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农业生物技术学报 2022年第10期30卷 2009-2024页

作者：张雨欣周小杰于浩然董婉玉杨永春王晓杜周莹珊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院.动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室

内质网是蛋白折叠的重要场所，对细胞稳态的变化十分敏感。蛋白折叠的环境发生变化会导致未折叠或错误折叠蛋白的聚集并影响细胞内信号通路，如Ca2+，氧化还原，炎症，凋亡等。当内质网发生应激，未折叠蛋白反应(unfolded protein respo... 详细信息

内质网是蛋白折叠的重要场所，对细胞稳态的变化十分敏感。蛋白折叠的环境发生变化会导致未折叠或错误折叠蛋白的聚集并影响细胞内信号通路，如Ca2+，氧化还原，炎症，凋亡等。当内质网发生应激，未折叠蛋白反应(unfolded protein response, UPR)通过一系列适应性反应来缓解蛋白错误折叠并恢复细胞稳态，如果不能重塑稳态，则会诱导凋亡。活性氧(reactive oxygen species, ROS)的产生被证实与内质网应激和未折叠蛋白反应有着密切的联系。ROS具有一定的毒性但也能作为信使分子介导生理过程。细胞质和不同的细胞器包括内质网和线粒体都会产生ROS。内质网中氧化还原状态的改变能够引起内质网应激，而内质网应激又能在内质网和线粒体诱导产生ROS。持续的氧化应激和内质网应激会启动凋亡程序。这些细胞反应在病毒感染中发挥了重要的作用。本文对内质网应激和氧化应激发生的机制、在诱导细胞凋亡中的相互联系、以及在动物病毒感染中发挥的作用进行了综述和展望。

关键词：内质网应激(ERS) 未折叠蛋白反应(UPR) 氧化应激活性氧(ROS) 凋亡病毒感染

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2017–2019年中国南方五省规模化养猪场副猪格拉菌血清型、耐药性及β-内酰胺类耐药基因bla-TEM分子特征分析

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微生物学报 2022年第8期62卷 3039-3047页

作者：陈雨欢肖敏王雨萌金恒琪王馨雨刘星雨夏菁王晓杜周莹珊宋厚辉杨永春浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 江西正邦农业科学院江西南昌330096

【目的】旨在分析当前规模化养殖场副猪格拉菌(Glaesserellaparasuis)优势血清型、耐药特性、耐药基因与分子特征。【方法】对源自规模化养猪场21株副猪格拉菌临床分离株,采用PCR鉴定血清型;利用K-B纸片扩散法鉴定其对25种抗生素的耐药... 详细信息

【目的】旨在分析当前规模化养殖场副猪格拉菌(Glaesserellaparasuis)优势血清型、耐药特性、耐药基因与分子特征。【方法】对源自规模化养猪场21株副猪格拉菌临床分离株,采用PCR鉴定血清型;利用K-B纸片扩散法鉴定其对25种抗生素的耐药表型;采用PCR检测bla-、bla-和bla-等7种耐药基因,并采用Chi-square test和Fisher exact test分析耐药表型和耐药基因型的相关性;耐药基因目的条带测序,并应用CLC Sequence Viewer软件分析β-内酰胺类耐药基因(bla-)编码蛋白氨基酸关键位点差异与耐药性的关系。【结果】21株副猪格拉菌临床分离株的优势血清型为4和12型;对β-内酰胺类药物苯唑西林的耐药性较强,耐药菌占比达61.9%(13/21);多重耐药菌株占比高达90.5%(19/21);β-内酰胺类耐药基因bla-携带率较高(52.4%,11/21),且bla-与β-内酰胺类药物青霉素G、苯唑西林和头孢拉定的耐药性显著相关,部分bla-编码氨基酸存在可能与副猪格拉菌耐药能力有关的差异位点。【结论】本研究表明,规模化养猪场的副猪格拉菌多重耐药情况仍很严重,并明确了被调查区域β-内酰胺类药物耐药率高的主要原因是携带耐药基因bla-,为加强对规模化养猪场副猪格拉菌耐药性监测提供理论依据。

