检索结果-内蒙古大学图书馆

中国动物传染病学报 2025年

作者：尹梦丽刘景难尹欣悦高恒赟马忠臣陈创夫石河子大学动物科技学院绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心动物健康养殖国际联合研究中心昌吉州动物疾病预防控制中心伊犁州动物疾病控制与诊断中心

构建牛轮状病毒（BRV）VP4基因重组表达载体，获得重组蛋白并对其免疫效果初步评价，为开发BRV候选基因工程疫苗奠定基础。对BRV VP4基因序列进行密码子偏好优化，构建BRV VP4大肠杆菌原核表达系统，将重组质粒转化到BL21（DE3）感受态... 详细信息

构建牛轮状病毒（BRV）VP4基因重组表达载体，获得重组蛋白并对其免疫效果初步评价，为开发BRV候选基因工程疫苗奠定基础。对BRV VP4基因序列进行密码子偏好优化，构建BRV VP4大肠杆菌原核表达系统，将重组质粒转化到BL21（DE3）感受态细胞，IPTG诱导表达后分析重组蛋白表达形式。用纯化后重组蛋白与弗氏佐剂混合免疫小鼠。间接ELISA方法检测血清中特异性抗体IgG及亚型IgG1和IgG2a水平；最后通过中和试验检测血清中和抗体滴度。结果显示：本研究成功构建了VP4重组蛋白的原核表达系统；VP4重组蛋白表达大小约为80 kDa，与理论大小相符且表达形式为包涵体；VP4重组蛋白具有较高的反应原性；VP4重组蛋白免疫小鼠后能刺激其产生特异性IgG抗体，IgG1和IgG2a检测结果显示，免疫后IgG2a/IgG1的比值均大于1，即偏向于刺激小鼠Th1型细胞免疫。血清中和抗体水平随免疫天数具有增长趋势，42 d时达到顶峰，效价为1:92。本研究成功获得了VP4重组蛋白并制备了VP4蛋白亚单位疫苗，且在小鼠体内具有较好的免疫效果。

关键词：犊牛腹泻病牛轮状病毒 VP4蛋白原核表达中和试验

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布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法的建立与初步验证

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中国人兽共患病学报 2025年第03期 255-262页

作者：姚梦欣彭泽宇任文浩徐艺玫郭伟陈创夫马忠臣王勇石河子大学动物科技学院动物健康养殖国际联合研究中心绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心福建圣维生物科技有限公司

目的建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体，优化并确定最佳抗体包被时间和浓度，最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值；通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的... 详细信息

目的建立灵敏、特异的布鲁氏菌双抗体夹心ELISA检测方法。方法筛选用于布鲁氏菌检测的单克隆捕获抗体和检测抗体，优化并确定最佳抗体包被时间和浓度，最佳封闭液、封闭时间和阴阳性临界值；通过检验其他易与布鲁氏菌发生交叉反应的细菌来验证该方法的特异性；通过对灭活布鲁氏菌梯度稀释液的检测，验证该方法的灵敏性；将该夹心ELISA检测结果与试管凝集和qPCR检测结果进行比较。结果筛选出的捕获抗体为4A12,检测抗体为6C12。试验分析显示，捕获抗体4A12的最佳包被浓度为5μg/mL,检测抗体6C12的最佳稀释比为1∶2 000。该研究的最佳包被条件为4℃过夜、5%脱脂奶粉封闭、封闭时间2 h。该研究建立的双抗体夹心ELISA方法只与布鲁氏菌发生反应，与其他细菌未发生反应；布鲁氏菌灭活菌液浓度稀释到1×10～5 CFU/mL时仍能检测出。批内、批间变异系数均小于10%。结论该研究成功建立了布鲁氏菌双抗夹心ELISA检测方法，该方法具有良好的特异性与灵敏性，为布鲁氏菌病的精确诊断和有效防控提供有效途径。

关键词：单克隆抗体布鲁氏菌双抗夹心ELISA法诊断

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oar-miR-103和oar-miR-107通过靶向IL-1β基因区域调节其表达

