检索结果-内蒙古大学图书馆

融合表达载体pET32a/Trx-EK-MrVIB的构建及在大肠杆菌中表达

基因组学与应用生物学 2015年第2期34卷 326-331页

作者：高炳淼刘云海彭超魏娜张俊清海南医学院药学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199 深圳华大基因研究院深圳518083

人工设计合成芋螺毒素基因Mr VIB来构建表达载体p ET32a/Trx-EK-Mr VIB,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S进行诱导表达。菌体经超声破碎后利用Ni-NTA琼脂糖柱进行亲和层析纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳分析融合蛋白表达。结果表明融合表达... 详细信息

人工设计合成芋螺毒素基因Mr VIB来构建表达载体p ET32a/Trx-EK-Mr VIB,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S进行诱导表达。菌体经超声破碎后利用Ni-NTA琼脂糖柱进行亲和层析纯化融合蛋白,SDS-PAGE电泳分析融合蛋白表达。结果表明融合表达载体p ET32a/Trx-EK-Mr VIB经PCR扩增和测序鉴定具有正确的开放阅读框。SDS-PAGE电泳显示融合蛋白在大肠杆菌中获得高效可溶性表达,经一步亲和层析获得纯度大于90%的融合芋螺毒素达73.6 mg/L。本文成功构建了融合表达载体p ET32a/Trx-EK-Mr VIB,融合芋螺毒素Trx-EK-Mr VIB在大肠杆菌中获得高效可溶性表达。

关键词：芋螺毒素大肠杆菌基因工程融合表达亲和层析

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南药益智废弃物综合利用现状与分析

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时珍国医国药 2015年第6期26卷 1473-1475页

作者：高炳淼魏娜王勇李永辉田建平谭银丰钟霞张俊清海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199

益智为海南道地药材之一,也是我国四大南药之一,主要用于脾寒泻泄、腹中冷痛、口多唾涎、肾虚遗尿、小便频数、遗精白浊等。益智的主要药用部位是利用其干燥成熟果实种子益智仁,采摘后的益智叶和根茎,以及在加工过程中产生的益智果肉和... 详细信息

益智为海南道地药材之一,也是我国四大南药之一,主要用于脾寒泻泄、腹中冷痛、口多唾涎、肾虚遗尿、小便频数、遗精白浊等。益智的主要药用部位是利用其干燥成熟果实种子益智仁,采摘后的益智叶和根茎,以及在加工过程中产生的益智果肉和果壳等都作为废弃物。阐述和分析益智的叶、根茎和果壳等非药用部位的主要活性物质,为在采收以及加工过程中产生的益智废弃物资源的综合利用提供理论依据。最后探讨了南药益智废弃物在综合利用方面存在的一些问题,并提出相应的发展对策。

关键词：南药益智废弃物综合利用

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两种方法提取的柠檬草挥发油化学成分分析

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食品工业 2015年第4期36卷 280-283页

作者：王勇胡雄飞孔杜林海南医学院药学院海口571199 海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199

采用超临界CO2萃取法(SFE)和水蒸气蒸馏法(SD)提取柠檬草挥发油,用气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行分离鉴定,并采用峰面积归一化法计算各组分相对百分含量,分析比较了2种不同提取方法提取的柠檬草挥发油化学成分的差异。从柠檬... 详细信息

采用超临界CO2萃取法(SFE)和水蒸气蒸馏法(SD)提取柠檬草挥发油,用气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行分离鉴定,并采用峰面积归一化法计算各组分相对百分含量,分析比较了2种不同提取方法提取的柠檬草挥发油化学成分的差异。从柠檬草超临界CO2流体萃取物中初步鉴定了40个成分,主要成分为亚油酸(28.82%)、香叶醛(13.52%)、棕榈酸(12.71%)、橙花醛(10.83%)、硬脂酸(3.23%)、柠檬醇(2.65%)、乙酸香叶酯(2.03%);从柠檬草水蒸气蒸馏法提取的挥发油中鉴定了35个成分,主要成分为香叶醛(32.86%)、橙花醛(28.22%)、乙酸香叶酯(7.93%)、橙花醇(4.47%)、橙花叔醇(4.13%)、苯乙酸橙花酯(2.44%);两者共有成分21个。两种方法提取的柠檬草挥发油组分及其成分含量存在较大差异,超临界CO2流体萃取法提取的挥发油能更真实、全面地反映柠檬草中的化学成分。