关键词：副猪格拉菌 bla-TEM 分子特征

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单核细胞增多性李斯特菌硫氧还蛋白Lmo1609的应激生物学功能研究

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微生物学报 2022年第9期62卷 3358-3372页

作者：韩月陈雨吉罗平陈歆丹曹启予吴宇康陈绵绵翟瑞东周彬孙静管迟瑜程昌勇吕晓玲宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 宁波检验检疫科学技术研究院宁波海关技术中心浙江宁波315100

【目的】本研究旨在构建单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)硫氧还蛋白Lmo1609的基因缺失株,分析Lmo1609的氧化还原酶学活性,及其在细菌生长、运动过程中发挥的作用,并探究了Lmo1609参与细菌抗氧化应激和致病的生物学基础... 详细信息

【目的】本研究旨在构建单核细胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)硫氧还蛋白Lmo1609的基因缺失株,分析Lmo1609的氧化还原酶学活性,及其在细菌生长、运动过程中发挥的作用,并探究了Lmo1609参与细菌抗氧化应激和致病的生物学基础。为阐明其抗应激生物学作用以及完善李斯特菌的感染机制奠定分子基础。【方法】利用同源重组原理构建lmo1609基因缺失株及回补株。通过分子生物学、应激生物学和感染生物学等手段,对Lmo1609的生物学功能进行探索。以胰岛素为底物分析其氧化还原酶学活性;通过构建lmo1609缺失株和回补株,比较野生株和突变株在运动性、生长能力、抗氧化应激、细胞黏附、侵袭和增殖能力等方面的差异,进而鉴定Lmo1609的生物学功能。【结果】缺失lmo1609后,单增李斯特菌在生长能力上无明显变化,而运动能力明显减弱;对H_(2)O_(2)的敏感性增强;对细胞的黏附侵袭能力没有差异;对小鼠的致病力没有显著影响。【结论】本研究首次证实了单增李斯特菌硫氧还蛋白Lmo1609具有还原酶学活性,参与调控细菌的运动和对H_(2)O_(2)的氧化应激耐受,不介导单增李斯特菌的致病性。

关键词：单核细胞增多性李斯特菌硫氧还蛋白运动性氧化应激细菌感染

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右美托咪定抑制Ca^(2+)超载保护大鼠脊髓缺血再灌注损伤

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中国兽医学报 2022年第8期42卷 1660-1668页

作者：姜胜杨少青王雨欣宋泉江周彬邵春艳王晓杜宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

为了探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对大鼠脊髓缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的保护作用及机制,通过改良Zivin法夹闭肠系膜上动脉及右肾动脉之间的腹主动脉50 min建立大鼠脊髓I/R模型。I/R前通过尾静脉进行Dex预处理... 详细信息