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动物医学进展 2025年第6期46卷 31-35页

作者：高之煜顾兰英范文雨曹鑫艳陈创夫肖非易继海盛金良张彦兵孙延鸣石河子大学动物科技学院新疆石河子832003 新疆泰昆集团股份有限公司新疆昌吉831203

为确定oar-miR-103和oar-miR-107靶向IL-1β基因的区域及结合能力,验证绵羊oar-miR-103和oar-miR-107对绵羊IL-1β表达的调控作用,用miRanda软件分析oar-miR-103、oar-miR-107靶向IL-1β基因的具体区域和结合能力;将IL-1β基因插入PGL3-promoter荧光素酶报告基因载体XbaⅠ酶切位点,分别将miR-NC、miR-103和miR-107模拟物与荧光素酶质粒共转染,通过双荧光素酶报告试验分析oar-miR-103和oar-miR-107与IL-1β基因区域靶向关系;分离原代绵羊肺泡巨噬细胞,miR-NC、miR-103和miR-107模拟物分别转染原代肺泡巨噬细胞,转染36 h后,通过实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测各组细胞中IL-1β表达水平。结果显示,oar-miR-103和oar-miR-107分别靶向IL-1β基因2个、3个区域;成功构建了荧光素酶报告载体pGL3-promoter-IL-1β;双荧光素酶试验显示,与miR-NC组相比,oar-miR-103和oar-miR-107两组均使pGL3-promoter-IL-1β活性显著下降(P<0.01);与miR-NC组相比,oar-miR-107显著抑制了巨噬细胞IL-1βmRNA转录表达(P<0.05)。说明oar-miR-103和oar-miR-107可通过靶向IL-1β基因区域调节其表达,为解析IL-1β表达机理积累了资料。

关键词：白介素1β microRNAs miRanda 荧光素酶报告基因

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PRRSV重组非结构蛋白NSP1表达及免疫效果评价

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微生物学报 2025年第5期 2267-2279页

作者：王文星李红欢顾晓晓刘紫威吴澳迪徐明国马忠臣陈创夫石河子大学动物科技学院石河子大学绵羊健康养殖与人兽共患病防控协同创新中心石河子大学动物健康养殖国际联合研究中心

【目的】表达并获取猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV) NADC 30毒株的重组非结构蛋白NSP1，评估其在小鼠体内的免疫效果，并探究PRRSV非结构蛋白作为疫苗抗原的潜在应用价值。【方... 详细信息

【目的】表达并获取猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus, PRRSV) NADC 30毒株的重组非结构蛋白NSP1，评估其在小鼠体内的免疫效果，并探究PRRSV非结构蛋白作为疫苗抗原的潜在应用价值。【方法】利用原核表达系统表达PRRSV NADC30毒株的NSP1蛋白，纯化后通过Western blotting验证NSP1的体外表达及其抗体反应性；将纯化后的重组NSP1蛋白免疫小鼠，测定其在小鼠体内诱导的细胞免疫和体液免疫水平；通过病毒中和试验评价重组蛋白NSP1诱导的中和抗体水平。【结果】将NSP1目的基因连接至大肠杆菌pET-28a载体并进行原核表达，Western blotting结果显示，重组非结构蛋白NSP1能够正确表达，并且具有抗体反应性。经鉴定正确的重组蛋白NSP1免疫小鼠后，能够提高小鼠脾淋巴细胞中IFN-γ和TNF-α的表达水平，刺激机体产生细胞免疫应答。同时，重组蛋白NSP1还能够显著增强小鼠脾淋巴细胞的增殖能力。ELISA检测结果显示，免疫小鼠血清中的特异性抗体水平升高，进一步分析特异性抗体亚型(IgG2a和IgG1)发现，重组蛋白NSP1刺激机体产生的免疫类型偏向于Th2型体液免疫；病毒中和试验表明，重组蛋白NSP1具有良好的病毒中和能力，在免疫后28 d时中和效价为1:37,42 d时中和效价为1:31，均显著高于PBS对照组，与商品化疫苗组无差异。【结论】PRRSV重组非结构蛋白NSP1免疫小鼠后能够刺激机体产生细胞免疫应答与体液免疫应答，并且具有良好的病毒中和能力，为新型PRRSV疫苗的开发提供了潜在的新思路。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒重组蛋白NSP1 免疫评价疫苗

