检索结果-内蒙古大学图书馆

乙型肝炎病毒X蛋白通过诱导P3启动子低甲基化促进胰岛素样生长因子-II基因表达

中华肝脏病杂志 2014年第4期22卷 289-294页

作者：汤绍辉张少华张小娟吴胜兰李俊峰江向武周鸿科罗羽宏曹明溶暨南大学附属第一医院消化科广州510630

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对胰岛素样生长因子-II（IGF—II）基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制。方法分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3mRNA、HBxmRNA表达水平及P3启动... 详细信息

目的探讨乙型肝炎病毒X蛋白（HBx）对胰岛素样生长因子-II（IGF—II）基因P3启动子驱动的mRNA表达的影响及其表观遗传机制。方法分别采用定量RT-PCR和亚硫酸氢盐测序法检测HBV感染阳性和阴性肝癌组织中P3mRNA、HBxmRNA表达水平及P3启动子甲基化状态；进一步分析稳定表达HBx蛋白的肝癌细胞株HepG2-HBx及其对照细胞株HepG2-control中P3mRNA表达水平及P3启动子甲基化状态；最后，将体外甲基化的IGF—II基因P3启动子驱动的荧光素酶报告载体pGL3-P3及携带HBx基因的pCMV-tag2B—X质粒共转染HepG2细胞，采用亚硫酸氢盐测序法及双萤光素酶试验检测HBx蛋白对P3启动子转录活性和甲基化状态的影响。计数资料采用x^2或Fisher精确检验，计量资料采用独立样本f检验或Mann-WhitneyU检验，线性相关分析采用Pearson相关系数评价。结果（1）HBV感染阳性的肝癌组织中P3mRNA表达水平（△cT为-9．59±3．22）明显高于HBV阴性的肝癌组织（△cT为-12．97±3．08），P=0．006；而P3启动子17个cpG位点的平均甲基化水平（36．9％土15．5％）明显低于HBV阴性的肝癌组织（52．1％±19．1％），P：0．025；P3mRNA丰度与HBxmRNA表达水平呈正相关，而与P3启动子甲基化水平呈负相关。（2）在HepG2-HBx及其对照细胞中，也显示了类似的P3mRNA表达水平及P3启动子甲基化水平变化。（3）体外转染的HBx蛋白显著降低了P3启动子甲基化水平，提高了其转录活性。结论HBx蛋白可能通过降低P3启动子甲基化水平促进肝细胞癌IGF—II基因表达，本结果为充分理解HBx蛋白介导的肝细胞癌发病机制提供了新的信息。

关键词：癌,肝细胞 X蛋白,肝炎病毒,乙型胰岛素样生长因子II 启动子低甲基化

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p75^NTR蛋白体外通过TrkA^NGFR／p75^NTR异源二聚体信号途径促进L02细胞增殖

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中华消化杂志 2012年第4期32卷 256-261页

作者：李俊峰陈莲香吕霞舒建昌暨南大学附属第一医院消化科广州510630 暨南大学附属第四医院消化科

目的观察神经生长因子（NGF）及受体（TrkA^NGFR、P75^NTR）在肝细胞中的表达，探讨外源性P75^NTR蛋白对肝细胞的生物学作用。方法体外培养L02肝细胞，免疫细胞化学和荧光定量PCR法分别检测NGF、TrkA^NGFR、P75^NTR在L02细胞中的表达。... 详细信息

