的现象，并可导致小鼠出现腹泻和轻型肺部炎症。

关键词： HBV preS2/S 重组腺病毒载体复制型腺病毒

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原发性高血压患者细胞间黏附分子K469E基因多态性与颈动脉内膜中层厚度的相关性研究

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中国老年学杂志 2009年第3期29卷 331-333页

作者：温培娥路方红刘振东商青王舒健赵颖馨孙尚文金世宽山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东济南250062

目的探讨ICAM-1基因K496E多态性与动脉粥样硬化(AS)的关系。方法对437名原发性高血压(EH)患者进行颈动脉超声检测,根据检测结果将所有患者分为AS组和动脉正常组(正常组),采用巢式聚合酶链反应和免疫酶联吸附测定技术检测所有患者的细胞... 详细信息

目的探讨ICAM-1基因K496E多态性与动脉粥样硬化(AS)的关系。方法对437名原发性高血压(EH)患者进行颈动脉超声检测,根据检测结果将所有患者分为AS组和动脉正常组(正常组),采用巢式聚合酶链反应和免疫酶联吸附测定技术检测所有患者的细胞间黏附分子1(ICAM-1)基因K496E基因型和等位基因分布及ICAM-1血浆水平,进行对比分析。结果AS组KK型频率明显高于正常组(χ2=12.437,P=0.000),基因型相对风险度分析发现,KK基因型的个体发生AS的危险性是KE或EE型的2.087倍(OR=2.087,95%CI=1.382～3.151);携带K等位基因发生AS的风险是E等位基因的1.962倍。经二元多因素Logistic回归分析,调整年龄、性别、体重指数、收缩压、舒张压、总胆固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白等指标后,ICAM-1血浆水平、K等位基因和吸烟均不同程度的影响AS的发病,而且K等位基因及吸烟对于AS发病具有一定的协同作用。结论ICAM-1基因K469E多态性与EH患者的AS有相关性,K等位基因可能是AS的遗传危险因素。

关键词：细胞间黏附分子1 基因多态性动脉粥样硬化

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曲古抑菌素A诱导HL-60细胞凋亡机制的研究

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中华肿瘤防治杂志 2009年第4期16卷 249-251,255页

作者：杨炜华温培娥范华赵海涛乔高娟任霞任海全唐天华姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东济南250062

目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的机制。方法:采用MTT方法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果:0.1μmo... 详细信息

目的:探讨曲古抑菌素A(TSA)在体外诱导急性早幼粒白血病HL-60细胞凋亡的机制。方法:采用MTT方法检测TSA对HL-60细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,RT-PCR检测凋亡相关基因Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达。结果:0.1μmol/L的TSA可明显抑制细胞增殖,P<0.01;0.05μmol/L的TSA可使细胞周期阻滞在G0/G1期(P<0.05),但0.1μmol/L的TSA才能引起细胞凋亡(P<0.01);经0.1μmol/L的TSA作用12 h后,Bax、Caspase-9和Caspase-3基因表达明显升高,P<0.01。结论:TSA诱导HL-60细胞凋亡的机制在于引起细胞周期阻滞,上调Bax、Caspase-9和Caspase-3的表达。

关键词：白血病,早幼粒细胞,急性/病理学抗肿瘤药/药理学半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶细胞凋亡

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修饰的肿瘤抗原肽CEA_(610D)疫苗的体外抗肿瘤作用

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中国肿瘤生物治疗杂志 2009年第2期16卷 120-124页

作者：刘晶李翠玲顾洪涛阴海鹏朱传福温培娥张玲山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室山东济南250062 山东省血液中心HLA研究室山东济南250014

目的:评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据。方法:多肽固相合成法合成HLA-A2CEA修饰肽(CEA610D)、HLA-A2天然肽CEA605-613(天然肽)和HLA-A2无关肽MAGE-3(无关肽),采用同种异体混合淋巴细胞与肽共... 详细信息