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高效抑制O型口蹄疫病毒shRNA分子的筛选与验证

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中国兽医学报 2012年第1期32卷 13-17,22页

作者：马铈委陈创夫乔军新疆地方与民族发病教育部重点实验室新疆石河子832003 石河子大学动物科技学院新疆石河子832003

针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease veirus,FMDV)基因组高度保守的VP1和3D区段,选取了120个干扰靶位,根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的82个shRNA表达质粒;通过细胞攻毒试验,提取细胞毒液RNA,然后RT-PCR,最后real-time PC... 详细信息

针对O型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease veirus,FMDV)基因组高度保守的VP1和3D区段,选取了120个干扰靶位,根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的82个shRNA表达质粒;通过细胞攻毒试验,提取细胞毒液RNA,然后RT-PCR,最后real-time PCR检测病毒和shRNA的表达量。结果显示,干扰质粒组基因表达抑制率为63%～96.8%,其中pSiRe-Zs-VP1-54和pSiRe-Zs-3D-12等2个表达质粒抑制效率最好,分别为96.8%和87%,表明这2个表达质粒能够明显抑制FMDV的复制。

关键词：口蹄疫病毒 RNAi shRNA序列筛选

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布鲁杆菌病致病机制研究现状与趋势

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中华地方病学杂志 2013年第5期32卷 473-474页

作者：陈创夫王远志石河子大学新疆地方与民族高发病教育部重点实验室 832003

布鲁杆菌病（简称布病）是由布鲁杆菌属细菌引起的一种人畜共患传染病。近年来，我国布病疫情形势严峻，每年有2～4万人的新发病例。布鲁杆菌为兼性胞内寄生菌，人感染后常表现为慢性持续性感染，不易治愈，目前尚没有安全、有效的人用... 详细信息

布鲁杆菌病（简称布病）是由布鲁杆菌属细菌引起的一种人畜共患传染病。近年来，我国布病疫情形势严峻，每年有2～4万人的新发病例。布鲁杆菌为兼性胞内寄生菌，人感染后常表现为慢性持续性感染，不易治愈，目前尚没有安全、有效的人用疫苗。药物治疗对慢性感染患者治愈率低。疫苗接种和药物治疗是布病防控的重要手段，布病病原体入侵、胞内寄生、致病和免疫逃避的分子机制至今尚不完全清楚。这已成为制约研发有效疫苗和药物的瓶颈。因此．开展布鲁杆菌致病机制研究．不仅是病原生物学和免疫学研究的重要科学问题，更是研发布鲁杆菌高效疫苗、药物和防控政策制定的科学基础。

关键词：布鲁杆菌功能基因组胞内寄生免疫逃逸

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高分辨率溶解曲线分析结合COLD-PCR快速检测绵羊低丰度FecB基因

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中国畜牧杂志 2017年第6期53卷 122-126,131页

作者：李国忠陈创夫新疆石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为Fec B基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术。实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子... 详细信息

本文利用高分辨率熔解曲线分析结合COLD-PCR建立绵羊骨形态发生蛋白受体IB(BMPR-IB)基因低丰度A746G点突变的检测方法,为Fec B基因大面积高通量筛查提供方便快捷和低成本的检测技术。实验分别提取绵羊BMPR-IB基因A746G点突变阳性纯合子和阴性纯合子的基因组,分别PCR扩增223 bp的目的片段,测定浓度和纯度后,分别稀释至0.05 ng/μL,将阳性纯合子用阴性纯合子进行系列稀释作为模板标准品。根据模板标准品序列设计合成3对引物,以标准品为模板进行COLD-PCR,其产物进行高分辨率熔解曲线分析,生成的归一化温度转移差异图(Normlized and Temp-Shifted Differines Plot)即为标准曲线图,作为待测样品Fec B检测的依据,对其可靠重复性做了进一步验证。结果表明:2对引物COLD-PCR HRM标准曲线图曲线分离清晰可靠,检测下限均为0.5%,与传统q PCR HRM相比,灵敏度提高到4倍。本实验建立的绵羊低丰度Fec B基因检测方法可以用于绵羊Fec B基因大面积高通量快速筛查工作。