目的观察神经生长因子（NGF）及受体（TrkA^NGFR、P75^NTR）在肝细胞中的表达，探讨外源性P75^NTR蛋白对肝细胞的生物学作用。方法体外培养L02肝细胞，免疫细胞化学和荧光定量PCR法分别检测NGF、TrkA^NGFR、P75^NTR在L02细胞中的表达。XTT法检测外源性P75^NTR、NGF、NGF＋P75^NTR、抗TrkA^NGFR、抗P75^NTR对L02细胞增殖的作用。流式细胞术（膜联蛋白V／碘化丙啶）检测外源性P75^NTR对L02细胞凋亡的作用。流式细胞术（碘化丙啶）检测外源性P75^NTR对L02细胞周期的影响。结果P75^NTR促进L02细胞增殖，呈剂量依赖性。NGF和NGF＋P75^NTR组吸光度值（A）值分别为0．4916±0．0565和0．5839±0．0733，与阴性对照组比较差异有统计学意义（0．3601±0．0310，P〈0．05）；抗TrkA^NGFR A值为0．2689±0．0229，与阴性对照组比较差异有统计学意义（P=0．003）；抗P75^NTR A值为0．3524±0．0312，与阴性对照组比较差异无统计学意义（P=1．000）。外源性P75^NTR对L02细胞有抗凋亡趋势，加入100ng／mlP75^NTR抗凋亡作用最强，表达量为3．70±0．26，但与对照组比较差异无统计学意义（4．10±0．62，P=1．000）。P75^NTR作用于L02细胞周期的S期，呈剂量依赖性，呈倒置的U形曲线，浓度为100ng／ml时作用最强（25．60±0．40），与对照组比较差异有统计学意义（20．10±1．00，P=0．000）。外源性NGF、P75^NTR、NGF＋P75^NTR上调了L02细胞NGFmRNA、TrkA^NGFR mRNA、P75^NTR mRNA的基因表达，与对照组比较差异有统计学意义（P〈0．05）；抗TrkA^NGFR、抗P75^NTR对NGFmRNA、TrkA^NGFR mRNA、P75^NTR mRNA的基因表达无明显影响，与对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论L02细胞表达NGF及受体TrkA^NGFR、P75^NTR，合适剂量的外源性P75^NTR可能通过TrkA^NGFR／P75^NTR异源二聚体信号途径促进L02细胞增殖。

关键词：神经组织蛋白质类受体,神经生长因子类肝细胞分裂细胞凋亡细胞,培养的基因表达

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人胰岛素样生长因子ⅡP3启动子调控融合基因质粒构建的研究

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中华医学杂志 2006年第2期86卷 106-110页

作者：周鸿科杨冬华汤绍辉黄卫卢筱华暨南大学附属第一医院消化科广州510630

目的构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因(IGF-Ⅱ)P3启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,观察其在肝癌细胞株HepG2及宫颈癌细胞株HeLa细胞中的表达及其作用。方法应用基因重组技术,构建IGF-... 详细信息

目的构建人胰岛素样生长因子Ⅱ基因(IGF-Ⅱ)P3启动子驱动的单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)与增强型绿色荧光蛋白(EGFP)融合基因穿梭质粒,观察其在肝癌细胞株HepG2及宫颈癌细胞株HeLa细胞中的表达及其作用。方法应用基因重组技术,构建IGF-ⅡP3启动子驱动EGFP与HSV-tk融合表达穿梭质粒载体,脂质体转染技术将其转入HepG2及HeLa中,48h后荧光显微镜下观察荧光表达,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSV-tk和EGFP的mRNA表达,四甲基偶氮唑蓝实验检测转染融合蛋白载体后给予不同浓度的更昔洛韦对HepG2及HeLa细胞毒作用。结果酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功;转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光;RT-PCR检测到HSV-tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达;更昔洛韦(GCV)对转染了携此质粒载体的HepG2细胞有选择性细胞毒作用,1、10、和100μg/ml3个浓度GCV作用72h后(实验均重复3次),对转染细胞的抑制率分别为19.8%±1.3%、36.2%±2.0%和48.7%±1.9%,与细胞病毒转染HepG2组(24.1%±1.9%、45.1%±1.7%、69.4%±3.6%)和此质粒转染HeLa细胞组(25.1%±1.6%、49.3%±1.1%、72.2%±2.9%)相比,差异有统计学意义(均P<0.01)。结论成功构建IGF-ⅡP3启动子驱动携带HSV-HSV-tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体,转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用,为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定基础。