目的:评价修饰的CEA610D抗原肽疫苗体外抗肿瘤免疫的有效性,为其临床应用提供依据。方法:多肽固相合成法合成HLA-A2CEA修饰肽(CEA610D)、HLA-A2天然肽CEA605-613(天然肽)和HLA-A2无关肽MAGE-3(无关肽),采用同种异体混合淋巴细胞与肽共孵育的方法,诱导肽特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),利用MTT法检测CTL的增殖和杀伤活性;流式细胞术观察细胞表型;RT-PCR检测细胞穿孔素的表达;ELISA法检测CTL上清中IFN-γ的水平。结果:CEA610D疫苗产生肽特异性CTL的能力最强(P<0.05),其CD8+T细胞数也高于天然肽组和无关肽组;在效靶比为40:1时,CEA610D和天然肽所诱导的CTL对CEA+HLA-A2限制性人结肠癌细胞T84的杀伤活性可达(56.7±3.73)%和(51.2±1.86)%,而3种肽特异性CTL细胞对CEA+HLA-A2人结肠癌lovo细胞杀伤活性维持在本底水平;CEA610D组的CTL所释放的杀伤相关介质穿孔素和上清中IFN-γ的水平也显著高于其余两组(P<0.01)。结论:与天然肽相比,CEA610D疫苗可打破自身表位的免疫耐受,在体外抗肿瘤免疫中更具优势。

关键词：肿瘤抗原肽癌胚抗原修饰肽细胞毒性T淋巴细胞抗瘤作用

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蝎毒多肽提取物抑制胰腺癌肝转移作用的实验研究

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山东大学学报（医学版） 2009年第3期47卷 20-22,29页

作者：崔亚洲贾青王兆朋王朝霞张月英张维东韩金祥山东省医药技术研究中心卫生部生物技术药物重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062 山东省医学科学院基础医学研究所济南250062

目的探讨东亚钳蝎蝎毒多肽提取物(PESV)对胰腺癌肝转移的抑制作用。方法筛选出高肝转移的胰腺癌细胞亚型MIA-PaCa2-3,用Transwell小室模型观察PESV对MIA-PaCa2-3细胞体外侵袭能力的影响;尾静脉注射MIA-PaCa2-3细胞建立高肝转移率的裸鼠... 详细信息

目的探讨东亚钳蝎蝎毒多肽提取物(PESV)对胰腺癌肝转移的抑制作用。方法筛选出高肝转移的胰腺癌细胞亚型MIA-PaCa2-3,用Transwell小室模型观察PESV对MIA-PaCa2-3细胞体外侵袭能力的影响;尾静脉注射MIA-PaCa2-3细胞建立高肝转移率的裸鼠胰腺癌模型,对比PESV和化疗药物吉西他滨(gemcitabine)以及抗血管生成剂TNP-470对裸鼠胰腺癌肝转移的抑制作用。结果PESV可以抑制MIA-PaCa2-3细胞穿过人工基底膜的能力;PESV处理组肝转移抑制率为70%(7/10),与吉西他滨处理组相近(8/10),明显高于TNP-470处理组(2/9)。结论PESV作为一种"抗血管-细胞毒"药物对胰腺癌肝转移具有明显的抑制作用。

关键词：胰腺肿瘤肝肿瘤实验性蝎毒素抗肿瘤药小鼠裸

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淫羊藿苷与黄芩苷联合多柔比星对肝癌细胞APRIL表达和血管内皮细胞生长抑制的研究

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中华肿瘤防治杂志 2009年第20期16卷 1534-1537页

作者：唐菁张玲李翠玲顾洪涛杨尚军阴海鹏温培娥姜国胜山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室山东省医学科学院药物研究所山东济南250062 烟台经济技术开发区医院检验科山东烟台264006