关键词：柠檬草挥发油气相色谱-质谱法(GC-MS) 超临界萃取法水蒸气蒸馏法

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重组芋螺毒素His-Xa-MrVIB分泌表达研究

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生物技术 2015年第1期25卷 66-70页

作者：高炳淼刘云海魏娜谭银丰钟霞张俊清海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199

[目的]利用简单快速的基因工程法来生产富含二硫键的芋螺毒素Mr VIB,寻找有效合成具有天然活性芋螺毒素的新途径。[方法]人工设计合成芋螺毒素Mr VIB基因引物来构建表达载体p ET22b(+)/His-Xa-Mr VIB,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S... 详细信息

[目的]利用简单快速的基因工程法来生产富含二硫键的芋螺毒素Mr VIB,寻找有效合成具有天然活性芋螺毒素的新途径。[方法]人工设计合成芋螺毒素Mr VIB基因引物来构建表达载体p ET22b(+)/His-Xa-Mr VIB,将其转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S进行诱导表达。再利用Ni-NTA琼脂糖柱进行亲和层析纯化重组蛋白,Tricine-SDS-PAGE电泳分析重组蛋白表达形式。[结果]重组芋螺毒素His-Xa-Mr VIB(r His-Xa-Mr VIB)在大肠杆菌中获得有效分泌表达,经一步亲和层析获得纯度大于90%的重组芋螺毒素。[结论]基因工程方法能够有效分泌表达芋螺毒素Mr VIB,解决化学合成芋螺毒素产量低、成本高、难以纯化等问题。

关键词：芋螺毒素大肠杆菌基因工程分泌表达分离纯化

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南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化

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生物技术 2015年第3期25卷 251-255页

作者：高炳淼潘坤田建平唐天乐魏娜张俊清海南医学院药学院海南海口571199 海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199 海南医学院热带医学与检验医学院海南海口571199

[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合... 详细信息

[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。

关键词：益智 AFLP-PCR 体系优化引物筛选

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GC-MS分析海南白沙产裸花紫珠叶挥发油的化学成分

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中国实验方剂学杂志 2015年第2期21卷 94-98页

作者：王勇孔杜林董琳李永辉杨卫丽海南医学院药学院海口571199 海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199 海口市黎族医药重点实验室海口571199

目的:研究海南白沙产裸花紫珠叶挥发油中的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法从裸花紫珠叶中提取挥发油,并通过气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行鉴定,同时采用峰面积归一化法确定各成分... 详细信息

目的:研究海南白沙产裸花紫珠叶挥发油中的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法从裸花紫珠叶中提取挥发油,并通过气相色谱-质谱联用技术对其化学成分进行测定,结合计算机检索技术对分离的化合物进行鉴定,同时采用峰面积归一化法确定各成分的相对百分含量。结果:从海南白沙产裸花紫珠挥发油中共分离出76个组分,鉴定了其中的70种成分,所鉴定的成分占总挥发油成分的98.69%,其中相对百分含量较高的成分有β-蒎烯(20.70%),α-蒎烯(9.41%),石竹烯氧化物(6.90%),石竹烯(6.65%),邻伞花烃(6.62%),反式-4-侧柏醇(5.85%)和桃金娘烯醇(5.61%)等。结论:海南白沙产裸花紫珠挥发油的化学成分主要为单萜及其含氧衍生物。

关键词：裸花紫珠挥发油气相色谱-质谱海南

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多成分综合评分法优化高良姜乙醇提取工艺研究

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中成药 2015年第11期37卷 2402-2407页

作者：程守前李永辉陈峰魏娜王勇谭银丰李海龙张小坡张俊清李友宾南京中医药大学药学院江苏南京210023 海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199

目的优化高良姜的乙醇提取工艺。方法建立高效液相色谱法,同时测定高良姜中5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-3-庚酮、高良姜素、山柰素、7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-4-烯-3-庚酮和1,7-二苯基-5-羟基-3-庚酮5种成分,采用L9(... 详细信息

目的优化高良姜的乙醇提取工艺。方法建立高效液相色谱法,同时测定高良姜中5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-3-庚酮、高良姜素、山柰素、7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-4-烯-3-庚酮和1,7-二苯基-5-羟基-3-庚酮5种成分,采用L9(34)正交试验法,以上述5种成分含有量的综合评分为指标,考察乙醇体积分数、提取时间、提取次数和料液比4个影响因素,优选高良姜的醇提工艺。结果提取次数对高良姜的提取工艺有显著性影响,优选出的提取工艺为加10倍量80%乙醇,提取3次,每次1 h;高良姜中5种成分的转移率分别为5-羟基-7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-3-庚酮91.7%、高良姜素92.3%、山柰素85.0%、7-(4-羟基-3-甲氧基苯基)-1-苯基-4-烯-3-庚酮94.8%、1,7-二苯基-5-羟基-3-庚酮93.9%。结论多成分综合评分法优选出的提取工艺能对高良姜药材进行较完全地提取,可用于在线监控。