关键词：胰岛素样生长因子Ⅱ 质粒癌,肝细胞胸苷激酶

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人肝癌组织胰岛素样生长因子Ⅱ基因启动子表达及其意义

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中华肝脏病杂志 2006年第6期14卷 456-458页

作者：汤绍辉杨冬华黄卫周旻周鸿科卢筱华叶刚暨南大学附属第一医院消化科广州510630

人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）是一种重要的胎儿生长因子，其基因含4个不同的启动子（P1～P4）。在生长发育过程中，4个启动子不同的生物活性，具有组织特异性和发育阶段独立性表达特征，P2～P4为胚胎型启动子，P1为成人型启动子。在... 详细信息

人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）是一种重要的胎儿生长因子，其基因含4个不同的启动子（P1～P4）。在生长发育过程中，4个启动子不同的生物活性，具有组织特异性和发育阶段独立性表达特征，P2～P4为胚胎型启动子，P1为成人型启动子。在胎肝和新生儿肝中IGF-Ⅱ mRNA表达量最高，其中P3活性最大，其次分别为P4及P2，P1失活，在成人肝脏中IGF-Ⅱ mRNA表达量显著下调，约为新生儿峰值的1／10，其中P1活性最大，依次为P4、P2及P3，约70％成人肝脏P3呈关闭状态，仅30％成人呈微量表达。近年研究发现，IGF-Ⅱ在模型动物肝脏和人类肝脏的癌前病变及肝癌组织中呈过量表达，但不同学者报道的IGF-Ⅱ异常表达量及阳性率差异较大，且多数为IGF-Ⅱ蛋白水平的定性研究。我们分析了乙型肝炎病毒（HBV）阳性肝癌的P1～P4调控的IGF-Ⅱ转录子表达水平的变化及其与临床病理特征的关系，旨在阐明IGF-Ⅱ基因启动子在肝癌癌变中的作用及其临床意义。

关键词：肝肿瘤胰岛素样生长因子Ⅱ 基因启动区(遗传学)

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鼻胃管肠内营养在重症急性胰腺炎治疗中的疗效与耐受性分析

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解放军医学杂志 2013年第2期38卷 141-146页

作者：冯淑芬汤绍辉张小娟广州暨南大学附属第一医院消化科广州510630

目的评价鼻胃管肠内营养（NGEN）在重症急性胰腺炎（say）治疗中的疗效与耐受性。方法检索外文数据库（1966-2011年）PubMed、Web of Science and The Cochrane Central Register of Controlled Trials及中文数据库（1978-2011年）中国... 详细信息

目的评价鼻胃管肠内营养（NGEN）在重症急性胰腺炎（say）治疗中的疗效与耐受性。方法检索外文数据库（1966-2011年）PubMed、Web of Science and The Cochrane Central Register of Controlled Trials及中文数据库（1978-2011年）中国期刊全文数据库（CNKI）、中国科技期刊数据库（维普）、万方数字化期刊全文数据库中有关NGEN与鼻空肠管肠内营养（NJEN）比较治疗SAP疗效的随机对照试验，由两个评价员对文献进行评价，意见不统一时通过讨论解决或由第三者判断。采用RevMan4．2软件对纳入研究（Jadad评分≥3分）进行Meta分析。结果共有3项随机对照试验纳入本研究。共纳人研究对象159例（2例退出研究），其中NGEN组82例（1例退出），NJENnY77例（1例退出）。Meta分析结果显示：NGEN组SAP的病死率（RR=0．69，95％CIo．37-1．29，P=O．2s）、手术干预情况（RR=2．09，95％C10．55-7．92，P=0．28）、营养相关性腹泻（RR=l_43，95％CIo．59-3．4S，P=0．43）、置管脱出率（RR=0．42，95％C10．08-2．17，P=0．30）及营养相关性疼痛（RR=0．94，95％CIo．32．-2．70，P=0．90）与N1EN组相比差异无统计学意义，而感染并发症（Rg=0．64，95％CIO．42-0．99，P=O．04）明显低于NJEN组。结论在SAP的肠内营养支持治疗中，NGEN与NJEN具有相似的临床疗效和耐受性，但前者感染并发症较后者低，且操作相对简便，具有取代后者的可能性。