关键词：绵羊 FecB基因 COLD-PCR 高分辨率熔解曲线分析

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犬瘟热病毒TN野毒株核蛋白基因的克隆与序列分析

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中国兽医科技 2004年第4期34卷 24-28页

作者：孟庆玲乔军陈创夫塔里木农垦大学动物科技学院新疆阿拉尔843300 石河子大学动物科技学院新疆石河子833200

根据GenBank中收录的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株核蛋白基因(N)序列,设计了1对特异性引物,用该引物对分离的TN野毒株进行了RT PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T质粒连接,得到重组质粒pTN。经核苷酸序列测定,CDVTN株N基因... 详细信息

根据GenBank中收录的犬瘟热病毒(CDV)Onderstepoort株核蛋白基因(N)序列,设计了1对特异性引物,用该引物对分离的TN野毒株进行了RT PCR扩增;将扩增得到的PCR片段纯化后与pGEM T质粒连接,得到重组质粒pTN。经核苷酸序列测定,CDVTN株N基因的ORF全长1569bp,编码523个氨基酸;将TN野毒株与GenBank中收录的其他CDV毒株进行比较,N基因核苷酸序列的同源性为94%～99%,推导的N蛋白氨基酸序列的同源性为97%～99%。TN株与Onderstepoort疫苗株氨基酸序列的差异主要集中在N端(17～159位)和C端(408～519位),中间的区域则高度保守。此外,在CDVN蛋白N端281～289位上也发现存在与麻疹病毒(MV)N蛋白完全相同的Y P A L G L H E F9肽序列,推测可能是诱导CTL活性的靶蛋白的抗原表位之一。氨基酸组成分析发现,推导的N蛋白氨基酸序列中亮氨酸、丝氨酸和异亮氨酸所占比例很高,提示该蛋白具有高度螺旋和缠绕的分子结构。

关键词：犬瘟热病毒 TN野毒株核蛋白基因克隆序列分析分子结构氨基酸 CDV

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金黄色葡萄球菌5型荚膜多糖的提取纯化及生物学特性研究

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黑龙江畜牧兽医 2015年第3期 142-144,233页

作者：宋战辉陈创夫石河子大学动物科技学院新疆石河子832000

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为环境常在菌,是人和动物的重要致病菌,是奶牛乳房炎的主要致病菌之一。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离到的致病菌近一半是金黄色葡萄球菌,这些分离菌株中94%-100%含有荚膜多糖（Cp）[1]。金黄色... 详细信息

金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为环境常在菌,是人和动物的重要致病菌,是奶牛乳房炎的主要致病菌之一。从患乳腺炎的奶牛乳汁中分离到的致病菌近一半是金黄色葡萄球菌,这些分离菌株中94%-100%含有荚膜多糖（Cp）[1]。金黄色葡萄球菌荚膜多糖共有11种血清型,其中5型和8型荚膜多糖约占金黄色葡萄球菌临床分离菌株的70％。

关键词：金黄色葡萄球菌荚膜多糖牛乳房炎临床分离菌株牛乳汁血清型常在菌溶葡萄球菌酶免疫原性生物学特性

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羊的遗传性甲状腺肿病研究进展

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黑龙江畜牧兽医 1992年第10期 33-35页

作者：刘永庆陈创夫解放军兽医大学长春130062

1 概述绵羊及山羊的甲状腺肿病一般认为系碘缺乏或致甲状腺肿物质所引起。然而,koch和Watson等推测山羊、绵羊所发生的先天性甲状腺肿可能是遗传性的.但都未对发病机理做深入的研究,亦未提出足够的遗传学依据。

关键词：羊病遗传性甲状腺肿

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