为了探讨右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对大鼠脊髓缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤的保护作用及机制,通过改良Zivin法夹闭肠系膜上动脉及右肾动脉之间的腹主动脉50 min建立大鼠脊髓I/R模型。I/R前通过尾静脉进行Dex预处理,通过腹腔注射进行NPS2143和KN93预处理。采用BBB评分和HE染色评估脊髓损伤,微板法检测钙离子浓度,Western blot和荧光定量PCR分别分析CaSR和CaMKⅡ蛋白表达和mRNA转录水平分析。结果显示,与假手术组(Sham)比较,I/R 24 h、Dex 24 h、NPS2143+I/R 24 h及KN93+I/R 24 h组大鼠BBB评分均显著降低(P<0.01),I/R 48 h和KN93+I/R 48 h组BBB评分显著降低(P<0.01);与I/R组比较,Dex组大鼠BBB评分显著升高(P<0.01)。I/R 24 h与I/R 48 h组HE染色结果显示,脊髓神经元胞体固缩,胞核结构不清,染色加深,甚至消失,胶质细胞增生,提示脊髓损伤严重,而Sham组神经元未见明显异常,与I/R组比较,HE结果提示Dex组脊髓组织损伤程度轻微。与Sham组比较,I/R 24 h和I/R 48 h组脊髓钙离子浓度显著升高(P<0.01);与I/R 24 h组比较,Dex 24 h组脊髓钙离子浓度显著降低(P<0.01)。与Sham 24 h组比较,I/R 24 h组大鼠脊髓CaSR和CAMKⅡ的蛋白与mRNA表达水平显著升高(P<0.01);Dex 24 h组大鼠脊髓组织CaSR与CAMKⅡ的mRNA和蛋白的表达水平显著降低(P<0.01)。结果表明Dex可下调CaSR和CAMKII的mRNA与蛋白表达水平,减轻钙超载,从而保护脊髓缺血再灌注损伤。该研究为Dexm减轻脊髓I/R损伤的临床应用提供了理论依据。

关键词：右美托咪定脊髓缺血再灌注 CaSR CAMKⅡ

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BVDV感染对小鼠巨噬细胞IFN-β相关信号分子的影响

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中国兽医学报 2023年第9期43卷 1828-1836页

作者：段明媚曹唱唱赵心怡陈斐周彬姜胜邵春艳周莹珊董婉玉杨杨王晓杜宋厚辉宋泉江浙江农林大学动物科技学院/动物医学学院、浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室/动物医学与健康管理浙江省国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300 山东省烟台市招远市辛庄畜牧兽医站山东烟台265400

为了探究致细胞病变型牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhealvirus,BVDV)对小鼠巨噬细胞IFN-β相关信号分子的影响,以0.1和3 MOI感染小鼠巨噬细胞RAW264.7,通过RT-qPCR、Western blot、ELISA等方法检测小鼠巨噬细胞中TLR37/TLR7、IRF3/IRF7、STAT1、IFN-β、ISG15/OAS1和USP18/SOCS1等因子的转录和表达水平差异,并对巨噬细胞中BVDV拷贝数进行检测。结果显示BVDV可以进入巨噬细胞细胞内,但病毒拷贝数不能随时间而增长。BVDV进入小鼠巨噬细胞先后上调TLR3和下调TLR7的转录水平,继而显著上调IRF3和IRF7转录水平,并呈现一定的剂量依赖性。STAT1和IFN-β的转录和表达也随BVDV感染而显著升高,而且IFN-β表达量随BVDV的病毒量和感染时间而增加。发挥抗病毒活性的ISG15和OAS1转录水平在BVDV感染前期出现显著升高,感染后期恢复正常,同时在感染后期干扰素负性调节因子USP18和SOCS1转录水平显著升高。所以致细胞病变型BVDV可以感染小鼠巨噬细胞,但不能复制,但可以通过TLR3/7-IRF3/7激活IFN相关信号通路,并接受负性调节因子的调控。

关键词：牛病毒性腹泻病毒小鼠巨噬细胞复制干扰素

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病原细菌调控丝裂原激活蛋白激酶信号介导先天免疫的机制研究进展

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微生物学通报 2022年第12期49卷 5298-5310页

作者：张念琦何展程昌勇宋厚辉浙江农林大学动物科技学院动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江杭州311300

信号传导途径使细胞能够对复杂的外界环境刺激及时做出反应,从而针对不同病原菌感染产生生物学效应。丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及其下游靶标作为将环境输入转化为大量细胞程序的最重要信号模块之一,... 详细信息