关键词：胰腺炎急性坏死性肠道营养随机对照试验

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人胰岛素样生长因子ⅡP4启动子调控胸苷激酶载体的构建

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中华肝脏病杂志 2011年第6期19卷 460-463页

作者：周鸿科杨冬华汤绍辉黄卫暨南大学附属第一医院消化科广州510630

目的探讨人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）P4启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）／丙氧鸟苷（GCV）自杀基因系统体外对人肝癌细胞的选择性杀伤效应。方法用分子生物学方法构建IGF-ⅡP4启动子和巨细胞病毒启动子（CMV）调控下HSVt... 详细信息

目的探讨人胰岛素样生长因子Ⅱ（IGF-Ⅱ）P4启动子调控单纯疱疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）／丙氧鸟苷（GCV）自杀基因系统体外对人肝癌细胞的选择性杀伤效应。方法用分子生物学方法构建IGF-ⅡP4启动子和巨细胞病毒启动子（CMV）调控下HSVtk与增强型绿色荧光蛋白（EGFP）融合基因穿梭质粒，并用脂质体转染法将其转入肝癌细胞系HepG2及宫颈癌细胞系HeLa细胞中，在荧光显微镜下观察荧光表达情况。加入GCV使总浓度分别为0、1．0、10．0和100．0μg／ml，用四甲基偶氮唑盐实验检测HSV-tk／GCV系统对各种细胞的杀伤作用，用RTPCR法检测转染前后胸苷激酶（tk）和EGFPmRNA的表达情况。用方差分析进行统计学处理。结果酶切鉴定和测序分析证实重组质粒构建成功；转染此穿梭质粒的细胞中仅有HepG2细胞检测到绿色荧光；RT-PCR检测到tk和EGFP的mRNA仅在HepG2细胞中表达；pDC316tkEGFP-CMV和pDC316-tkEGFPP4转染的HepG2细胞均出现明显的细胞生长抑制现象，两者转染细胞的抑制率分别为6．95％±0．67％、24．99％±1．53％、49．68％±1．68％和71．85％±3．28％，4．83％±0．35％、17．34％±1．15％、30．17％±1．30％和40．39％±0．82％，转染后者对HepG2细胞的抑制率低（F=24．055，P〈0．05），pDC316-tkEGFPCMV转染的HeLa细胞也出现明显的细胞生长抑制现象，其抑制率分别是6．36％±0．83％、23．95％±1．72％、45．13％±1．64％和69．38％±3．17％，转染质粒pDC316-tkEGFP-P4的HeLa细胞未发现明显的细胞抑制现象。结论成功构建IGF-ⅡP4启动子调控携带tk与EGFP融合基因穿梭质粒载体，转染后对人肝癌细胞系HepG2有选择性杀伤作用，为进一步靶向性肝癌腺病毒基因治疗奠定基础。

关键词：癌肝细胞胸苷激酶治疗

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IGF-1R-Stat3信号通路通过激活中期因子表达促进肝癌细胞活力、迁移和侵袭

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中国病理生理杂志 2020年第7期36卷 1207-1214页

作者：陈埏芳冯淑芬施颖钟绿李观宏汤绍辉暨南大学附属第一医院消化科广东广州510630

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)-信号转导及转录激活蛋白3(Stat3)信号通路和中期因子(midkine)在肝细胞癌中的作用以及IGF-1R-Stat3信号通路与midkine表达之间的关系。方法:(1)采用RTqPCR检测人肝癌细胞株Huh7和Hep3B、人正常... 详细信息