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和E... 详细信息

目的:探讨中药单体淫羊藿苷(ICA)、黄芩苷(BAI)联合化疗药多柔比星(ADM)抑制肝癌HepG2细胞APRIL、VEGF的表达,进而抑制血管内皮细胞生长的作用机制。方法:MTT法检测血管内皮细胞ECV304的增殖活性;RT-PCR法检测HepG2细胞APRIL表达水平和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的表达情况;免疫细胞化学检测HepG2细胞VEGF表达水平。结果:HepG2细胞中VEGF蛋白、APRIL和ECV304细胞中APRIL受体HSPG的mRNA均呈高表达状态,且APRIL与VEGF两者高表达呈显著正相关(P<0.001);HepG2细胞经25μg/mLICA、200μg/mLBAI、2μg/mLADM以及12.5μg/mLICA+1μg/mLADM、100μg/mLBAI+1μg/mLADM5组药物处理后,与未用药对照组相比,APRILmRNA表达水平明显下降;HepG2细胞经5组药物处理后的上清液与未用药对照组相比,对ECV304细胞具有明显的增殖抑制作用,抑制率分别为(2.79±5.57)%、(15.20±3.79)%、(12.10±4.50)%、(19.34±8.17)%和(20.27±4.77)%(P均<0.05);HepG2细胞经5组药物处理后,与未用药对照组相比,VEGF的表达水平明显下降。结论:A-PRIL具有促进静脉内皮细胞ECV304增殖的作用。ICA、BAI联合ADM能降低HepG2细胞中APRIL与VEGF的表达水平,从而发挥其抑制血管内皮细胞ECV304生长的作用。

关键词：淫羊藿苷黄芩苷多柔比星人肝癌细胞 APRIL 血管内皮细胞

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二氢青蒿素诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制初探

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中华肿瘤防治杂志 2009年第14期16卷 1051-1054页

作者：顾洪涛毛海婷张玲温培娥许晓群李翠玲阴海鹏山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室山东济南250062 山东大学齐鲁医院临床基础研究所山东济南250012

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对乳腺癌细胞系T47D的增殖、凋亡作用的影响,初步探讨其抗癌作用的分子机制。方法:以乳腺癌细胞T47D为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对T47D细胞的作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,分别P... 详细信息

目的:研究二氢青蒿素(DHA)对乳腺癌细胞系T47D的增殖、凋亡作用的影响,初步探讨其抗癌作用的分子机制。方法:以乳腺癌细胞T47D为研究对象,观测不同浓度和作用时间的DHA对T47D细胞的作用,MTT噻唑蓝比色法检测对细胞的增殖抑制作用,分别PI单染及Annexin-V双染法流式细胞术分析细胞周期分布和早期凋亡率的变化,RT-PCR和蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:DHA对T47D细胞有增殖抑制作用且呈剂量和时间依赖性,DHA作用24、48和72h的IC50值分别为60.03、33.86和17.18μmol/L;流式细胞仪检测细胞阻滞于G0/G1期,随药物剂量增大(20、40和60μmol/L),G0/G1期比例逐渐增高(42.76%、49.71%和63.01%),S期比例降低(48.45%、42.41%和30.98%);Annexin-V双染法示早期细胞凋亡率呈明显剂量依赖性升高〔(20.81±0.68)%、(30.90±0.73)%、(45.32±2.17)%(n=3)〕;RT-PCR检测显示,DHA作用后细胞凋亡诱导因子BimmR-NA的表达量升高;蛋白质印迹法检测DHA作用48h凋亡相关蛋白tbid和Caspase-8表达增强,且呈一定剂量依赖关系。结论:DHA能显著抑制人乳腺癌细胞T47D生长,影响细胞周期,诱导细胞凋亡,其分子机制可能与促使Bim、tbid和Caspase-8表达增强的内源性凋亡途径有关。

关键词：乳腺肿瘤青蒿素细胞凋亡

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淋巴细胞过度活化及细胞因子与鼻息肉的免疫发病机制研究

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临床耳鼻咽喉头颈外科杂志 2009年第5期23卷 201-204页

作者：宋忠义张玲李建东李新功李翠玲山东省医学科学院基础医学研究所山东省医药卫生肿瘤免疫与中药免疫重点实验室山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062 东营市人民医院耳鼻咽喉科山东东营257091