信号传导途径使细胞能够对复杂的外界环境刺激及时做出反应,从而针对不同病原菌感染产生生物学效应。丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)及其下游靶标作为将环境输入转化为大量细胞程序的最重要信号模块之一,在哺乳动物细胞中最为常见,几乎参与绝大多数细胞的生理和病理反应。MAPK响应各种环境压力刺激,包括细菌感染和炎症,以此调节宿主的免疫反应。近期研究表明,病原菌在感染期间会释放特定效应物或毒素来劫持MAPK通路,劫持方式分为两种,一种是通过降解关键蛋白影响信号传导,更主要的一种是影响宿主细胞翻译后修饰,如磷酸化、泛素化等来调节诸多细胞进程。本文讨论了MAPK在先天免疫中的调节激活过程,并研究病原细菌如何进化出复杂机制来操纵MAPK激活以增强自身感染,以及作为新型抗病原感染和肿瘤免疫治疗靶点的潜在作用。

关键词：丝裂原激活蛋白激酶先天免疫病原感染药物靶点

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减毒单增李斯特菌为载体的肿瘤免疫治疗研究进展

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农业生物技术学报 2021年第8期29卷 1622-1629页

作者：陈璐汪枫婷孙静陈中炜卫芳芳宋厚辉程昌勇浙江农林大学动物科技学院·动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是重要的人兽共患食源性胞内寄生菌,孕妇、儿童、老年人等免疫力低下者为易感人群,严重时可导致死亡。单增李斯特菌由于其独特的胞内感染特性可作为载体携带肿瘤相关抗原,感染机体后能刺激免疫系... 详细信息

单增李斯特菌(Listeria monocytogenes)是重要的人兽共患食源性胞内寄生菌,孕妇、儿童、老年人等免疫力低下者为易感人群,严重时可导致死亡。单增李斯特菌由于其独特的胞内感染特性可作为载体携带肿瘤相关抗原,感染机体后能刺激免疫系统产生强烈的细胞免疫反应,从而识别并清除肿瘤,越来越多研究证实李斯特菌有望成为肿瘤免疫治疗的理想工具。目前已经利用减毒单增李斯特菌作为载体开发了针对多种恶性肿瘤的疫苗,如宫颈癌疫苗、犬骨肉瘤疫苗,在临床试验中也表明了李斯特菌疫苗的有效性。本文对李斯特菌在肿瘤免疫治疗中的研究及临床试验进展进行了系统综述,有助于读者了解目前肿瘤治疗疫苗研究领域的最新技术和发展前景,为有效开发针对肿瘤防治的新策略和新技术提供了参考。

关键词：减毒单增李斯特菌细胞免疫疫苗载体肿瘤免疫治疗

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多重连接探针扩增技术(MLPA)在病原微生物检测与疾病诊断中的应用

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农业生物技术学报 2021年第10期29卷 2031-2042页

作者：王雨萌周柯邵春艳杨永春周莹珊宋厚辉浙江农林大学动物科技学院/动物医学院浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程实验室

多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是一种可以在单个反应中同时对50个靶基因进行定性和半定量分析的检测方法。其主要步骤包括靶序列DNA变性、探针和靶序列DNA杂交、连接酶连接探针、PCR... 详细信息

多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification, MLPA)是一种可以在单个反应中同时对50个靶基因进行定性和半定量分析的检测方法。其主要步骤包括靶序列DNA变性、探针和靶序列DNA杂交、连接酶连接探针、PCR扩增、毛细管电泳及数据分析。多重连接探针扩增技术已广泛应用于肿瘤的诊断与预后、遗传性疾病的基因检测、产前检测等领域。鉴于混合感染现象增加,敏感、特异和高通量检测方法是当前动物疾病检测中的急需,多重连接探针扩增技术在病原微生物的高通量检测领域显示出良好的应用前景。本文从多重连接探针扩增技术的原理和步骤、在病原微生物检测、肿瘤诊断和遗传性疾病诊断中的应用、优势和不足以及应用前景展望等方面进行综述,以期为MLPA技术在动物病原检测和疾病诊断中的应用和改良提供参考。