目的:探讨胰岛素样生长因子1受体(IGF-1R)-信号转导及转录激活蛋白3(Stat3)信号通路和中期因子(midkine)在肝细胞癌中的作用以及IGF-1R-Stat3信号通路与midkine表达之间的关系。方法:(1)采用RTqPCR检测人肝癌细胞株Huh7和Hep3B、人正常肝细胞株HL-7702、人肝细胞癌组织(n=32)、配对的癌旁组织(n=32)及正常成人肝组织(n=13)中IGF-1R、Stat3和midkine的mRNA表达水平,并应用Pearson相关分析评估肝细胞癌组织中三者表达水平之间的关系。(2)以Huh7细胞作为空白对照,在瞬时上调IGF-1R表达、稳定敲减IGF-1R表达及稳定敲减IGF-1R表达+瞬时上调Stat3表达的Huh7细胞中,采用RT-qPCR及Western blot检测Stat3和midkine mRNA表达水平及Stat3、磷酸化Stat3和midkine蛋白水平;以Huh7细胞作为空白对照,在瞬时上调或瞬时敲减Stat3表达的Huh7细胞中,采用RT-qPCR及Western blot分别检测midkine mRNA和蛋白表达水平。(3)采用MTT法和Transwell实验检测IGF-1R-Stat3信号通路和midkine表达变化对Huh7细胞活力、迁移和侵袭的影响。结果:分别与正常肝细胞和癌旁组织/正常肝组织相比,肝癌细胞株和肝细胞癌组织中IGF-1R、Stat3和midkine的mRNA表达水平显著升高(P<0.01);肝细胞癌组织中Stat3和midkine的mRNA表达水平均与IGF-1R的mRNA表达水平呈正相关(r=0.716和r=0.681,P<0.01),midkine mRNA表达水平与Stat3 mRNA表达水平也呈正相关(r=0.657,P<0.01)。在Huh7细胞中,IGF-1R通过上调Stat3表达并增加其磷酸化水平而促进midkine表达(P<0.01);而且IGF-1R通过激活Stat3、上调midkine表达而增强细胞活力、迁移能力和侵袭能力(P<0.01)。结论:IGF-1R-Stat3信号通路通过激活midkine表达增强肝癌细胞活力,促进细胞迁移和侵袭。

关键词：肝细胞癌 IGF-1R-Stat3信号通路中期因子

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人源化抗肝癌噬菌体单链抗体二聚体的构建、表达与鉴定

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中华肝脏病杂志 2009年第6期17卷 466-467页

作者：别彩群杨冬华刘浏暨南大学附属第一医院消化科广州510630

抗肝癌单链抗体（scFv）的肿瘤靶向治疗是目前治疗肝癌的一个新策略，但由于其存在亲和力低、稳定性较差、体内清除过快等不足，使它的广泛应用受到一定限制。改变scFv连接肽的长度而得到多价、高亲和力的新型小分子抗体，由于克服了以... 详细信息

抗肝癌单链抗体（scFv）的肿瘤靶向治疗是目前治疗肝癌的一个新策略，但由于其存在亲和力低、稳定性较差、体内清除过快等不足，使它的广泛应用受到一定限制。改变scFv连接肽的长度而得到多价、高亲和力的新型小分子抗体，由于克服了以上不足，较scFv具有诸多优势，其中以二聚体的功能最好。本研究将我室已获得的人源化抗肝癌噬菌体scFvHBM的连接肽缩短至3～5个氨基酸，构建高亲和力的人源化抗体二聚体，在大肠杆菌中可溶性表达，并鉴定其生物学活性，以期获得具有临床应用前景的肿瘤靶向治疗抗体。

关键词：癌,肝细胞抗体亲和力单链抗体二聚体

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CDKN2A位点p16^(INK4α)、p14^(ARF)基因变异与胃癌发生的关系

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中华流行病学杂志 2004年第6期25卷 517-521页

作者：汤绍辉杨冬华罗和生于皆平舒建昌暨南大学附属第一医院消化科广州510630 武汉大学人民医院消化科

目的探讨p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因变异与胃癌发生的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)、PCR-单链构象多态性(SSCP)、PCR甲基化分析法和RT-PCR分别检测48例胃癌及癌旁组织中p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因纯合性缺失、突变、CpG岛甲基化... 详细信息