关键词：高良姜正交设计综合评分法提取工艺

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番木瓜天然保鲜剂的制备工艺

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食品科技 2015年第12期40卷 251-255页

作者：程守前赖伟勇翁少端李廷周谭银丰李海龙张俊清李友宾海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海口571199 海南寿南山参业有限公司海口570100

以高良姜复配保鲜剂对番木瓜常温贮藏效果、复配保鲜剂中高良姜素的含量和总挥发油的含量为考察指标,采用多指标综合评分的方法对数据进行分析,优选出了复配药材的最佳配比和最优提取工艺。结果表明,高良姜复配保鲜剂能很好地降低番木... 详细信息

以高良姜复配保鲜剂对番木瓜常温贮藏效果、复配保鲜剂中高良姜素的含量和总挥发油的含量为考察指标,采用多指标综合评分的方法对数据进行分析,优选出了复配药材的最佳配比和最优提取工艺。结果表明,高良姜复配保鲜剂能很好地降低番木瓜常温贮藏时的腐烂率,和对照组相比,处理组达到了极显著性差异(P<0.01);得出复配保鲜剂的最佳配比(质量比)为高良姜:肉豆蔻:藿香:花椒(10:5:7:6);测得高良姜复配保鲜剂中高良姜素的含量为0.87 mg/g,总挥发油的百分含量为1.2%;复配保鲜剂的最优提取工艺为用水提取3次,提取时间分别为150、120、90 min,溶剂倍数为6倍。多指标综合评分表明,高良姜复配保鲜剂有较好的抑菌保鲜能力,以及稳定可行的药效评价指标和质量控制指标,具有进一步开发新型天然保鲜剂的潜力。

关键词：中药复配保鲜剂番木瓜常温保鲜高良姜

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番木瓜籽油的超临界萃取工艺及其脂肪酸组成分析

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广州化工 2015年第18期43卷 50-51,71页

作者：秦贞苗赖伟勇张俊清康胜利王勇海南医学院药学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199

以番木瓜籽油的萃取得率为指标,采用正交试验,考察萃取压力、温度和时间对萃取得率的影响,对超临界CO2流体萃取番木瓜籽油的工艺条件进行优选,并采用气质联用对其脂肪酸组成进行分析。结果,番木瓜籽油超临界萃取的较佳条件为:萃取压力为... 详细信息

以番木瓜籽油的萃取得率为指标,采用正交试验,考察萃取压力、温度和时间对萃取得率的影响,对超临界CO2流体萃取番木瓜籽油的工艺条件进行优选,并采用气质联用对其脂肪酸组成进行分析。结果,番木瓜籽油超临界萃取的较佳条件为:萃取压力为25 MPa,萃取温度为55℃,萃取时间为120 min;在此条件下,番木瓜籽油的平均萃取得率为30.0%,油中的主要脂肪酸为油酸(50.37%)、棕榈酸(19.61%)、亚油酸(5.91%)和硬脂酸(5.28%)。

关键词：番木瓜籽油正交试验超临界流体萃取气相色谱-质谱分析

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野外保存对益智叶片基因组DNA的影响

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贵州农业科学 2015年第7期43卷 19-22,25页

作者：高炳淼王朝何萍田建平张俊清魏娜海南医学院海南省热带药用植物研究开发重点实验室海南海口571199

为获得高质量的益智基因组DNA寻找一种简单可行的野外益智鲜叶保存方法,利用植物基因组提取试剂盒法提取益智基因组DNA,以新鲜叶片为对照及DNA的纯度、浓度、琼脂糖凝胶电泳和ITSPCR扩增效果为评价指标,比较室温阴干、室外晒干、硅胶干... 详细信息

为获得高质量的益智基因组DNA寻找一种简单可行的野外益智鲜叶保存方法,利用植物基因组提取试剂盒法提取益智基因组DNA,以新鲜叶片为对照及DNA的纯度、浓度、琼脂糖凝胶电泳和ITSPCR扩增效果为评价指标,比较室温阴干、室外晒干、硅胶干燥和液氮保存4种鲜叶保存方法对提取益智基因组DNA效果的影响。结果表明:4种保存方法均可获得益智基因组DNA且ITS-PCR均获得约700bp的PCR产物,其中液氮保存5d的叶片提取DNA条带清晰明亮,室温阴干、硅胶干燥和室外晒干保存方法提取的基因组DNA分别在4d、3d和2d后开始发生降解,不同保存方法效果依次是液氮保存>室温阴干>硅胶保存>室外晒干。在远距离野外资源调查和收集时,采用室温阴干保存新鲜益智叶片是经济简单可行的野外保存方法。

关键词：益智 DNA提取 PCR 野外保存方法

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