目的:探讨淋巴细胞CD4、CD69和细胞因子RANTES、IL-5、IL-8在鼻息肉组织中的表达及其在鼻息肉发生、发展中的作用。方法:苏木精-伊红染色、免疫组织化学和图像分析法检测34例鼻息肉组织(鼻息肉组)和30例鼻甲黏膜组织(对照组)中CD4、CD69... 详细信息

目的:探讨淋巴细胞CD4、CD69和细胞因子RANTES、IL-5、IL-8在鼻息肉组织中的表达及其在鼻息肉发生、发展中的作用。方法:苏木精-伊红染色、免疫组织化学和图像分析法检测34例鼻息肉组织(鼻息肉组)和30例鼻甲黏膜组织(对照组)中CD4、CD69、CD34、RANTES、IL-5、IL-8的表达。结果:鼻息肉组中淋巴细胞、嗜酸粒细胞弥漫浸润,腺体增生、杯状细胞增生、纤维增生、间质水肿的阳性率明显高于对照组(均P<0.01)。鼻息肉组中CD4、CD69、IL-5、IL-8、RANTES阳性淋巴细胞数密度(n/mm2)明显高于对照组(均P<0.05);CD4、CD69和RANTES、IL-5、IL-8的表达呈显著正相关(P<0.01、P<0.05和P<0.05)。IL-5、RANTES的高表达分别与嗜酸粒细胞浸润呈显著正相关(P<0.05、P<0.01)。IL-8的表达和鼻息肉组织中微血管形成呈显著正相关(P<0.01)。结论:CD4、CD69过度活化的T淋巴细胞及其产生的相关细胞因子IL-5、IL-8、RANTES可能促进和形成鼻息肉的免疫发病过程;IL-5、RANTES可促进嗜酸粒细胞的浸润、聚集、活化;IL-8可促进微血管形成。

关键词：鼻息肉过度活化淋巴细胞 CD4 CD69 RANTES IL-5 IL-8

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柞蚕雄蛾提取液抗肿瘤作用及其对大鼠免疫状态的影响的初步研究

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中国医药导刊 2009年第6期11卷 1017-1019页

作者：张俊平张维东张月英王朝霞贾青王兆朋山东省医学科学院基础医学研究所山东省现代医用药物与技术重点实验室济南250062

目的:观察柞蚕雄蛾提取液对肿瘤的抑制效应及其对大鼠免疫状态的影响。方法:60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、柞蚕雄蛾提取液大、中、小剂量组。建立Walker-256(W256)荷瘤大鼠模型,每天灌胃给药,10天后... 详细信息

目的:观察柞蚕雄蛾提取液对肿瘤的抑制效应及其对大鼠免疫状态的影响。方法:60只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、5-氟尿嘧啶(5-FU)组、柞蚕雄蛾提取液大、中、小剂量组。建立Walker-256(W256)荷瘤大鼠模型,每天灌胃给药,10天后称取荷瘤大鼠瘤重、胸腺及脾脏的重量,计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数;HE染色观察肿瘤组织病理变化;采用流式细胞术(FCM)检测外周血T淋巴细胞亚群变化;用免疫组化SP法检测大鼠脾脏细胞表达IL-2、IFN-α和IL-4、IL-10水平的变化。结果:与模型组相比,大、中剂量组瘤重差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,实验组肿瘤组织细胞排列较为稀疏,病理性核分裂象略减少;与模型组和5-FU组相比,实验组大鼠脾脏和胸腺指数明显升高(P<0.05),外周血中CD4^+T细胞比例与CD4^+T/CD8^+T值升高(P<0.05),脾脏细胞因子IL-2、INF-g表达明显增加(P>0.05),而IL-4、IL-10表达无明显改变(P>0.05)。结论:柞蚕雄蛾提取液有一定的抗肿瘤活性,其抗肿瘤效应可能是通过改善机体免疫系统的状态而实现的。

关键词：柞蚕抗肿瘤免疫调节 Wistar大鼠

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