目的探讨p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因变异与胃癌发生的关系。方法应用聚合酶链反应(PCR)、PCR-单链构象多态性(SSCP)、PCR甲基化分析法和RT-PCR分别检测48例胃癌及癌旁组织中p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因纯合性缺失、突变、CpG岛甲基化及mRNA表达状况。结果(1)胃癌组织p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因总缺失率为35.4％(17/48),癌旁组织均未见纯合性缺失。(2)31例无纯合性缺失的胃癌及癌旁组织均未见p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因点突变。(3)胃癌组织p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因总甲基化率为47.90％(23/48),癌旁组织仅2例甲基化,两者差异有显著性(P<0.01)。(4)胃癌组织p16^(INK4a)mRNA缺失率为47.9％(23/48),其中E1α和E2共甲基化者p16^(INK4a)mRNA缺失率(100％,6/6)明显高于其他类型甲基化者(11.8％,2/17)(P<0.01);胃癌组织p14^(ARF)mRNA缺失率为45.8％(22/48),其中E1β和E2共甲基化者p14^(ARF)mRNA缺失率(100％,3/3)明显高于其他类型甲基化者(15％,3/20)(P<0.05)。(5)低未分化癌组p16^(INK4a)和p14^(ARF)mRNA共同缺失率(36.7％,11/30)明显高于高中分化癌组(5.6％,1/18)(P<0.05)。结论胃癌中p16^(INK4a)和p14^(ARF)基因失活多由纯合性缺失和5’CpG岛甲基化所致,其表达缺失与胃癌的发生密切相关。

关键词： CDKN2A位点 p16^INK4a p14^ARF 基因变异胃癌聚合酶链反应检测

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神经生长因子通过TrkA^(NGFR)信号途径促进肝细胞增殖

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中国病理生理杂志 2012年第2期28卷 320-325页

作者：李俊峰舒建昌陈莲香朱海燕吕霞暨南大学附属第一医院消化科广东广州510630 暨南大学附属第四医院消化科广东广州510175

目的:观察神经生长因子(NGF)及其受体(TrkANGFR和p75NTR)在肝细胞中的表达,探讨外源性神经生长因子β(NGF-β)对肝细胞的生物学作用。方法:体外培养L02肝细胞,免疫细胞化学和荧光定量PCR法分别检测NGF、TrkANGFR和p75NTR在L02细胞中的... 详细信息

目的:观察神经生长因子(NGF)及其受体(TrkANGFR和p75NTR)在肝细胞中的表达,探讨外源性神经生长因子β(NGF-β)对肝细胞的生物学作用。方法:体外培养L02肝细胞,免疫细胞化学和荧光定量PCR法分别检测NGF、TrkANGFR和p75NTR在L02细胞中的表达。XTT法检测外源性NGF-β、anti-NGF、anti-TrkANGFR和anti-p75NTR对L02细胞增殖的作用,流式细胞术检测外源性NGF-β对L02细胞凋亡和细胞周期的影响。结果:L02细胞表达NGF及其受体TrkANGFR、p75NTR,NGF主要位于细胞质和细胞核,TrkANGFR和p75NTR位于细胞质和细胞膜;外源性NGF-β上调L02细胞表达NGF和TrkANGFR。低剂量外源性NGF-β(12.5～200μg/L)通过调控L02细胞的S期,促进细胞增殖,抗细胞凋亡,高剂量(>400μg/L)NGF-β不能促进L02细胞增殖;anti-NGF和anti-TrkANGFR抑制NGF-β诱导的L02细胞增殖,anti-p75NTR并不影响NGF-β诱导的L02细胞增殖。结论:L02细胞表达NGF及其受体TrkANGFR、p75NTR;合适剂量外源性NGF-β可能通过NGF/TrkANGFR信号途径促进L02细胞增殖。

关键词：神经生长因子 L02细胞细胞增殖细胞凋亡

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