关键词：多重连接探针扩增技术(MLPA) 甲基化特异性MLPA(MS-MLPA) 病原体检测肿瘤诊断遗传疾病诊断

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基于猪流行性腹泻病毒基因Ⅱ型毒株S蛋白中和表位的间接ELISA和病毒中和试验的相关性分析

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农业生物技术学报 2022年第12期30卷 2464-2472页

作者：周一媚董婉玉王馨雨郑谋凤王志鹏祝徐航周莹珊杨永春宋厚辉王晓杜浙江农林大学动物科技学院·动物医学院/浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室/动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心/浙江省动物医学与健康管理国际科技合作基地/中澳动物健康大数据分析联合实验室浙江省瑞安市农业农村局

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）是一种由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的高度传染性、高致死率疾病，导致3～10日龄仔猪（Sus scrofa）严重腹泻，该病的防控主要依赖于母猪疫苗免疫... 详细信息

猪流行性腹泻（Porcine epidemic diarrhea, PED）是一种由猪流行性腹泻病毒（Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）引起的高度传染性、高致死率疾病，导致3～10日龄仔猪（Sus scrofa）严重腹泻，该病的防控主要依赖于母猪疫苗免疫后乳汁中和抗体的保护作用，而快速地、高通量检测中和抗体方法有利于该病的防控。本研究通过方阵滴定、ELISA反应条件筛选、敏感性试验、特异性试验、符合性试验和中和试验等，确定基于PEDV基因Ⅱ型S蛋白中和表位的间接ELISA反应条件：抗原最佳包被浓度为0.2μg/孔，血清的最佳稀释度为1∶100，血清最佳作用时间30 min，二抗最佳稀释度为1∶6 000，二抗最佳作用时间为60 min，底物最佳作用时间为10 min。该ELISA方法与临床常见病原（猪瘟病毒,伪狂犬病毒,猪繁殖与呼吸综合征病毒）的特异性抗体无交叉反应，组间和组内试验具有较好重复性。该ELISA方法与中和试验的结果关联分析表明，其直接正相关公式为：Y=0.370 8X+1.377 2(X为S/P值, Y为lg（1/中和效价-32）, R2=0.963)，相比中和试验的结果，本研究建立的ELISA方法敏感性为94.74%，特异性为91.67%,Kappa值为0.93。本研究建立的间接ELISA方法为临床PEDV中和抗体高通量检测和疫苗免疫效果评估提供了候选工具。

关键词：猪流行性腹泻病毒(PEDV) 间接ELISA 中和抗体相关性

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ALKBH5基因多态性及其与产蛋性状的关系

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养禽与禽病防治 2025年第2期 12-19页

作者：周琦璐巨星李诗如赵阿勇王芷筠浙江省畜禽绿色生态健康养殖应用技术研究重点实验室、动物健康互联网检测技术浙江省工程研究中心、浙江农林大学动物科技学院动物医学院杭州311300 华南农业大学动物科学学院广州510642

本研究以372只60周龄麻黄鸡的DNA为模版,通过设计引物,Sanger测序,以及位点分析,发现ALKBH5基因的第五外显子中存在6个SNPs位点,且均表现出不同程度的多态性。其中g.1112T>N发生四等位基因突变,g.984A>g、g.1033A>g、g.1112T&g... 详细信息

本研究以372只60周龄麻黄鸡的DNA为模版,通过设计引物,Sanger测序,以及位点分析,发现ALKBH5基因的第五外显子中存在6个SNPs位点,且均表现出不同程度的多态性。其中g.1112T>N发生四等位基因突变,g.984A>g、g.1033A>g、g.1112T>N、g.1194T>C位点与300日龄母本产蛋性能显著相关,g.1112T>N和g.1194T>C与390日龄母本产蛋性能显著相关。因此ALKBH5基因的6个SNP位点,可作为辅助选择优质繁殖性能蛋鸡的标记,为提高家禽产蛋性能和品种改良提供理论依据。

关键词： ALKBH5 SNP 麻黄鸡产蛋关联分析

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